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  • 近代显微成像技术的研究进展与应用

    作者:狄伶

    本文简述显微成像技术的发展历史,介绍荧光成像、共聚焦显微成像和超分辨显微成像技术的工作原理及应用.超分辨显微成像技术中主要介绍受激发射损耗技术.随着计算机技术和光电技术的飞速发展,新一代显微成像技术对活细胞微观生命活动实现了分子和离子水平的形态定位、实时动态观察、三维结构重组、荧光定量分析和四维动态分析.

  • 激光扫描共聚焦显微镜的使用与维护

    作者:王珺;龚坚;王燕;唐微

    阐述了LSM510激光扫描共聚焦显微镜的工作原理及主要功能,提出了LSM510激光扫描共聚焦显微镜的使用、参数选择以及维护方法.

  • 浅谈医院科研设备管理

    作者:何士大;郭秒;吉训明

    加强医院科研仪器设备的管理工作,保持仪器设备状态的高完好率,满足科研、临床和教学工作的需要,是提高医院科研、临床工作及医学教学水平和质量的重要保证.我院是一家以老年医学和神经科学为特色的三级甲等医院.自2000年起,医院整合各临床实验室和院内各基础医学研究室,建立了以科研处为管理中心的实验室体系,其中包括中心实验室、神经生物、神经生化、神经药理、神经病理、基因诊断、神经内科和外科等实验技术平台,有专职技术和研究人员50余人.目前,我院科研技术平台拥有共聚焦显微镜、高效液相色谱、蛋白纯化系统等大型设备,仪器精良,价格昂贵.做好科研仪器设备管理工作,对提高医院核心竞争力有着重要的作用.

  • 5-ALA诱导白念珠菌生成PpIX与ALA浓度相关性研究

    作者:徐辉;邹先彪

    目的 对不同浓度光敏剂5-氨基酮戊酸(5-ALA)在白念珠菌体内生成原卟啉IX (PpIX)进行荧光强度测定,探求PpIX荧光强度与ALA浓度的关系.为光动力治疗白念珠菌选择佳的光敏剂浓度提供理论依据.方法 实验分为实验组和对照组,将各组白念珠菌悬液与不同浓度5-ALA混合后避光60min孵育.利用共聚焦激光扫描显微镜测量PpIX荧光强度.结果 实验组白念珠菌与不同浓度ALA避光孵育后均有荧光物质PpIX产生,200mg/mL以上ALA浓度组产生的PpIX强度无统计学意义.300mg/mL以下ALA浓度与PpIX生成强度有相关性.对照组没有检测到PpIX.结论 ALA浓度与生成的PpIX荧光强度密切相关.这为临床ALA-PDT治疗白念珠菌疾病提供了实验依据.

  • 用共聚集显微镜测量细胞内游离钙

    作者:周春喜;李楠;陈泮藻

    钙离子是细胞内的第二信使, 在细胞的生命活动中起着重要作用, 它参与调节细胞功能, 如肌肉收缩、细胞运动、信息传递、物质代谢等。胞内钙离子大部分为结合钙, 主要贮存于肌浆网、内质网和线粒体等细胞器的钙库内。 胞浆内的游离钙作为第二信使,广泛参与、调节多种生理和病理过程,测定胞浆内游离钙在生理、病理和药理学上均具有重要意义。 用共聚焦显微镜可以对胞内游离钙进行定位、定量分析, 并能监测其动态变化。 本文主要介绍用共聚焦显微镜测量细胞内游离钙的原理、方法和意义。

  • NMDAR1单克隆抗体抑制谷氨酸诱导的大鼠海马神经元Ca2+内流

    作者:吴兰香;孙长凯;范明;丁爱石

    目的 观察人N-甲基-D-门冬氨酸受体(NMDAR,NR)主亚基(NR1)单克隆抗体mAbN1对谷氨酸诱导的大鼠海马神经元Ca2+内流的影响.方法 建立谷氨酸介导的大鼠海马神经元兴奋毒性损伤模型,以mAbN1及MK-801分别预处理海马神经元,用Fluo-3/AM法,在激光扫描共聚焦显微镜下观察对细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)的影响.结果 mAbN1能显著抑制谷氨酸所致海马神经元[Ca2+]i升高,此作用强于MK-801,且其本身对生理状态下神经元[Ca2+]i无影响.结论 mAbN1的抗兴奋毒性作用可能是通过改变NR的蛋白质二级结构从而影响兴奋毒性作用中的Ca2+内流实现的.

  • 可视性观测造血干细胞归巢的研究进展

    作者:吴梦瑶;陈彤

    造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)是治疗血液病、恶性肿瘤、某些遗传性疾病和自身免疫性疾病的重要手段.植入的造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)能否顺利归巢至骨髓并重建造血是HSCT成功的关键.伴随着对HSC归巢机制的不断认知,人们已不再满足于纯粹的体外功能学研究,如何实现造血干细胞归巢的可视性观测、了解植入细胞在骨髓微环境中的定植程序成为研究者们迫切希望解决的问题.近年来,随着成像技术的发展,激光扫描共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)和双光子显微镜(two-photon microscope)能够对组织或细胞进行三维重建和实时观测,使可视性研究HSC归巢成为现实.本文对可视性研究方法及其在HSC归巢研究中的应用做一综述.

  • 角膜共聚焦显微镜在糖尿病神经病变诊治中的应用

    作者:曾自强;肖建中

    糖尿病神经病变是糖尿病常见的慢性并发症之一,它极大地影响患者的生活质量,并使糖尿病足的发生风险明显提高。由于缺乏统一的诊断标准,糖尿病神经病变的患病率在10%~96%[1]。

  • 儿童面部局限型盘状红斑狼疮1例及反射式共聚焦显微镜观察

    作者:王莹;陈立新;李钦峰

    患儿男,10岁,主因“左侧面颊出现红色斑块2个月”就诊.病理检查:镜下可见角质层轻度角化过度,表皮萎缩变薄,毛囊角栓,毛囊及表皮基底层细胞可见空泡变性,真皮浅层色素失禁,真皮血管和附属器周围噬色素细胞及致密淋巴细胞浸润.反射式共聚焦显微镜(RCM)检查:表皮萎缩变薄,可见毛囊角栓,基底细胞液化变性,真皮血管和附属器周围噬色素细胞及致密淋巴细胞浸润.笔者认为RCM在儿童局限型盘状红斑狼疮(DLE)的诊断中有一定的指导价值,但目前观察例数较少,数据有限,争取进一步积累资料,提高RCM检查在DLE诊断中的指导作用.

  • 反射式共聚焦显微镜诊断疱疹性湿疹1例

    作者:姚卫锋;顾安康;李珺莹;李祥;王莉

    疱疹性湿疹由Kaposi首先描述,以湿疹、特应性皮炎或其它皮肤病基础上出现脐窝状水疱性皮疹为特点,常由疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)感染引起.儿童多发,本文报道1例成人Kaposi水痘样疹及其皮肤CT表现.1病例摘要患者女,42岁,于2017年1月12日就诊于我院皮肤门诊.因面部红斑丘疹伴痒反复发作半年,颜面部丘疱疹2d就诊.患者6个月前无明显诱因面部出现红斑丘疹伴痒,于“社区门诊(具体不详)”以“皮炎”予“开瑞坦、扑尔敏”口服抗过敏,局部生理盐水湿敷治疗后好转.

  • 干眼患者眼睑刷上皮病变的共聚焦显微镜观察

    作者:宋文秀;孙旭光

    目的 应用共聚焦显微镜观察眼睑刷区域的解剖结构,分析干眼患者眼睑刷上皮病变的特点.设计前瞻性病例系列.研究对象纳入2017年1月至9月北京同仁医院眼科门诊就诊的干眼患者90例和无干眼的正常对照79例.方法 用含有荧光素钠和丽丝胺绿的混合染色试纸对正常对照组和干眼组眼睑刷区域进行染色并对上皮病变情况进行分级,然后应用共聚焦显微镜对眼睑刷区域上皮病变深度、炎性细胞数量和上皮下血管数量进行观察,采集图片并分析.主要指标 眼睑刷染色分级,眼睑刷区域上皮病变深度、炎性细胞数量和上皮下血管数量.结果 对照组眼睑刷上皮病变者51例(64.5%),干眼组眼睑刷上皮病变者86例(95.6%)(x2=24.35,P<0.005).在正常对照组中,共聚焦显微镜观察眼睑刷区域,上皮层病变深度为0μm者16例(20.2%),无点状高反光物质者26例(32.9%),上皮层下血管数量正常者10例(12.6%).干眼组中者,上皮层病变深度为0μm者5例(5.5%),无点状高反光物质者20例(22.2%),上皮层下血管数量正常者19例(21.1%).两组上、下睑眼睑刷上皮病变深度之间差异有统计学意义(t=2.35、2.20,P<0.05).干眼组,上睑眼睑刷上皮病变深度、上皮层表面炎性细胞数量与角膜染色评分之间呈正相关(r=0.333、0.304,P<0.05),上睑眼睑刷上皮病变深度与Schiemer Ⅰ数值之间呈负相关(r=-0.272,P=0.050),上下睑上皮层下血管数量与脂质层评分之间呈正相关(r=0.326、0.497,P<0.05).下眼睑眼睑刷上皮病变深度与眼睑刷染色分级之间呈正相关(r=0.616,P=0.025).结论 共聚焦显微镜可对干眼患者眼睑刷区域的组织形态进行活体、无创观察.干眼患者眼睑刷上皮病变程度与干眼严重程度显著相关.

  • Ⅱ型糖尿病患者角膜的共聚焦显微镜观察

    作者:马聪慧;王丽娅;李晶

    目的 共聚焦显微镜下观察Ⅱ型糖尿病患者角膜上皮下神经纤维以及角膜各层细胞密度和形态学改变.设计比较性病例系列.研究对象选取确诊为Ⅱ型糖尿病的患者20例(20眼)为病例组和就诊于眼科门诊的无糖尿病的老年性白内障患者20例(20眼)为对照组.方法 病例组和对照组均进行角膜共聚焦显微镜检查,对所得的图片和结果进行分析.主要指标角膜上皮下神经纤维密度、角膜上皮基底细胞密度、角膜浅基质细胞密度、角膜中基质细胞密度、角膜深基质细胞密度、角膜内皮细胞密度、内皮细胞的变异系数和六角形百分比.结果 糖尿病组与对照组相比,上皮下神经纤维密度明显减少(t=-4.951,P=0.000);角膜浅基质细胞密度、中基质细胞密度和深基质细胞密度均有显著下降(P值均=0.000);角膜内皮细胞变异系数增加(t'=3.652,P=0.001),六角形百分比减少(t=-3.778;P=0.001).结论 共聚焦显微镜下显示Ⅱ型糖尿病患者角膜上皮下神经纤维密度和各层细胞密度下降.

  • 角膜共聚焦显微镜在眼表疾病诊治中的作用

    作者:王丽娅;荆洋

    角膜共聚焦显微镜是从细胞水平上对活体角膜进行无创观察的新型高分辨率显微镜.通过对全层角膜组织的三维、实时和活体条件下的光学断层扫描成像,在角膜组织的生理、病理研究和眼表疾病的诊断和治疗中体现出极大的优越性.

  • 角膜内皮镜和相干光断层扫描仪检测中央角膜厚度的临床应用

    作者:唐维强;张岩;李晓艳

    准确测量中央角膜厚度(central corneal thickness,CCT)对于分析各种角膜疾病、评价眼压测量结果的准确性以及设定屈光性角膜手术方案等临床问题非常重要.目前临床上测量角膜厚度的传统设备是A超角膜测厚仪,被称之为角膜测厚的金标准[1],近年来更多不同原理的测量仪器得到了发展应用,如:RTVue相干光断层扫描仪(optical coherence tomography,OCT)[2],Orbscan裂隙扫描角膜地形图系统[3],共聚焦显微镜[4],Pentacam眼前节分析系统[5-6]等.

  • 应用共聚焦显微镜检查近视眼中央角膜的临床分析

    作者:乔丽萍;孙慧敏;赵少贞;袁佳琴

    共聚焦显微镜(confocal microscopy through focusing, CMTF)是近年来发展起来的一种高清晰度、高放大倍率的活体显微镜检查技术,可显示角膜细胞形态和数量变化,直接测得角膜上皮、基质及角膜全层厚度.与传统的角膜组织学标本固定染色方法相比较,在活体状态下,共聚焦显微镜能够无创伤、实时地从细胞学水平观察角膜各层细胞形态结构和动态变化,为研究提供客观、定量的测量数据.

  • 激光共聚焦显微镜观察60Coγ射线对CNI-H446 DNA/RNA比值及三维结构的影响

    作者:刘芬菊;陈剑;李冰燕

    目的探讨电离辐射对小细胞肺癌细胞株(CM-H446)DNA/RNA代谢比值的影响及观察细胞三维结构的改变.方法利用共聚焦显微镜双重荧光标记、全自动三维图像分析CNI-H446细胞受到不同剂量60Co γ射线照射后DNA和RNA含量的比值.结果对照组细胞DNA/RNA比值为1.15±0.07,当受到1 Gv以上剂量照射时,DNA含量明显降低,诱导RNA合成逐渐增加,DNA降低的程度大于RNA,1,3 Gy组与对照组相比差异具有非常显著性(P<0.01).三维图像显示RNA聚集,RNA荧光强度明显增强,而DNA均匀散在于细胞内.当剂量>8 Gy时,RNA合成受到显著抑制,两者比值明显增加,细胞体积增大,其比值与照射剂量存在一定的联系.结论 CNI-H446细胞受到不同剂量60Co γ射线照射后DNA/RNA之比及细胞大小随着照射剂量的增加不断发生变化.

  • M3受体对体外H2O2诱导大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

    作者:刘艳;孙宏丽;吴红;高彦辉;李呼伦;杨宝峰

    目的探讨M3受体激动对H2O2诱导的大鼠培养心肌细胞凋亡的作用,进一步阐明其机制.方法末端标记法(TUNEL)进行细胞凋亡检测;免疫组化方法检测Bcl-2和Fas的表达;共聚焦显微镜观察[Ca2+]i荧光强度变化.结果 M3受体激动剂胆碱(10 mmol·L-1)可减少H2O2诱导的心肌细胞凋亡的数量,并可增加心肌Bcl-2的表达,减少Fas表达,抑制H2O2诱导的[Ca2+]i荧光强度的升高.但预先应用4DAMP(10 nmol·L-1)阻断M3受体可逆转胆碱作用.结论激动M3受体对H2O2诱导的心肌细胞凋亡有保护作用,其机制可能与Bcl-2和Fas表达以及下调[Ca2+]i有关.

  • 毒毛旋花子苷元对豚鼠心室肌细胞内钙浓度的影响

    作者:苏素文;许彦芳;梅和珊;齐亚娟;尹京湘;王川;张永健;王永利

    观察毒毛旋花子苷元(strophanthidin, Str)对分离豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响.酶解分离豚鼠心室肌细胞, 用Fluo 3-AM负载, 激光共聚焦显微镜法测定单个豚鼠心室肌细胞[Ca2+]i的荧光密度.Str可浓度依赖性地升高[Ca2+]i, Str (10 μmol·-1)在[Ca2+]i升高达峰值时, 可使细胞挛缩, 而Str (1和10 nmol·-1)对细胞形态无影响.TTX、 尼索地平或升高细胞外钙可影响Str (1和100 nmol·-1)对[Ca2+]i的升高作用,而对Str (10 μmol·-1)无明显影响.在外液中加入ryanodine或去除细胞外钙, 则3个检测浓度的Str升高[Ca2+]i作用均被明显抑制.在无K+、 无Na+液中, 10 μmol·-1 Str升高[Ca2+]i的作用减弱, 而Str (1和100 nmol·-1)升高[Ca2+]i的作用无明显影响.加入TTX、尼索地平或增加细胞外的钙离子浓度, 则3个检测浓度Str的作用均受到影响.提示低浓度Str对[Ca2+]i的升高作用与抑制Na+、K+-ATP酶活性无关, 而与促进L-型钙通道和TTX敏感性钠通道的"slip-mode"钙电导有关; 高浓度Str升高[Ca2+]i的作用则是抑制Na+、K+-ATP酶的结果.此外, Str对[Ca2+]i的升高作用还与直接作用于ryanodine受体促进内钙释放有关.

  • 抗体偶联药物内吞作用机制的研究进展

    作者:唐煜;王相阳;马晓慧;周芳;王广基

    抗体偶联药物(antibody-drug conjugate,ADC)由单克隆抗体和小分子细胞毒药物通过化学连接子连接,兼顾了单克隆抗体的选择性和小分子药物的细胞毒效力.ADC进入体内后,可通过单克隆抗体的靶向作用结合于肿瘤表面的靶抗原,经内吞作用进入细胞内,在溶酶体的化学或酶促作用下释放小分子细胞毒药物导致靶细胞死亡.ADC的内吞作用是ADC发挥药效的关键,并且已经成为ADC开发阶段的重要部分.由于缺乏对于ADC内吞作用的整体认识,目前对于内吞效率和内吞机制的研究方法开发存在着诸多挑战.本文对ADC的内吞机制、影响因素和研究方法等方面的进展进行了综合归纳和阐述.

  • 胆碱能受体激动剂对豚鼠离体前庭毛细胞内钙离子浓度的影响

    作者:韩维举;张素珍;韩东一;姜泗长;扬伟炎;李楠

    目的:通过观察胆碱能受体激动剂对离体前庭毛细胞内钙离子浓度的影响,探讨前庭毛细胞膜所存在的胆碱能受体及其分型、受体的脱敏现象。方法:用胶原酶消化后机械分离法,分高豚鼠壶腹嵴前庭毛细胞(VHC),钙敏荧光探针Fluo-3荧光染色,用激光扫描共聚焦显徽镜记录VHC细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的动态变化。结果:①胆碱能M和N型受体激动剂乙酰胆碱(ACh)、氨甲酰胆碱(CCh)均可引起离体VHC内[Ca2+]i的升高;N型受体激动剂澳化乙酰胆碱(ACh-Br)仅在高浓度(10mmol/L)时引起部分(4/5)离体VHC内[Ca2+]i升高,在低浓度(1mmol/L)时影响不明显;②ACh、CCh引起VHC内[Ca+]i升高在同一细胞不能重复出现,存在脱敏现象;而不同类型的受体激动剂先后作用时无脱敏现象;③阿托品对ACh、CCh引起的VHC内[Ca2+]i的升高有抑制作用;加入0.1 mmrol/L阿托品可使1 mmol/L ACh或CCh引起的VHC内[Ca2+]i升高的峰值明显减小(t检验均有极显著差异,P<0.01)。结论:豚鼠前庭毛细胞膜上存在M型和N型两种受体,M型受体激动剂引起VHC内[CCa2+]i的升高较N型明显。阿托品对M型受体激动剂引起的[Ca2+]i升高有抑制作用;前庭毛细胞膜上的胆碱能受体对同一类型的激动剂有脱敏现象,而不同类型的激动剂先后作用时,无脱敏现象。

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