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川芎嗪对心肌细胞损伤保护作用的研究
目的:研究川芎嗪对冠心病的保护机制.方法:在建立心肌细胞缺氧再给氧损伤模型基础上,研究川芎嗪对细胞培养液中乳酸脱氢酶及心肌细胞中丙二醛含量的影响.结果:川芎嗪可降低损伤心肌细胞培养液LDH及心肌细胞中MDA的含量.结论:川芎嗪对心脏缺血再灌注损伤具有一定的保护作用.
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益气通络方对缺氧再给氧心肌细胞bcl-2基因表达影响的血清药理学研究
目的：观察益气通络方含药血清对缺氧再给氧心肌细胞bcl-2基因表达的作用。方法：采用流式细胞仪检测缺氧再给氧心肌细胞bcl-2基因表达强度。结果：1.缺氧24h、再给氧4h组心肌细胞bcl-2阳性表达比率增加，与正常对照组比较具有显著差异(P<0.01)；2.益气通络方低、中、高剂量含药血清组bcl-2阳性表达比率较单纯缺氧再给氧组增高，组间比较呈显著差异(P<0.01)。讨论：缺氧再给氧能诱导心肌细胞bcl-2基因表达，益气通络方含药血清可增强其表达，可能是益气通络方保护缺氧再给氧心肌细胞，发挥抗缺血再灌注损伤的重要机制之一。
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儿茶素单体对心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用及机制研究
目的:观察没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制.方法:建立体外培养大鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤模型,倒置显微镜下观察加入各儿茶素单体(50,20,8 μg·mL-1)后,各组缺氧再给氧前后细胞形态学和搏动频率变化;以MTT法检测各组细胞的存活率;测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;测定心肌细胞膜ATP酶;分别给予蛋白激酶(PKC)阻断剂十字孢碱staurosporine(stau,10 nmol.L-1)和Gi/o蛋白失活剂pertussis toxin(FIX,200 μg·mL-1),以探讨其作用机制.结果:GCG,EGCG均能够增加心肌细胞存活率,增加SOD和ATP酶活性,降低心肌细胞LDH的释放,降低培养液中MDA的含量,给予PKC阻断剂和Gi/o蛋白失活剂后,与单纯GCG组、EGCG组比较,心肌细胞搏动频率和存活率降低,同时LDH,MDA释放量增加,SOD活性下降.结论:GCG和EGCG具有抗体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的作用,其机制可能与其清除自由基、抑制心肌细胞Ca2+超载以及心肌细胞蛋白激酶C和G蛋白的介导有关.
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三七总皂苷对缺氧再给氧血管内皮细胞损伤保护效果研究
目的 探讨发生缺氧再给氧损伤( H/R)对人脐静脉内皮细胞株(ECV304)的功能影响并探讨三七总皂苷抗血管内皮细胞H/R损伤的作用效果和作用机制.方法 体外培养的ECV304,将之分为7个研究组,分别为代号A-G的对照组、H/R组、PDTC组、维拉帕米组、不同浓度(0.781mg/L,1.563mg/L,3.125mg/L)的三七总皂苷组;培养1h后通过观察细胞内Ca2+浓度,一氧化氮(NO)和前列环素(PGI2)的含量,超氧化物歧化酶( SOD)、丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量,细胞间黏附分子ICAM-1的表达、核因子kB(NF-kB)的活性等,来确定H/R对ECV304的离子转运功能、细胞分泌功能、氧自由基清除功能、黏附功能及细胞活力的影响,并通过三七总皂苷组与PDTC组、维拉帕米组进行比较,观察三七总皂苷抗血管内皮细胞H/R损伤的作用效果和作用机制.结果 H/R可激活ECV304,使细胞氧自由基清除功能明显降低,NF-κB及ICAM-1的表达明显升高,细胞肌浆网Ca2+-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI2)含量、细胞活力明显降低,[Ca2+]i明显升高;tPNS能有效改善细胞氧自由基清除功能,降低NF-kB、ICAM-1活性,改善肌浆网Ca2+-ATP酶活性,减轻细胞内钙超载,减轻H/R损伤,且高浓度tPNS效果优于维拉帕米、PDTC.结论 三七总皂苷能有效降低NF- κB活性及ICAM-1表达,减轻细胞内钙超载,减轻血管内皮细胞缺氧再给氧损伤;高浓度三七总皂苷与钙拮抗剂维拉帕米、抗氧化剂吡咯烷二硫氨基甲酸脂相比作用较强,效果更好.
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缺氧再给氧对心肌细胞内游离钙浓度的影响
再灌注损伤是一个很复杂的病理生理现象.大量证据表明再灌注损伤或细胞死亡与细胞内的钙超载有关.再灌注损伤发生与否和轻重程度,多认为与缺血时间的长短有关.根据我们的研究,所谓再灌注损伤取决于缺血时间的问题.只是在一定缺血时限内有效,超过这个时限就不存在再灌注损伤的问题.每种动物在心肌缺血再灌注损伤中都有一个由可逆向不可逆转变的时间点,当缺血损伤达到不可逆的程度时,就无所谓再灌注损伤了.本文以成年大鼠体外分离的心肌细胞氧反常模型,动态、定量地观察了细胞内游离钙浓度的变化,探讨了大鼠心肌细胞氧反常变化的规律.
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缺氧再给氧对肝细胞膜纤维形肌动蛋白微丝损伤的分子机制
背景:建立人肝细胞体外缺氧再给氧损伤模型,模拟移植器官缺血再灌注损伤,从细胞分子水平探讨缺血再灌注所致纤维形肌动蛋白微丝损伤的机制,目前尚无相关研究报道.目的:分析缺氧再给氧对肝细胞膜纤维形肌动蛋白微丝损伤的分子机制.方法:建立体外大鼠肝细胞缺氧再给氧模型.肝细胞随机分为正常对照组、缺氧再给氧组.缺氧再给氧组又分为缺氧再给氧2h、缺氧再给氧4h、缺氧再给氧6h组(分别为细胞缺氧3h后再给氧2,4,6h).光镜观察细胞形态,电镜观察超微结构的改变,共聚焦激光显微镜观察纤维形肌动蛋白微丝含量变化,Real-time PCR检测HSP27、丝切蛋白基因的转录水平,Western blot检测HSP27、丝切蛋白蛋白的表达水平.结果与结论:光镜下缺氧再给氧各组梭形细胞显著增多,且脱落细胞明显增多;透射电镜下缺氧再给氧组与对照组相比内质网数量明显减少,线粒体密度深,糖原消失;共聚焦激光显微镜可见缺氧再给氧组纤维形肌动蛋白纤维荧光紊乱,形态明显改变,荧光染色明显减弱,平均荧光强度缺氧再给氧各组明显低于对照组(P＜0.05);Real-time PCR和Westem blot检测H/R各组HSP27、丝切蛋白基因转录和蛋白表达水平显著低于正常对照组(P＜0.05).表明缺氧再给氧可能是通过抑制肝细胞内HSP27、丝切蛋白的蛋白表达和基因转录,从而影响纤维形肌动蛋白微丝的正确装配以及减弱纤维形肌动蛋白的正常循环,进而改变纤维形肌动蛋白微丝骨架.
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姜黄素对缺氧再给氧大鼠心脏微血管内皮细胞ICAM-1表达的影响
目的研究姜黄素对缺氧再给氧大鼠心脏微血管内皮细胞粘附分子ICAM-1表达的影响.方法培养大鼠心脏微血管内皮细胞,建立细胞缺氧再给氧模型,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定内皮细胞粘附分子ICAM-1的蛋白表达,Northern blot分析测定ICAM-1mRNA的表达.结果缺氧后内皮细胞ICAM-1的蛋白和mRNA表达明显升高,缺氧再给氧后增高更明显,姜黄素组ICAM-1的蛋白和mRNA的表达较缺氧再给氧组明显下降,呈剂量依赖效应.结论姜黄素能明显下调缺氧再给氧大鼠心脏微血管内皮细胞ICAM-1的表达,抑制内皮细胞的激活.
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PGA1对缺氧再给氧大鼠心脏微血管内皮细胞ICAM-1表达的影响
目的研究前列腺素A1(PGA1)对缺氧再给氧大鼠心脏微血管内皮细胞ICAM-1表达的影响.方法培养大鼠心脏微血管内皮细胞,建立细胞缺氧再给氧模型,通过凝胶电泳迁移率(EMSA)测定内皮细胞NF-κB的活性,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定内皮细胞粘附分子ICAM-1的蛋白表达,Northern blot分析测定ICAM-1 mRNA的表达.结果大鼠心脏微血管内皮细胞在缺氧刺激后NF-κB活性显著增加,ICAM-1的蛋白和ICAM-1 mRNA的表达明显增加,再给氧后升高更明显;PGA1处理组NF-κB活性较缺氧再给氧组明显下降(P<0.01),ICAM-1的蛋白和ICAM-1 mRNA表达明显下降(P<0.01),呈剂量依赖效应.结论前列腺素A1通过NF-κB介导,下调内皮细胞ICAM-1的蛋白和mRNA表达.
关键词： 前列腺素A1(PGA1) 缺氧再给氧 微血管内皮细胞 ICAM-1 -
葛根素抗培养脑细胞缺氧-再给氧损伤作用
抗脑缺血/缺氧-再灌注/再给氧损伤(ischemia /anoxi-areperfusion/reoxygenation injury, I-RI/A-RI)的研究具有重要的基础和临床意义[1],有关葛根素治疗脑缺血的研究已有报道[2,3],但未见其抗培养脑细胞缺氧-再给氧损伤的报道.本研究探讨了葛根素对缺氧-再给氧损伤脑细胞的保护作用.
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川芎嗪对缺氧-再给氧所致心肌细胞损伤的保护作用
目的研究川芎嗪对冠心病保护的机制.方法在建立心肌细胞缺氧再给氧损伤模型基础上,研究川芎嗪对细胞培养液中乳酸脱氢酶及心肌细胞中丙二醛含量的影响;同时,探讨其对心肌细胞凋亡率的影响.结果川芎嗪可降低损伤心肌细胞培养液LDH及心肌细胞中MDA的含量.结论川芎嗪对心脏缺血再灌注损伤具有一定的保护作用.
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基因特异性短发卡RNA抑制缺氧再给氧人脐静脉内皮细胞的转化生长因子-β1过表达
目的 构建针对人转化生长因子(TGF)-β1基因的短发卡RNA(shRNA)表达载体并检测其对缺氧再给氧(A/R)损伤后的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)株的TGF-β1基因表达的影响.方法 设计、合成并构建针对TGF-β1 mRNA的shRNA表达载体,选择效果好者转染HUVEC株,再进行A/R试验,用免疫组织化学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF.β1蛋白质和mRNA的表达.结果 优选出的表达载体pT12抑制率达(46.4±3.7)%.接受了MR的T、H、L及C组,TGF-Bβ1蛋白的A值分别为0.252±0.032、0.385±0.037、0.406±0.057及0.419±0.041,高于N组(0.103±0.008,P<0.01),转染r pT12的T组A值又显著低于H、L和C组(P<0.01).A/R试验后T、H、L及c组的TGF-β1 mRNA转录量也多于N组(P<0.05),T组的TGF-β1 mRNA转录量低于作为对照组的H组、L及C组(P<0.05).结论 TGF-β1基凶特异性shRNA表达载体能有效地抑制A/R损伤导致的HUVEC株TGF-β1基因过度表达.
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缺氧再给氧上调人血管内皮细胞TGFβ1的基因转录
目的:探讨缺氧再给氧对人血管内皮细胞中的TGβ1基因转录的影响.方法:建立人脐静脉内皮细胞株的缺氧再给氧模型,采用改良的RT-PCR,半定量分析缺氧再给氧后内皮细胞中TGFβ1的mRNA的变化.结果:缺氧再给氧组与对照组相比,TGFβ1的mRNA明显升高.结论:缺氧再给氧上调血管内皮细胞TGFβ1基因的转录.
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山楂叶总黄酮对缺氧再给氧心肌细胞的保护作用及机制研究
目的:探讨山楂叶总黄酮(HLF)对培养乳大鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用及其机制.方法:采用体外培养的乳大鼠心肌细胞建立缺氧/再给氧心肌细胞损伤模型,实验分为5组:空白对照组;模型组(A/R组),缺氧再给氧组;3个HLF给药组,并于缺氧及再给氧开始时分别加入终浓度为10、30、100 mg/L的HLF,观察HLF对细胞上清液中缺氧及再给氧后LDH、CK、AST漏出量,MDA含量、SOD活性,N0含量、NOS活性的影响;用MTT法检测HLF对缺氧再给氧损伤心肌细胞线粒体的保护作用;用流式细胞仪测定HLF对缺氧再给氧损伤心肌细胞凋亡的影响.结果:HLF可抑制缺氧及再给氧后LDH、CK、AST漏出量,降低MDA含量,提高SOD活性,降低NO含量和NOS活性;升高A/R细胞OD吸光度值,并能明显抑制缺氧再给氧损伤心肌细胞凋亡.结论:HLF对培养心肌细胞的缺氧再给氧损伤具有保护作用,提示其作用机制与增强细胞抗氧化作用,减少自由基及脂质过氧化物导致的细胞膜损伤和抑制细胞凋亡有关.
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灯盏花素调控MICA基因表达对人肾小管上皮细胞缺氧再给氧损伤的保护作用
目的 观察灯盏花素提取液对人肾小管细胞(HK-2)缺氧再给氧(hypoxia/re-oxygenation,H/R)损伤的保护作用,探讨其可能的治疗作用及保护机理.方法 建立HK-2体外H/R损伤模型.随机分为3组:对照组、缺氧组、灯盏花素组(灯盏花素预处理+缺氧).在缺氧16h后设立4个时间点:复氧0、4、8、16h.倒置显微镜下观察细胞的形态学改变,荧光定量和流式检测各组HK-2 MICA分子和蛋白水平的表达,乳酸脱氢酶释放法测定NK细胞对HK-2的杀伤能力.结果 与对照组相比,缺氧组HK-2细胞MICA转录水平和蛋白表达水平在缺氧16h后显著升高,于复氧8h达峰值后逐渐下降,并于复氧16h后恢复正常.NK细胞对H/R处理的HK-2细胞的杀伤活性与MICA的表达变化呈正相关.与缺氧组相比,灯盏花素组显著降低H/R处理的HK-2细胞MICA的表达和NK细胞对其的杀伤活性.结论 在IRI过程中,下调H/R处理的HK-2细胞的MICA,从而抑制NK细胞对其的杀伤活性,可能是灯盏花素抗氧化应激和增强抗氧化防御功能的有效机制之一.
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BMSCs对猪胰岛缺氧再给氧损伤的保护作用
目的 研究恒河猴BMSCs在缺氧再给氧环境下对新生猪胰岛活性和功能的保护作用. 方法 取健康成年恒河猴5只,体重6～10 kg,取骨髓采用骨髓单核细胞贴壁培养法筛选获得BMSCs;取3～5日龄新生长白猪5只,取胰腺以V型胶原酶消化制备新生猪胰岛.将实验分为胰岛正常组(A组)、胰岛加BMSCs正常组(B组)、胰岛缺氧再给氧组(C组)、胰岛加BMSCs缺氧再给氧组(D组),观察比较常规培养和缺氧(1％O2)12 h再给氧24h或48h条件下,胰岛的功能活性变化:二乙酸荧光素/碘化丙啶(propidiumiodide,PI)染色计算胰岛成活率;细胞计数试剂盒8法检测新生猪胰岛的代谢活性;膜联蛋白V-FITC/PI标记后流式细胞仪检测胰岛凋亡率;葡萄糖刺激法分析胰岛功能糖刺激指数(stimulation index,SI). 结果 C组较A、B组胰岛团更为分散,死亡细胞增多;D组较C组胰岛团完整,成活率更高.A、B、C、D组胰岛成活率分别为90.2％±9.1％、88.3％±5.9％、52.3％±12.1％、71.4％±11.5％,C、D组显著低于A、B组(P＜0.05),D组显著高于C组(P＜0.05).D组BMSCs以1∶10和1∶20比例与胰岛缺氧再给氧共培养后,代谢活性显著高于C组(P＜0.05).A、B、C、D组胰岛凋亡率分别为27.1％±3.2％、24.0％±1.0％、64.3％±1.8％、46.2％±1.4％,C、D组显著高于A、B组(P＜ 0.05),但D组显著低于C组(P＜0.05).各时间点A、B组SI比较差异均无统计学意义(P＞ 0.05),C组显著低于A、B组(P＜0.05),在24 h和72 h时D组显著高于C组(P＜0.05). 结论 BMSCs对缺氧再给氧诱导的新生猪胰岛活性和功能损伤具有保护作用.
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灯盏花乙素对人心脏微血管内皮细胞中PKCε表达的调控作用
目的 探讨灯盏花乙素(scutellarin,SCU)对正常及缺氧再给氧(hypoxia reoxygenation,HR)处理时人心脏微血管内皮细胞(human cardiac microvascular endothelial cells,HCMECs)中PKCε蛋白及mRNA表达的调控作用.方法 以正常与缺氧再给氧2种方式培养HCMECs,实验分组为:在正常培养实验中分为正常对照(Control)组、SCU (0.1 μM,1μM,10 μM)3种剂量组;HR培养实验中分为Control组、Model (HR)组、HR处理的SCU(0.1 μM, 1μM, 10 μM)3种剂量组.分别以Western blot与RT-PCR方法检测HCMECs中p-PKCε与PKCε蛋白与mRNA表达的变化.结果 在正常培养的HCMECs中,SCU (0.1 μM,lμM, 10μM)剂量组均可显著上调PKC ε的蛋白及mRNA的表达(P＜0.05),对p-PKCε也有上调趋势;在HR培养的细胞实验中,Model组PKC￡有下调趋势,而SCU 10 μM组可显著上调PKC￡的蛋白及mRNA的表达(P＜0.05),并且SCU 10 μM亦可显著上调p-PKC￡(P＜0.05).结论 SCU对正常及HR处理时HCMECs中PKC ε蛋白及mRNA的表达有明显的上调作用.
关键词： 灯盏花乙素 人心脏微血管内皮细胞 缺氧再给氧 PKCε
