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M3受体激动剂通过AC-cAMP-PKA信号途径对I/R大鼠的影响
目的:探讨M3受体激动剂胆碱(choline)通过AC-cAMP-PKA信号途径对缺血/再灌注损伤(I/R)大鼠的影响.方法:采用Langendorff灌注系统,建立离体大鼠全心缺血/再灌注损伤模型,分别检测细胞内cAMP水平和腺苷酸环化酶(AC)活性变化,并测量心肌梗死面积.结果:choline组较I/R组AC活性降低(P＜0.01),cAMP含量减少(P＜0.01),心梗面积明显缩小(P＜0.01).结论:M3受体激动剂choline通过抑制AC-cAMP-PKA信号途径对I/R离体大鼠心肌具有保护作用.
关键词： M3受体 胆碱 AC-cAMP-PKA信号途径 缺血/再灌注损伤 -
隔盐隔姜灸"神阙"穴对逼尿肌反射亢进大鼠尿动力及逼尿肌M2、M3受体蛋白表达的影响
目的:探讨隔盐隔姜灸"神阙"穴对逼尿肌反射亢进的效应及其作用机制.方法:成年雌性SD大鼠30只,其中20只大鼠采用T9完全脊髓横断方法建立逼尿肌反射亢进模型后随机分为模型组(10只)和艾灸组(10只),余10只作为假手术组行假脊髓横断手术.艾灸组大鼠出现尿失禁(约造模2周)后,给以隔盐隔姜灸"神阙"穴治疗,每次灸3壮,每日1次,连续治疗7 d.各组在干预结束后,进行尿流动力学检测,之后取膀胱逼尿肌,采用免疫蛋白印迹法检测M2、M3受体蛋白表达情况.结果:与假手术组大鼠相比,模型组大鼠排尿间期明显较短(P<0.01),大膀胱内压明显较高(P<0.01),膀胱逼尿肌M2受体蛋白表达显著升高(P<0.05),M3受体蛋白表达无明显变化(P>0.05);与模型组相比,艾灸组大鼠排尿间期明显较长(P<0.01),大膀胱内压明显降低(P<0.01),膀胱逼尿肌M2受体蛋白表达显著下降(P<0.05),而M3受体蛋白表达无明显变化(P>0.05);与假手术组相比,艾灸组以上指标差异均无统计学意义(均P>0.05).结论:隔盐隔姜灸"神阙"穴能抑制脊髓横断大鼠的膀胱过度活动状态,其作用机制可能与减少膀胱逼尿肌M2受体蛋白的表达、抑制逼尿肌的过度收缩有关.
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激动M3-mAchR对乌头碱诱发大鼠心律失常的保护机制的研究
目的 通过乌头碱诱导的大鼠心律失常模型,研究匹罗卡品对心律失常的可能保护机制.方法 32只Wistar大鼠,雌雄不限,随机分成4组:模型组、4 -二甲基氨基吡啶(4 -DAMP)组、匹罗卡品组、匹罗卡品+4 -DAMP组.4-DAMP组和匹罗卡品组大鼠,在股静脉静注乌头碱之前,分别提前5 min静注4-DAMP(0.12 μg/kg)和匹罗卡品(0.2 mg/kg).匹罗卡品+4-DAMP组大鼠,先给与M3-mAChR拮抗剂4-DAMP,5 min之后再给与匹罗卡品,再5 min之后,用灌流泵经大鼠股静脉灌输乌头碱(0.06 μg/min)诱发心律失常.观察每组大鼠的心律失常的严重程度,直至实验大鼠死亡.比较四组大鼠心律失常发生的起始时间、心肌室速和室颤发生时程、Mest评分和存活时间.采用激光共聚焦显微镜观察分离的心肌细胞内钙浓度变化.结果 与模型组比较,匹罗卡品显著延迟大鼠心律失常发生的起始时间(P <0.001),减少大鼠心肌室速发生时程(P <0.001)和室颤的发生时程(P <0.001),降低心律失常的严重性和Mest评分(P <0.001),增加大鼠的存活时间(P <0.001).预先给与匹罗卡品能够显著降低乌头碱诱导的心肌细胞发生的钙浓度的增加(P <0.05),与匹罗卡品组比较M3-mAchR选择性拮抗剂4-DAMP能部分阻断匹罗卡品对心律失常的保护作用(P <0.001),但4-DAMP本身对乌头碱诱导的心律失常并没有保护作用(P >0.05).结论 匹罗卡品对乌头碱诱导的大鼠心律失常具有保护作用,这种作用可能是通过激活 M3 -mAChR产生的,其机制可能与Ca2+有关.
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正常人和原发性开角型青光眼患者小梁网M3受体的表达
目的研究正常人和晚期原发性开角型青光眼(Primary open angle glaucoma,POAG)患者小梁网M3受体的表达,探讨POAG患者小梁网的病理生理改变.方法取5例正常人及10例晚期POAG患者小梁网组织标本,应用免疫组化方法检测小梁细胞M3受体,并利用计算机图像分析系统对检测结果进行分析.结果 5例正常人的小梁网组织标本有M3受体表达,阳性细胞主要分布在葡萄膜小梁网处,前至Schwalbe线,后达巩膜突.晚期POAG患者小梁网组织标本中,小梁细胞数量明显减少,M3受体阳性细胞亦相应减少且散在分布,部分标本甚至无阳性M3受体表达.结论正常人小梁网细胞M3受体表达阳性,晚期POAG患者小梁网M3受体阳性细胞数量明显减少且分布不规则.
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心律失常发病机制研究进展
心律失常是心血管疾病常见的临床表现形式,尤其是室性心动过速、心室颤动等恶性心律失常,不但加重原有心脏疾病,还可诱发心源性猝死.目前抗心律失常药物的疗效并不十分理想,总有效率只有30% ～60%.人们对心律失常作用机制的认识仍有限,因此,揭示心律失常发生的深层机制,寻找新的作用靶点是抗心律失常研究领域的重点、难点.近年人们发现心房特异性钾离子通道电流IKur、IKAch等参与了心房颤动,这使心房颤动治疗的研究向前推进一步.钙渗漏、缝隙连接蛋白及钙通道自身抗体在心律失常发生中发挥重要作用.这些发现为开发更有效的抗心律失常药物提供了理论基础.近年研究发现,一类调控基因的小分子RNA(microRNA,miRNA)在心血管疾病的发生、发展中起重要作用,特别是对心律失常及其引起的猝死起关键作用.miR-1、miR-133、miR-590等对心肌缺血、心肌梗死伴随的心律失常表现出明显调控作用.miRNA的生物学特性是同时对多个靶点具有调控作用,这使其具有成为理想抗心律失常靶点的潜力,为心律失常及猝死的防治带来希望.
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M3受体对体外H2O2诱导大鼠心肌细胞凋亡的保护作用
目的探讨M3受体激动对H2O2诱导的大鼠培养心肌细胞凋亡的作用,进一步阐明其机制.方法末端标记法(TUNEL)进行细胞凋亡检测;免疫组化方法检测Bcl-2和Fas的表达;共聚焦显微镜观察[Ca2+]i荧光强度变化.结果 M3受体激动剂胆碱(10 mmol·L-1)可减少H2O2诱导的心肌细胞凋亡的数量,并可增加心肌Bcl-2的表达,减少Fas表达,抑制H2O2诱导的[Ca2+]i荧光强度的升高.但预先应用4DAMP(10 nmol·L-1)阻断M3受体可逆转胆碱作用.结论激动M3受体对H2O2诱导的心肌细胞凋亡有保护作用,其机制可能与Bcl-2和Fas表达以及下调[Ca2+]i有关.
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M3受体与大鼠缺血性心肌细胞凋亡关系的研究
目的观察M3受体对大鼠缺血性心肌细胞凋亡的作用及其机制.方法结扎大鼠左冠状动脉前降支建立急性心肌缺血模型,给予M3受体激动剂胆碱或阻断剂4DAMP进行干预,观察M3受体对其的影响.结果缺血前15 mln iv胆碱10 mg·kg-1可提高血清超氧化物歧化酶(SOD)活力,降低丙二醛(MDA)含量,减少凋亡细胞的数量(P＜0.01),并可增加Bel-2表达,减少Fas表达.预先5min iv 4DAMP 0.12mg·kg-1阻断心肌M3受体可逆转胆碱的作用.结论激动M3受体对结扎大鼠冠状动脉诱导的心肌损伤有保护作用,其机制可能与调节Bcl-2和Fas表达从而抑制心肌细胞凋亡有关.
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抗心律失常药物作用的新靶点--M3-R/IKM3
目的研究心脏M3受体/M3受体介导的钾通道与心律失常的关系,寻找抗心律失常药物的新靶点.方法分别以结扎大鼠左冠状动脉前降支所致急性心律失常模型和膜片钳技术为基础,观察M3受体的干预作用及作用机制.结果M3受体阻断剂4DAMP(4-diphenylacetoxy-N-methylpiperidine-methiodide)加重结扎大鼠冠状动脉前降支所致心律失常,而M3受体激动剂胆碱能明显对抗其作用.其他亚型受体阻断剂,M1受体阴断剂(prienzepine)、M2受体阻断剂(methotramine)和M4受体阻断剂(tropicamide)对结扎大鼠左冠状动脉前降支所致急性心律失常无影响.在膜片钳实验中发现,胆碱可激活一种延迟整流钾电流(IKM3),此电流可被M3受体阻断剂4DAMP明显抑制.而M1,M2和M4受体阻断挤对胆碱介导的电流无作用.M3受体/IKM3可能是抗心律失常新靶点.
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M3受体激动剂对大鼠和家兔心脏血流动力学的影响
目的 研究胆碱对大鼠和家兔心脏M3受体的激动作用及其引起的血流动力学改变。方法 经右颈总动脉插管入左心室，用八导生理记录仪测定大鼠和家兔血流动力学参数。结果 iv胆碱10 mg*kg-1 30 s后，大鼠的心率(HR)比基础值明显降低，10 min后恢复。±dp/dt max和LVSP于给药10 min后明显降低。上述抑制作用可被选择性M3受体阻断剂4-DAMP 0.12 mg*kg-1所对抗。家兔iv胆碱5 mg*kg-1后1 min，心率明显降低，此作用可被4-DAMP所对抗。±dp/dt，LVSP亦有下降趋势，但无统计学差异。M3受体阻断剂4-DAMP 对大鼠和家兔血流动力学无明显影响，但预先给药可阻断胆碱引起的血流动力学变化。结论 胆碱通过激动心脏M3受体产生负性肌力和负性频率作用。
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心脏M3受体作为抗心律失常药物新靶点研究的进展
心脏在交感神经和副交感神经的精细控制下完成正常的生理功能,心脏迷走神经通过刺激M型乙酰胆碱受体(muscarinic acetylcholine receptor,mAchR)调节心脏收缩力、兴奋性和传导.
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M3受体作为防治心血管疾病新靶点的研究进展
心血管疾病因其具有高发病率和死亡率的特点,严重威胁着人类的健康.人们一直在致力于对心血管疾病的研究,期望可以找到更有效的治疗方法.在心脏上发现存在功能性毒蕈碱型乙酰胆碱受体(muscarinic acetylcholine receptor,mAchR,M受体)中的M3受体后,M3受体便成为了研究心血管疾病的新领域.而随着研究的深入进行,人们发现M3受体对多种心血管疾病具有保护作用,这也使M3受体有望成为治疗心血管疾病的新靶点.本综述围绕M3受体,主要从其在心脏上的功能、对心血管疾病的影响以及其机制等方面进行阐述,期望能对今后M3受体相关疾病的研究起到支持、借鉴和鼓励作用.
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M3受体在脑心综合征心律失常中的作用
观察M3受体(M3R)在脑心综合征(CCS)模型大鼠心室肌中的作用及其表达,以探讨其与CCS心律失常的关系.线栓法建立CCS模型,监测心电图,激光共聚焦扫描显微镜记录激动M3R后心肌细胞内钙的变化,Western blotting检测心室肌中M3R表达水平的改变.同对照组相比,模犁组心电图QRS、QT间期显著延长(P＜0.01);Western blotting结果显示模型组心室肌中M 3R的表达水平较对照组显著降低(P＜0.05);胆碱激动M3R可以抑制KCl除极诱导的模型组心肌细胞内钙的升高幅度(P＜0.01),其特异阻断剂4-DAMP可以阻断这一作用.M3R表达降低可能是CCS心律失常的重要原因之一.激动M3R可以降低心肌细胞内钙,M3R可能是治疗CCS心律失常新的靶点.
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白藜芦醇能够修复离体缺血再灌注损伤大鼠心脏M3受体与间隙连接蛋白43间结构及功能性整合
为了探讨白藜芦醇是否能通过影响M3受体和间隙连接蛋白43(Cx43)间结构及功能性整合发挥其抗心肌缺血再灌注损伤作用,应用免疫共沉淀、免疫印迹及免疫荧光技术研究白藜芦醇对M3受体与Cx43间结构及功能性整合的影响.结合大鼠离体II导联心电图及心肌超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的检测观察白藜芦醇是否能恢复心肌缺血再灌注损伤.白藜芦醇能修复心肌缺血再灌注损伤所致的M3受体与Cx43间结构及功能性整合的破坏及纠正Cx43表达异常.同时QRS波时限﹑SOD及MDA的改变也得到相应恢复.白藜芦醇能修复M3受体与Cx43间结构及功能性整合而发挥抗缺血再灌注损伤作用.
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比较电针"合谷""足三里"穴对IBS模型大鼠结肠动力及结肠M3受体表达的影响
目的 观察并比较电针"合谷""足三里"穴对肠易激综合征(IBS)模型大鼠结肠动力及结肠M3受体免疫反应物阳性表达的影响,初步探讨电针不同穴性及不同神经节段支配的穴位对IBS的效应差异及结肠动力改变的相关机制.方法 选取新生wistar大鼠40只,随机分为空白对照组、模型对照组、合谷组和足三里组.除空白对照组外,均采用新生期母婴分离、醋酸灌肠及结直肠扩张刺激(CRD)的方法联合制备IBS大鼠模型.大鼠9周龄时,合谷组和足三里组分别给予电针(EA)干预,隔日1次,共5次.空白对照组及模型对照组不予干预.治疗结束后,按照Bristol大便分类法观察电针前后IBS大鼠的便型,采用腹部回撤反射(AWR)对大鼠进行肠道敏感性及平滑肌收缩强度评估,观察潜伏期、收缩波个数、起始波压力值;采用免疫组织化学法检测结肠M3受体的表达.结果 与针前相比,针后合谷组及足三里组大鼠的大便评分显著降低(P<0.01).与空白对照组相比,模型对照组大鼠的大便评分显著增高(P<0.01),潜伏期明显缩短(P<0.01),收缩波个数明显增多(P<0.01),起始波压力值明显降低(P<0.01),结肠内M3受体免疫反应物阳性表达水平明显增强(P<0.01);合谷组结肠内M3受体免疫反应物阳性表达水平增强(P<0.05).与模型对照组相比,合谷组和足三里组大鼠针后的大便评分均显著降低(P<0.01),潜伏期均明显延长(P<0.01),合谷组和足三里组收缩波个数明显减少(P<0.01,P<0.05),起始波压力值均明显增高(P<0.01),结肠内M3受体免疫反应物阳性表达水平明显下降(P<0.01).与合谷组相比,足三里组大鼠的大便评分降低(P<0.05),起始波压力值显著降低(P<0.01),结肠内M3受体免疫反应物阳性表达水平下降(P<0.05).结论 电针"合谷""足三里"穴均可抑制IBS模型大鼠肠道收缩,改善肠道敏感性,缓解IBS症状.但"合谷"穴缓解腹痛效果更佳,而"足三里"穴减轻腹泻作用更强.说明电针不同穴性及不同神经节段支配的穴位对IBS疗效具有经穴效应特异性.
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M3R介导的cAMP-PKA信号途径对L-型钙通道的调控作用研究
目的 研究M3受体激动剂通过cAMP-PKA信号途径对L-型钙通道的影响.方法 应用全细胞膜片钳技术记录M3受体激动剂胆碱对大鼠单个心室肌细胞L-型钙通道电流(ICa-L)的影响;采用激光扫描共聚焦技术观察细胞内钙离子的变化.结果 胆碱使大鼠心室肌细胞ICa-L密度从(9.07±0.68)pA/pF减少至(5.58 ±0.62)pA/pF(n=4,与对照组相比,P＜0.01),H89加胆碱组使ICa-L电流密度减少至(7.68±0.75),幅度明显高于胆碱组(n=4,与胆碱组相比,P＜0.01).胆碱抑制KCl除极诱导的心肌细胞[Ca2+]i的升高,从(2.83±0.08)降至(1.17±0.09)FI/FI0(n=30,与KCl组相比,P＜0.01),胆碱与H89组可使[Ca2+]i降至(1.65±0.17)FI/FI0,幅度高于胆碱组(n=30,与胆碱组相比,P＜0.05).结论 M3受体激动剂胆碱通过抑制PKA活性调控L-型钙通道,使外钙内流减少,降低细胞[Ca2+]i,从而发挥抗心肌保护作用.
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M3 受体激动对心肌细胞保护作用的实验研究
目的 探讨M3受体激动对 H2O2诱导的大鼠培养心肌细胞凋亡的作用及其机制.方法 以H2O2诱导大鼠培养心肌细胞损伤模型为基础,给予M3受体激动剂胆碱和M3受体阻断剂4DAMP进行干预.流式细胞仪行细胞凋亡检测;逆转录-聚合酶链反应检测凋亡抑制蛋白Bcl-2.结果 胆碱可显著降低H2O2对心肌细胞的损伤,提高心肌细胞存活率,并降低细胞的凋亡率;胆碱可增加凋亡心肌细胞Bcl-2的表达;M3受体阻断剂4DAMP可逆转胆碱的上述作用(P<0.01).结论 激动M3受体对H2O2诱导的心肌细胞凋亡有保护作用,其机制可能与凋亡抑制蛋白Bcl-2 有关.
关键词： M3受体 心肌细胞凋亡 过氧化氢 流式细胞仪 逆转录-聚合酶链反应 -
M3受体激动剂胆碱对大鼠心肌细胞内钙离子的影响
目的 研究M3受体激动剂胆碱对大鼠心肌细胞内钙离子的影响.方法 采用钙荧光染料 Fluo-3/AM负载心肌细胞,在激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)上测定细胞[Ca2+]i的变化.结果 胆碱不影响静息状态下的细胞[Ca2+]i,对咖啡因和三磷酸肌醇(IP3)介导的细胞内钙的释放均无作用.5.0 mmol/L 胆碱可以抑制KCl除极诱导的心肌[Ca2+]i的升高幅度,2.0 nmol/L 4-DAMP可以阻断这一作用.结论 M3受体激动剂胆碱通过阻断心肌细胞膜电压依赖性钙通道降低心肌细胞[Ca2+]i,从而发挥心肌保护作用.
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单侧输尿管部分梗阻后输尿管平滑肌细胞中M3受体改变的实验研究
目的 测定大鼠单侧输尿管部分梗阻(PUUO)后输尿管平滑肌细胞中M3受体mRNA的转录水平和蛋白表达水平改变的规律,以探讨PUUO后输尿管平滑肌细胞中M3受体的作用.方法 Wistar雄性大鼠80只,随机分为4组:8周PUUO组、16周PUUO组、8周对照组及16周对照组,每组各20只.两PUUO组(n = 40)采用把大鼠输尿管左侧上1/2段埋入腰大肌做成PUUO的大鼠模型,两对照组(n = 40)只游离左侧输尿管.模型制作成功后于8周和16周时取出输尿管,分别用RT-PCR检测输尿管平滑肌M3受体mRNA的含量,Western-blotting检测输尿管平滑肌M3受体蛋白的含量.结果 RT-PCR结果示:M3受体mRNA的表达8周PUUO组高于8周对照组(55.16±3.94) vs (36.48±3.87),16周PUUO组低于16周对照组(19.37±3.70)vs(37.39±3.65),8周PUUO组高于16周PUUO组,差异均有统计学意义(均P < 0.05).Western-blotting结果示:M3受体蛋白的表达8周PUUO组高于8周对照组(27.13±1.77)vs(21.36±2.69),16周PUUO组低于16周对照组(19.41±1.37)vs(23.43±1.58),差异均有统计学意义(均P < 0.05),8周对照组与16周对照组比较差异无统计学意义(P ＞ 0.05).结论 梗阻8周时大鼠输尿管平滑肌中M3受体的生物合成上调,梗阻至16周时输尿管平滑肌中M3受体生物合成下调,为后续与临床相结合的研究做了更进一步的铺垫.
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2型糖尿病大鼠逼尿肌收缩功能改变的实验研究
[目的]研究2型糖尿病膀胱逼尿肌收缩功能的改变和M3受体表达的变化.[方法]建立2型糖尿病大鼠模型,在糖尿病病程第16周,应用离体膀胱灌注方法观察逼尿肌收缩功能的变化;RTPCR和Western blotting方法观察逼尿肌M3受体nRNA表达的变化.[结果]2型糖尿病组逼尿肌收缩功能低于正常对照组,2型糖尿病两组大鼠膀胱内压为(17.61±3.62)cmH2O/100 mg,正常对照组为(24.57±4.20)cmH2O/100mg;2型糖尿病组逼尿肌M3受体mRNA和蛋白的表达均高于正常时照组,分别为63.53%±3.54%和39.37%±3.70%,43.53%±1.59%和25.39%±1.40%.[结论]2型糖尿病大鼠逼尿肌M3受体的生物合成是上调的,但是逼尿肌的收缩功能却降低,可能是M3受体功能方面存在着一定的障碍.
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M3受体在慢性鼻-鼻窦炎合并鼻息肉患者鼻腔黏膜中的过度表达
目的:探讨M3受体在人类鼻腔慢性炎症中的表达情况.方法:选择慢性鼻一鼻窦炎合并鼻息肉(CRS/NP)的患者30例作为研究对象.于鼻内镜手术过程中严格无菌操作,取鼻息肉组织及水肿黏膜用免疫组织化学和反转录PCR(RT-PCR)分别从蛋白质和基因水平确定M3受体表达部位及密度.患者术后3个月换药时取恢复期黏膜,同法测定上述指标,后进行统计学分析.结果:30例患者鼻腔或鼻寞黏膜的黏液腺和毛细血管上均有M3受体亚型的过度表达,功能性鼻内镜手术后30例患者鼻腔黏膜M3受体表达下降.结论:研究揭示在鼻腔慢性炎症过程中有M3受体的过度表达,随着病情痊愈,M受体表达下调.
