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JWA参与细胞氧化应激机制的研究
目的:建立氧化应激模型探讨新基因JWA参与细胞氧化应激的机制.方法:用H2O2处理MCF-7(人乳腺癌细胞株)和WI-38(人胚胎肺纤维细胞株)两种细胞,观察细胞培养上清中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,用RT-PCR半定量的方法及Western blot免疫印迹分别检测JWA在mRNA水平和蛋白质水平上的表达以及应激蛋白HSP27、HSP70、HSP90的表达.结果:MCF-7细胞培养上清中MDA随H2O2孵育时间增加而升高、GSH随H2O2孵育时间增加而下降;WI-38细胞培养上清中MDA 的含量则先升高后于48h又恢复到对照水平,GSH含量先下降后于24h即升高至对照水平; MCF-7细胞经H2O2处理后JWA mRNA表现为明显的下降,WI-38则变化不明显;经H2O2处理后,JWA蛋白和HSP27在两种细胞的表达都有明显增加,但增加的程度不同.结论:JWA基因参与细胞氧化应激且在不同类型的细胞中作用机制不同;JWA蛋白可能是一种与HSP27作用有关的蛋白.
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宫颈癌组织中CDC6、HSP27的表达及其与HPV16/18感染的相关性研究
目的 研究CDC 6、HSP 27在宫颈癌组织中的表达及其与HPVi6/18感染的相关性及其临床意义,探讨宫颈癌的发生机制.方法 采用免疫组织化学方法检测50例宫颈癌、20例宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)CIN1、20例CINⅡ-Ⅲ、20例正常宫颈组织石蜡样品中CDC6、HSP27的表达,同时采用PCR技术检测HPV16/18感染情况.结果 ①在宫颈癌组织中CDC 6、HSP 27的阳性率高于CIN和正常宫颈组织(均P<0.05),且CDC6、HSP27阳性表达率与病理分级和淋巴结转移有关(均P<0.05);HSP27阳性表达率与临床分期有关(P<0.05),CDC6阳性表达率与临床分期无关(P＞0.05);在宫颈癌组织中CDC6和HSP27的阳性表达率与年龄分组无关(均P＞0.05).②HPV16/18在正常宫颈组织、CIN和宫颈癌中的阳性率逐渐升高(P<0.05),但与临床分期、病理分级、淋巴转移、年龄分组无关(均P＞0.05).③HSP27和CDC6、HPV16/18的表达无相关性(均P＞0.05);CDC6与HPV16/18感染有关(P<0.05).结论 CIN及宫颈癌中CDC6表达的改变可能与HPV16/18感染有关,共同影响CIN的发展及宫颈癌的发生和发展.
关键词： CDC6 HSP27 人乳头瘤病毒(HPV) 宫颈癌 -
小鼠Hsp27基因siRNA重组腺病毒载体的构建与鉴定
Hsp27是小分子量热休克蛋白亚家族的重要成员之一,主要参与细胞内蛋白质的折叠、抗凋亡、甾体激素合成、氧化应激及信号通路等生理过程.为进一步研究其生理与病理生理功能,本文构建了针对小鼠Hsp27基因的小分子干扰RNA(siRNA)重组腺病毒载体,并在AD-293细胞中与Hsp27超表达载体共同转染,观察其对Hsp27表达的影响.根据siRNA靶序列的设计要求,设计并合成针对小鼠Hsp27的siRNA靶DNA序列,克隆至穿梭载体pShuttle-H1中,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,转染AD-293细胞,包装得到含siHsp27的重组腺病毒,在体外与Hsp27超表达载体共转AD-293细胞.通过酶切鉴定、序列测定和Western blot鉴定,确定小鼠Hsp27 siRNA重组腺病毒载体构建成功,且该重组腺病毒能降低67%的Hsp27蛋白表达.本文构建的针对小鼠Hsp27基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步研究Hsp27基因的功能奠定了基础.
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17β-雌二醇对人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞Hsp27表达的影响及作用机制
目的 探讨17β-雌二醇对人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞Hsp27表达的影响及作用机制.方法 用10-8 mol/L的17β-雌二醇(E2)处理不同时间BCPAP细胞,Western blot检测细胞中Hsp27蛋白的表达;分别用E2、PPT和DPN处理BCPAP细胞,Western blot检测细胞中Hsp27蛋白的表达;设计合成ERα siRNA、ERβ siRNA并转染BCPAP细胞,Western blot检测细胞中ERα、ERβ和Hsp27蛋白的表达;CHIP检测ERα、ERβ对Hsp27基因启动子的影响.结果 用10-8 mol/L的E2处理不同时间BCPAP细胞,随着E2处理时间增加,E2对BCPAP细胞中Hsp27蛋白的表达水平逐渐增高,在24 h达到峰值(P ＜0.05);E2作用转染ERα siRNA的BCPAP细胞24 h,与E2处理组相比,Hsp27蛋白的表达水平降低(P ＜0.05);E2作用转染ERβ siRNA的BCPAP细胞24 h,与E2处理组相比,Hsp27蛋白的表达水平升高(P ＜0.05);ChIP结果显示ERα能够与Hsp27基因启动子区域结合.结论 E2可以通过ERα促进BCPAP细胞中Hsp27蛋白水平的增高.
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△NP63和HSP27在宫颈癌的表达及意义
目的探讨宫颈癌中△NP63和HSP27的表达及意义.方法应用免疫组化SP法检测20例慢性宫颈炎上皮、30例宫颈上皮不典型增生和50例宫颈癌中△NP63和HSP27蛋白的表达.同时对35例宫颈鳞状上皮细胞癌进行mRNA杂交.结果宫颈癌中△NP63蛋白表达率76%;HSP27蛋白表达率74%;表达率及强度明显高于慢性宫颈炎及轻、中度不典型增生上皮(P＜0.05),与重度不典型增生差异不显著(P＞0.05).宫颈腺癌中△NP63无表达.HSP27表达率低(1/3).在宫颈鳞状细胞中△NP63蛋白和mRNA的表达率及强度,低分化高于中、高分化,与临床分期密切相关;HSP27蛋白和mRNA的表达率及强度,中、高分化高于低分化,与临床分期无相关性.结论△NP63、HSP27可能与宫颈鳞状细胞癌的发生及预后有关.
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热休克蛋白27与膀胱逼尿肌功能的相关性研究进展
热休克蛋白27（Hot shock protein 27，HSP27）是小热休克蛋白家族之一，其作为分子伴侣蛋白广泛表达于平滑肌细胞中，在调节平滑肌收缩、参与细胞生存和迁移中起重要作用［1］。已有文献报道 HSP27在膀胱逼尿肌细胞中的表达，并参与膀胱逼尿肌细胞收缩等功能调节。本文就热休克蛋白27与膀胱逼尿肌功能的相关性研究进展做一综述。
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热休克蛋白27与妊娠及其相关疾病的关系
热休克蛋白27(heat shock protein 27,Hsp27)是小分子热休克蛋白(small heat shock protein,sHsp)家族成员,广泛存在于各种组织中.作为一种伴侣蛋白,其序列高度保守,能够协助细胞内其他多肽链完成正确的折叠、组装、转运和降解,在调节细胞迁移、凋亡、收缩、氧化应激状态等方面发挥重要作用.Hsp27与妊娠的关系逐渐受到重视,其与滋养细胞迁移、胎儿发育、分娩发动、子痫前期发病密切相关.
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热休克蛋白27与口腔鳞状细胞癌相关性研究现状
热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是一个进化上高度保守的蛋白家族,广泛存在于原核和真核细胞中.其产生可被多种因素诱导,包括高温、缺氧、重金属、氧化剂、乙醇、蛋白变性等.根据分子量的大小可以将热休克蛋白分为五大家族:HSP110、HSP90、HSP70、HSP60及小分子量HSP(12 000 ～ 43 000),如HSP27.HSP生物学功能主要有在应激状态下维持细胞必需的蛋白质空间构象,维护细胞生命;参与蛋白质的跨膜运输、折叠;影响细胞骨架的形成;参与翻译的调节;维持细胞内氧化还原的稳态;抵抗细胞的程序化死亡等.HSP本身并不能直接发挥作用,而是通过影响或调节其他的功能性蛋白来间接发挥作用,因此又称分子伴侣.近年来关于HSP27与恶性肿瘤关系的研究引人注目,本文对HSP27与口腔癌的关系作一综述.
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趋化因子CCL2对血小板内p38MAPK-HSP27通路的活化作用
目的 探讨趋化因子CCL2调控血小板活化的机制.方法 抽取20位健康志愿者静脉血,分离血小板,采用蛋白芯片筛选及Western blotting验证,获得人血小板中经外源性CCL2(浓度1000ng/ml)刺激后磷酸化表达发生变化的激酶.选取野生型C57和CCL2-/-小鼠各10只,通过Western blotting检测经血小板诱导剂胶原刺激后小鼠血小板中P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)和热休克蛋白27(HSP27)的表达水平.结果 蛋白芯片检测结果显示,人血小板经CCL2因子体外刺激后,共有12种激酶磷酸化位点的磷酸化表达升高,其中P38MAPK(T 180/Y182)与HSP27(S78/S82)的磷酸化表达经Western blotting验证明显升高(P＜0.05).应用胶原体外刺激,野生型C57小鼠血小板内P38MAPK(T180/Y182)、HSP27(S78/S82)的磷酸化表达明显高于未经刺激的小鼠血小板,差异有统计学意义(P＜0.01);而经胶原刺激的CCL2-/-小鼠血小板内P38MAPK(T 180/Y182)、HSP27(S78/S82)的磷酸化表达则明显低于经胶原刺激的野生型C57小鼠血小板,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 趋化因子CCL2可能通过P38MAPK-HSP27通路来调控血小板的活化.
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大肠癌中HSP27与Survivin的表达及意义
目的 研究HSP27和Survivin的表达与大肠癌临床病理的关系,探讨二者在大肠癌演变中的作用.方法 采用免疫组化S-P方法检测44例大肠癌标本中HSP27和survivin的表达情况.结果 三种大肠黏膜组织中HSP27、Survivin在大肠癌中表高表达(P<0.05);HSP27、Survivin表达与年龄、性别、大体类型、浸润深度、组织分级无关(P>0.05),而与大肠癌有无淋巴结转移及预后有关(P<0.05).结论 HSP27、Survivin表达与大肠癌的转移及预后有关.
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酪酸梭菌联合美沙拉嗪对溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用及其机制
目的 观察酪酸梭菌联合美沙拉嗪对小鼠溃疡性结肠炎(UC)的治疗作用,并探讨其可能的作用机制.方法 用3％的葡聚糖硫酸钠(DSS)建立小鼠溃疡性结肠炎模型.50只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、酪酸梭菌组、美沙拉嗪组、酪酸梭菌联合美沙拉嗪组.观察指标包括疾病活动指数(DAI)评分,结肠粘膜肉眼改变及病理组织学积分,采用免疫组化法检测结肠粘膜组织中HSP27的表达量,ELASA法检测血清中TNF-α的表达量.结果 酪酸梭菌和美沙拉嗪都可以降低实验小鼠DAI积分,减轻肠道的组织学损伤程度；与模型组相比,酪酸梭菌组、美沙拉嗪组、酪酸梭菌联合美沙拉嗪组,结肠中HSP27的表达都上调(P＜0.05),血清中TNF-α的表达都下降(P＜0.05),其中关沙拉嗪组与酪酸梭菌组治疗效果相当(P＞0.05),酪酸梭 菌联合美沙拉嗪组治疗效果佳(P＜0.05).结论 酪酸梭菌和美沙拉嗪对急性期UC都有治疗作用,二者联合用药效果更佳,其部分机制可能与上调HSP27,抑制TNF-α的表达而减轻肠道的炎性反应有关.
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HSP27、70、90在胃癌中的表达及意义
目的 探讨热休克蛋白27(HSP27)、70、90及其mRNA在胃癌、癌旁组织、慢性胃炎和正常胃粘膜组织中的表达情况,及与临床、病理资料之间的关系.方法 采用组织芯片技术、免疫组织化学方法检测病理诊断明确的60例胃癌组织标本及对应的距胃癌组织边缘1.5cm处的癌旁组织、距胃癌组织边缘5cm以上的正常组织以及胃炎组织中HSP27、70、90的表达差异,RT-PCR法对10例患者的胃癌组织及对应的癌旁组织、慢性胃炎组织和正常组织的HSP27、70、90mRNA的表达情况进行检测,结合临床病理资料进行统计分析.结果 HSP27、70、90的表达:在60例胃癌组织中的阳性表达率为73.3%、75%、71.7%,明显高于癌旁组织(p<0.01)、胃炎组织(p<0.01)和正常组织(p<0.01);在mRNA水平,胃癌组织的HSP27、70、90表达也明显高于其余3组(P<0.001).HSP27、70、90的表达与病人年龄、性别、肿瘤组织类型和浸润胃壁深度无明显相关性(P>0.05);与肿瘤分化程度、远处转移和临床病理分期具有相关性(P<0.05).结论 胃癌中HSP27、70、90的表达水平明显高于癌旁组织、胃炎组织和正常组织,提示与胃癌发生、发展密切相关; 而且与病人年龄、性别、肿瘤组织类型和浸润胃壁深度无明显相关性;与肿瘤分化程度、远处转移和临床病理分期具有相关性;HSP27、70、90之间具有相关性.
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Hsp27在大鼠磨牙及其发育中的分布研究
目的 探讨 Hsp27 在大鼠磨牙及其发育中的分布及意义.方法 建立大鼠牙胚发育模型,用免疫组化方法 检测Hsp27在磨牙发育不同时期的表达.结果 在成釉细胞形成过程中,Hsp27 首先出现在前成釉细胞中,在成釉细胞分泌阶段和成熟阶段,Hsp27 的阳性免疫反应逐步增强.正在分化和已分化的成牙本质细胞中,有Hsp27 的阳性反应.21天时,冠部成牙本质细胞仍保持强烈的Hsp27免疫反应,而髓室底和牙根的成牙本质细胞为弱或无Hsp27反应.但是在以后牙根发育阶段,髓室底和牙根侧的成牙本质细胞对Hsp27反应增强.值的注意的是,不能形成牙釉质的无釉区细胞,在牙胚发育5～11天时,有显著的Hsp27表达.但在14天以后又伴随凋亡而减少.结论 Hap27可以看作区别内釉上皮细胞和前成釉细胞的有用标志物,并与成牙本质细胞分化程度有关.Hsp27作为凋亡抑制剂与无釉区牙本质在牙冠尖端处轮廓的形成有关.
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热休克蛋白(HSP70、HSP27)在食管癌组织中表达的意义
目的:探讨HSP70和HSP27在食管癌组织中的表达情况.方法:采用SP免疫组织化学染色检测59例食管癌组织中HSP70和HSP27.结果:HSP70和HSP27的总阳性率分别为64.41%(38/59)和58.62%(34/58),HSP70和HSP27的共同阳性率为30.00%(9/30).结论:在食管癌中HSP70和HSP27普遍表达.
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脑死亡模型兔炎症因子表达和肺损伤性变化
背景:脑死亡供体器官质量是影响移植成功率的关键.对脑死亡诱发器官损伤的机制和保护方面的研究,将为临床上供体器官的合理利用提供实验依据.目的:观察兔脑死亡后不同时间点肺脏形态学和炎症因子的变化,探究脑死亡状态致肺损伤过程中的作用机制.方法:40只健康家兔,随机分成2组,假手术组(n=20):行气管、股动脉插管及颅骨钻孔术;脑死亡组(n=20):建立兔缓慢间断颅内加压脑死亡模型.各组在术后2,6及8 h记录动脉血压和心率变化,苏木精-伊红染色观察肺组织病理改变,RT-PCR检测各组肺脏热休克蛋白27的mRNA表达,免疫组织化学法检测肺组织核因子κB和细胞间黏附分子1的表达,并用ELISA法检测白细胞介素1β及白细胞介素6,8的水平.结果与结论:①脑死亡后2,6,8 h家兔动脉血压、心率差异无显著性意义(P>0.05);②血清中白细胞介素1β及白细胞介素6、8的水平随着脑死亡时间延长有上升趋势(P<0.05);③脑死亡组各时间点热休克蛋白27 mRNA水平较假手术组明显升高(P<0.05);④光镜下可见脑死亡后2 h肺泡腔完整,6 h时肺泡间隔增宽并有水肿,炎症细胞浸润增多,8 h损伤为严重,炎症细胞几乎浸润整个肺脏组织,该形态学变化与脑死亡组炎症相关因子细胞间黏附分子1和核因子κB表达逐渐升高的趋势一致;⑤结果表明,脑死亡状态下肺脏出现损伤性变化且呈进行性加重,该表现与炎症因子的释放有关;脑死亡状态维持8 h以上,肺脏的形态和功能将发生明显改变.
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缺氧再给氧对肝细胞膜纤维形肌动蛋白微丝损伤的分子机制
背景:建立人肝细胞体外缺氧再给氧损伤模型,模拟移植器官缺血再灌注损伤,从细胞分子水平探讨缺血再灌注所致纤维形肌动蛋白微丝损伤的机制,目前尚无相关研究报道.目的:分析缺氧再给氧对肝细胞膜纤维形肌动蛋白微丝损伤的分子机制.方法:建立体外大鼠肝细胞缺氧再给氧模型.肝细胞随机分为正常对照组、缺氧再给氧组.缺氧再给氧组又分为缺氧再给氧2h、缺氧再给氧4h、缺氧再给氧6h组(分别为细胞缺氧3h后再给氧2,4,6h).光镜观察细胞形态,电镜观察超微结构的改变,共聚焦激光显微镜观察纤维形肌动蛋白微丝含量变化,Real-time PCR检测HSP27、丝切蛋白基因的转录水平,Western blot检测HSP27、丝切蛋白蛋白的表达水平.结果与结论:光镜下缺氧再给氧各组梭形细胞显著增多,且脱落细胞明显增多;透射电镜下缺氧再给氧组与对照组相比内质网数量明显减少,线粒体密度深,糖原消失;共聚焦激光显微镜可见缺氧再给氧组纤维形肌动蛋白纤维荧光紊乱,形态明显改变,荧光染色明显减弱,平均荧光强度缺氧再给氧各组明显低于对照组(P＜0.05);Real-time PCR和Westem blot检测H/R各组HSP27、丝切蛋白基因转录和蛋白表达水平显著低于正常对照组(P＜0.05).表明缺氧再给氧可能是通过抑制肝细胞内HSP27、丝切蛋白的蛋白表达和基因转录,从而影响纤维形肌动蛋白微丝的正确装配以及减弱纤维形肌动蛋白的正常循环,进而改变纤维形肌动蛋白微丝骨架.
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HSP27特异性shRNA表达载体的构建及在耐吉西他滨人胰腺癌细胞株SW1990/Gem中的表达
目的:构建HSP27基因的短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体及观察其在耐吉西他滨人胰腺癌细胞株SW1990/Gem中的表达,为进一步探索肿瘤的基因治疗打下前期基础.方法:参考文献及shRNA设计原则,设计并合成2条能转录shRNA的DNA序列,退火连接后,插入含绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因和U6启动子的真核表达载体pRNAT-U6.3中,构建重组载体pRNAT-shHSP27.重组载体经鉴定后转染SW 1990/Gem,倒置荧光显微镜观察转染情况,RT-PCR、Western Blot从mRNA及蛋白水平探讨转染对耐吉西他滨人胰腺癌细胞株SW1990/Gem的影响.结果:成功构建了针对HSP27基因的shRNA表达载体.倒置荧光显微镜下显示转染48h后SW 1990/Gem细胞内存在GFP表达.RT-PCR、Western Blot结果提示转染后HSP27的mRNA及蛋白表达水平较对照组有明显抑制(P＜0.05).结论:成功构建针对HSP27基因的特异性shRNA真核表达载体,转染细胞后可抑制HSP27表达,为进一步研究HSP27与胰腺癌生物学行为及化疗耐药等相关性奠定了基础.
关键词： HSP27 shRNA SW1990/Gem 胰腺癌 载体构建 -
热休克蛋白27与恶性肿瘤关系的研究进展
热休克蛋白(HSP)是生物体和细胞在受到刺激时产生的一类起保护作用的特殊蛋白质,目前人们对小分子量HSP家族了解不多.作为其中重要的HSP27是功能很强并普遍存在的一种分子伴侣,其保护细胞的作用主要包括其分子伴侣和抗凋亡作用.HSP 27与恶性肿瘤的关系是目前受重视的研究方向,它在多种癌细胞中异常高表达,尤其是腺癌起源.现已进行了很多旨在抑制其在肿瘤中表达的实验研究,成为很有前景的肿瘤研究新方向.
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HSP27及其磷酸化蛋白的表达对实验性急性胰腺炎细胞骨架稳定性的影响
目的:探讨小热休克蛋白(HSP27)及其磷酸化蛋白(p-HSP27)表达对急性胰腺炎(AP)模型大鼠细胞骨架保护性作用的研究.方法:将45只正常成年雄性Wistar大鼠随机分空白对照组(A组)、急性胰腺炎组(B组)、假手术组(C组).实验前12h禁食,正常饮水,确定AP动物模型建立成功后于1h、3h、6h三个时间段处死大鼠,且随机每个时间段每组各处死5只.确定动物模型建立成功,Western-blotting检测HSP27及其磷酸化蛋白含量,RT-PCR检测HSP27mRNA表达.结果:急性胰腺炎组大鼠各时间点SAM值明显高于空白对照组和假手术组(P＜0.05);急性胰腺炎组大鼠各时间点胰腺组织HSP27蛋白、p-HSP27蛋白(Ser15)和HSP27mRNA相对表达量均明显高于空白对照组和假手术组(P＜0.05).结论:在AP早期胰腺细胞骨架稳定性出现明显变化,HSP27及其p-HSP27含量及HSP27mRNA表达明显升高,提示HSP27在AP早期对胰腺细胞骨架的稳定性起到非常重要作用.
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紫外线C对A549细胞HSPs表达的影响
[目的]研究紫外线C(UVC)对热休克蛋白(heat shock proteins,HSP)27、70及90的影响. [方法]用紫外线不同照射剂量(0、10、20、40、80 J/m2)来照射A549细胞株,用Western-blot检测HSP27、HSP70、HSP90的表达水平. [结果]随着UVC剂量的升高,HSP70和HSP27的表达水平先升高,达到一个高峰后又降低.HSP27表达在20 J/m2时达到高峰,HSP70表达在40J/m2时达到高峰,HSP90各剂量的UVC照射下,未见显著性变化.与对照组(0J/m2)相比,在10J/m2时,HSP27和HSP70表达增加(P＜0.05);在20 J/m2时,HSP27表达显著增加(P＜0.01),HSP70表达也继续增加(P＜0.05);在40J,m2时,HSP27表达开始下降,但与对照组相比差异没有显著性(P＞0.05),HSP70表达仍显著增加,与对照组相比差异有显著性(P＜0.01)在80 J/m2时,HSP27表达与对照组和40 J/m2组相比,差异无显著性(P＞0.05),HSP70表达下降,但仍高于对照组(P＜0.05).在10、20、40和80J/m2的UVC照射下,HSP90表达变化均未见显著性差异(P＞0.05). [结论]随着UVC剂量的升高,HSP70和HSP27的表达水平先升高,达到一个高峰后又降低.HSP27,HSP70能被一定剂量范围的UVC照射所诱导,高剂量UVC照射时HSP27、HSP70的表达被抑制,但HSP90表达未发现能被诱导.
