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黄芩茎叶总黄酮对培养大鼠心肌细胞H2O2损伤的保护作用
目的:探讨黄芩茎叶总黄酮保护培养大鼠心肌细胞抗过氧化氢(H202)损伤.方法:应用H202培养大鼠心肌细胞损伤模型,采用乳酸脱氢酶(LDH)活性及MTT代谢率的测定等方法.结果:与H2O2损伤组比较,黄芩茎叶总黄酮保护组的LDH释放量显著减少(P＜0.01),而MTT代谢率显著增高(P＜0.01).结论:黄芩茎叶总黄酮能保护培养大鼠心肌细胞,减轻自由基损伤.
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MAPK信号通路介导CT-1促进大鼠心肌细胞存活
目的 探讨心脏营养素-1(CT-1)对培养乳鼠心肌细胞存活的促进作用以及丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号传导途径在CT-1促进心肌细胞存活中的作用.方法 差速贴壁纯化培养新生大鼠心肌细胞,MTT比色法测定各孔细胞存活率.结果 无血清DMEM培养心肌细胞24 h后,加入4个剂量组CT-1(10-10～10-7 mol/L),呈明显剂量依赖性增加MTT计数;培养基中加入CT-1(10-8 mol/L),1、2、3和4 d MTT计数呈明显的时间依赖性增加;预先用MAPK抑制剂PD098059(5×10-5 mol/L),再加入CT-1,心肌细胞存活率明显低于单纯CT-1组,而单纯用PD098059则无明显影响;预先用PKC激动剂PMA(10-5 mol/L),再加入CT-1,MTT计数明显增加;先用PD098059,再加入PMA和CT-1,MTT计数明显降低,而先用PKC抑制剂Calphostin C(Cal)再加CT-1,MTT计数也明显降低.结论 CT-1增加心肌细胞存活率的效应是由MAPK信号分子介导实现的;该效应的胞内信号传导通路可能是先激活PKC信号分子,然后再激活MAPK信号分子.
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大鼠心肌细胞培养方法的改进
心肌细胞培养是广泛应用于医学研究领域的一项基本技术.我们成功的建立了改良的大鼠乳鼠心肌细胞原代培养和传代培养技术.
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心肌细胞培养进展
细胞培养(cell culture)是细胞,包括单细胞在体外条件下的生长.它在分子生物学、生物工程、生物制品、药物开发、临床各方面应用极广,如今已成为生物学、医学与药学研中有成效的方法之一.心肌细胞(cardiomyocyte)占心肌组织总细胞数的60%,占重量的90%以上[1].心肌细胞培养(cardiomyocytes culture)已成为心血管研究的基本方法和手段之一,在医学上有着广阔的应用前景.本文将有关心肌细胞培养的文献综述如下.
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青藤碱拮抗体外培养的乳鼠心肌细胞自由基损伤
目的 研究青藤碱(Sin)对体外培养乳鼠心肌细胞自由基损伤的保护作用.方法 应用O-2诱导培养乳鼠心肌细胞损伤模型,通过测定乳酸脱氢酶(LDH)活性、MTT代谢率、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量等指标,观察Sin对心肌细胞自由基损伤的保护作用.结果 与损伤组比较,Sin保护组的LDH释放量显著减少(P＜0.01);MTT代谢率显著增高(P＜0.01);Sin明显抑制损伤率;SOD活性明显增高;MDA含量明显降低(P＜0.01).结论 Sin通过清除氧自由基保护O-2损伤的心肌细胞.
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去甲肾上腺素对心肌细胞CGRP表达变化的影响
目的 观察去甲肾上腺素(NE)诱导培养心肌细胞CGRP表达的变化.方法 采用1 d～3 d龄的Sprague-Dawley(SD)大鼠建立体外培养新生大鼠心肌细胞模型,选用20孔培养第4天～第5天呈亚融合状态下细胞随机分为5组,每组4孔,即对照组(C组)和NE1 h、3 h、6 h、12 h组.细胞培养基内加入NE后,取样本进行测定.采用免疫细胞化学染色技术观察心肌细胞内CGRP表达的变化.结果 NE组CGRP免疫反应阳性物质在各时点均较对照组增多,并随缺血时间延长呈现不同的变化趋势:1 h、3 h、6 h和CGRP免疫反应阳性物质显著增多,6 h达高,12 h稍有下降.结论 NE在细胞水平可上调心肌细胞CGRP表达.
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诃子提取物对乌头碱所致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用
目的:研究诃子提取物对乌头碱所致心肌细胞损伤的保护作用.方法:采用鸟头碱处理培养心肌细胞,造成鸟头破损伤模型,通过检测细胞培养液中LDH、CK漏出量,MDA含量和SOD活性及MTT代谢率,反映诃子提取物对乌头碱损伤模型的影响.结果:与模型组相比.诃子提取物能显著减少LDH、CK漏出量(P<0.01),升高A值(P<0.01);降低培养液中MDA含量(P<0.05,P<0.01),升高SOD活性(P<0.01).结论:诃子提取物可减轻鸟头碱对心肌细胞的损伤程度,对心肌细胞具有保护作用,其机制可能与稳定细胞膜和抗氧化有关.
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柯萨奇病毒性心肌炎感染模型的建立
从细胞水平介绍了新生乳鼠感染柯萨奇病毒性心肌炎的模型制备,分别从心肌细胞培养、毒株的选择、病毒的分离和毒力滴定、评价造模成功的指标等方面阐述,分析了现有的实验观察,对模型的制备方法加以总结.
关键词： 心肌细胞培养 柯萨奇病毒性心肌炎感染模型 -
外环境低钙对培养心肌细胞损伤的研究
目的研究细胞外环境低钙对培养心肌细胞损伤的影响机制.方法观察细胞外钙离子浓度为1.0mmol/L、0.8mmol/L、0.6mmol/L、0.4mmol/L、0.2mmol/L时对原代培养心肌细胞膜流动性、细胞内游离钙和肌酸磷酸激酶(CK)的影响.结果钙离子浓度为0.6mmol/L以下能明显引起膜流动性降低,细胞内游离钙增加,呈明显的量效关系.低钙能引起CK量增加,呈明显的量效关系.结论细胞外环境钙离子浓度降低能引起细胞内游离钙增加,进而使细胞损伤.
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山莨菪碱对感染CVB3病毒的大鼠心肌细胞保护作用的观察
目的:探讨山茛菪碱(654-2)对培养的大鼠心肌细胞感染科萨奇B3(CVB3)病毒的保护作用.方法:采用体外大鼠心细胞培养法,将培养的心肌细胞分为6组,病毒组、空白对照组、654-2组(两种不同剂量)、病毒+654-2组(两种不同剂量),检测上清液中的乳酸脱氢酶(LDH)及肌酶激酶(CK)的水平,观察组间差异.结果:病毒+654-2组释放的LDH及CK较病毒组明显降低(P<0.01);654-2组释放的LDH及CK较空白对照组也有明显降低,有显著性差异(P<0.01).结论:654-2对感染CVB3病毒后的心肌细胞有保护作用.
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小柴胡汤对病毒感染体外心肌细胞琥珀酸脱氢酶的影响
柯萨奇病毒B组(Coxsackievirus B Group,CVB)是一组单链RNA病毒,小RNA肠道病毒属,是病毒性心肌炎的主要病原体,病毒性心肌炎目前尚无有效的治疗药物.本研究选取中药小柴胡汤来研究其对体外新生大鼠病毒性心肌炎模型的心肌酶组织化学的影响.
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新生大鼠心肌细胞的体外培养
心肌细胞培养作为一种体外实验研究模型,可以更方便地从细胞和分子水平研究心血管疾病的发病机制,成为心血管疾病研究的一项主要手段和基本技术.如何使心肌细胞培养的方法更为简单并且使分离的心肌细胞达到理想的存活率和纯度,是体外培养心肌细胞模型的关键问题.我们在本实验室多年新生大鼠心肌细胞培养的经验和方法的基础上加以改进,获得了简单并且稳定、可靠的心肌细胞培养的方法.
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一氧化氮在血管紧张素Ⅱ激活蛋白激酶C中的作用
实验在培养新生大鼠心肌细胞中检测NO前体L-精氨酸(L-Arg)和NO供体硝普钠(SNP)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)激活蛋白激酶C (PKC)的作用, 以探讨心肌细胞PKC水平的信号转导途径.实验结果如下: (1) 无血清DMEM培养心肌细胞24 h后加入AngⅡ, PKC活性呈剂量依赖性增高; (2)培养基中加入L-Arg, PKC活性呈剂量依赖性降低; (3)用L-Arg 100 μmol/L进行预处理, 30 min后分别加入Ang Ⅱ 0.1 μmol/L或PMA 10 μmol/L, PKC活性均明显降低, 与单纯AngⅡ组和单纯PMA组相比均有显著性差异; 用NOS抑制剂L-NAME预处理后, 再加入L-Arg, 可明显阻断L-Arg对上述两个效应的影响; (4)培养液中加入NO供体SNP, PKC活性呈剂量依赖性地降低; (5) 用SNP 10 μmol/L预处理心肌细胞, 5 min后分别加入AngⅡ或PMA, PKC活性分别与单纯AngⅡ和单纯PMA组相比均明显降低.以上结果表明, AngⅡ能剂量依赖性激活PKC, 而NO可剂量依赖性抑制PKC活性; NOS参与L-Arg抑制AngⅡ或PMA激活PKC的作用.这些观察提示, NO抑制AngⅡ对心肌细胞的作用可能是通过抑制PKC活性实现的, PKC可能是NO和AngⅡ在心肌细胞内信号转导的交汇点 (cross talk).
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蛋白激酶C在血管紧张素Ⅱ抑制心肌细胞一氧化氮合成中的作用
实验用硝酸还原酶法测定培养新生大鼠心肌细胞亚硝酸盐(NO2)和硝酸盐(NO3)总量(NO2/NO3), 反映心肌细胞一氧化氮(NO)生成情况, 观察血管紧张素Ⅱ (AngⅡ)对心肌细胞NO生成的影响及其蛋白激酶C (PKC)在该效应中的作用.结果显示: AngⅡ可减少心肌细胞NO的含量, 并具有明显的剂量-效应关系; AngⅡ受体拮抗剂saralasin可明显抑制AngⅡ对NO生成的影响; L-精氨酸 (L-Arg)明显增加心肌细胞NO的浓度, 此效应可被一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-NAME所抑制, L-Arg未能消除AngⅡ抑制NO的作用; 用佛波酯(PMA)处理心肌细胞, 其NO的生成明显减少, L-NAME可加强此抑制效应; PKC抑制剂staurosporine (Stau)可明显削弱AngⅡ抑制心肌细胞NO生成的效应.结果提示: AngⅡ具有抑制心肌细胞NO生成的作用, 此作用可能是通过抑制心肌细胞NOS的活性而实现的; AngⅡ受体介导AngⅡ抑制心肌细胞NO生成的作用; 激活PKC可使新生大鼠心肌细胞NO生成减少, NOS参与此抑制效应, 新生大鼠心肌细胞NO生成过程的信号转导通路可能与PKC有关; PKC参与AngⅡ抑制心肌细胞NO的生成.
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神经再生素对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的:研究神经再生素(NRF)对纯化培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制.方法:采用纯化培养的心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,观察心肌细胞形态学变化,测定细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)和线粒体脱氢酶含量改变,探讨NRF对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用.结果:缺氧/复氧损伤后,胞体折光性下降,突起缩短或消失,搏动减弱或消失,NRF各剂量组心肌细胞形态均较缺氧/复氧组明显改善,NRF各剂量组SOD、MDA、线粒体脱氢酶活性与缺氧/复氧组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:神经再生素具有明显的抗缺氧/复氧损伤,保护心肌作用,其机制可能与其抑制心肌脂质过氧化损伤有关.
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丙泊酚对缺氧/复氧培养大鼠心肌细胞c-Fos表达及LDH的影响
目的:研究丙泊酚对缺氧/复氧培养大鼠心肌细胞c-Fos表达和培养基乳酸脱氢酶(LDH)含量的影响.方法:建立S D大鼠心肌细胞原代培养及缺氧/复氧模型.将培养细胞按孔随机分为6组:Ⅰ组为对照组,Ⅱ组为缺氧/复氧组;Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ组为在缺氧前10min开始分别加入脂肪乳、丙泊酚25 μmol*L-1、50 μmol*L-1和100 μmol*L-1.用免疫组化法和灰度分析观察3种剂量的丙泊酚对复氧2h c-Fos表达的影响.用生化比色法测定复氧3h时培养基中LDH含量.结果:缺氧/复氧使心肌细胞LDH漏出量明显增加(P<0.05),3种浓度的丙泊酚均能明显抑制细胞LDH释放(P<0.05). Ⅱ组与Ⅰ组相比平均灰度值明显降低(P<0.05);Ⅴ、Ⅵ组与Ⅱ组比较平均灰度值均显著增高(P<0.05).结论:3种浓度的丙泊酚均有心肌保护作用且50 μmol*L-1和100 μmol*L-1浓度的丙泊酚能明显抑制缺氧/复氧培养大鼠心肌细胞c-Fos表达.
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硫氢化钠后处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的 探讨硫化氢供体--硫氢化钠(NaHS)后处理对原代培养的新生大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用.方法 体外培养原代新生大鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,并随机分为4组:对照组(Normal组)、缺氧/复氧组(H/R组)、缺氧后处理组(HPC组)和硫氢化钠后处理组(H/R+NaHS组).4组均为缺氧2 h后复氧2 h,并取5个时间点(缺氧前、缺氧2 h和复氧后 0.5 h、1 h、2 h)检测下列指标: ①心肌细胞存活率;②乳酸脱氢酶(LDH)活性;③丙二醛 (MDA)含量;④超氧化物歧化酶 (SOD)活性.结果 缺氧2 h时,H/R组、HPC组和H/R+NaHS组各个指标检测值均无显著差异(P﹥0.05).经缺氧后处理和NaHS后处理后,HPC组和H/R+NaHS组的细胞存活率分别为(70.5±2.2)%、(66.2±2.5)%,比H/R组显著升高[(61.3±1.8)%,P﹤0.05)];同时HPC组和H/R+NaHS组LDH活性分别为(36.2±1.3)U·L-1、(39.5±1.5)U·L-1,显著低于H/R组[(44.6±1.7)U·L-1,P﹤0.05];HPC组和H/R+NaHS组MDA含量分别为(0.905±0.033)mmol·g-1、(0.986±0.042)mmol·g-1,也明显低于H/R组[(1.120±0.045)mmol·g-1,P﹤0.05];而HPC组和H/R+NaHS组SOD活性分别为(16.9±1.0)U·L-1、(15.9±1.2)U·L-1,却明显高于H/R组[(13.3±1.5)U·L-1,P﹤0.05].在2 h复氧期内,HPC组和H/R+NaHS组细胞存活率和SOD活性始终明显高于H/R组,而LDH活性和MDA含量始终明显低于H/R组(P﹤0.05).结论 NaHS后处理可以提高心肌细胞清除氧自由基的能力,从而有效减轻缺氧/复氧造成的心肌细胞损伤.
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龙牙楤木总皂苷对缺氧/再给氧心肌细胞损伤的保护作用
目的 探讨龙牙楤木总皂苷(As)对培养心肌细胞缺氧/再给氧损伤的保护作用及其机制.方法 取体外培养的乳大鼠心肌细胞建立缺氧/再给氧心肌细胞损伤模型,实验分为5组:空白对照组;模型组(A/R组),缺氧6 h再给氧3 h;3个As给药组,缺氧6 h再给氧3 h,并于缺氧及再给氧开始时分别加入终浓度为1.25、2.5、5.0 mg·L-1的As,观察As对细胞上清液中缺氧及再给氧后LDH、CK漏出量、MDA含量、SOD活性的影响.用MTT法检测As对缺氧再给氧损伤心肌细胞线粒体的保护作用.结果 As可抑制缺氧及再给氧后LDH、CK漏出量,降低MDA含量,提高SOD活性,升高OD570吸光度值.结论 As对培养心肌细胞的缺氧再给氧损伤具有保护作用,提示其作用机制与增强细胞抗氧化作用,减少自由基及脂质过氧化物导致的细胞膜损伤有关.
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蒺藜皂苷对缺血再灌注损伤心肌细胞的保护作用
目的研究蒺藜皂苷(GSTT)对缺血再灌注损伤心肌细胞的保护作用.方法通过模拟缺血再灌注模型,研究GSTT对再灌注后LDH、CK漏出量,MDA含量,SOD活性,以及TNF-α和IL-6分泌量;用浓度为16.25 ng*L-1 TNF-α损伤心肌细胞,研究GSTT对培养液中NO生成量的影响,并用MTT法检测GSTT对TNF-α损伤心肌细胞线粒体酶的保护作用.结果 GSTT可抑制再灌注后LDH、CK漏出量,减少MDA含量,升高SOD活性,抑制TNF-α和IL-6的分泌量;减少TNF-α引起NO生成量,升高OD490吸光度值.结论 GSTT可减轻缺血再灌注对心肌细胞的损伤程度,对心肌细胞具有直接的保护作用.
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前列腺素E1对缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响
目的探讨PGE1对缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其作用机制.方法用原代培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧30 min复氧40 min损伤模型,DNA琼脂糖凝胶电泳和原位末端标记技术(TUNEL)检测缺氧复氧乳鼠心肌细胞的凋亡,原位杂交法检测bcl-2、bax mRNA的含量.结果模型组乳鼠心肌细胞 DNA琼脂糖凝胶电泳呈明显的梯状图谱,TUNEL法检测到较多的阳性标记,PGE1各给药组随剂量的增加,电泳中的DNA梯状条带逐渐减弱,PGE1(0.127 μmol·L-1)组心肌细胞的凋亡率(6.80%±1.99%)与模型组(11.40%±2.32%)相比差异有统计学意义(P<0.01);模型组与正常组相比bcl-2 mRNA的含量下降、bax mRNA的含量增加,PGE1各给药组与模型组相比能明显的上调bcl-2 mRNA的含量、下调bax mRNA的含量.结论离体培养的乳鼠心肌细胞建立的缺氧复氧损伤模型可诱导心肌细胞的凋亡.PGE1可明显抑制这种凋亡的发生,其机制可能与促进bcl-2 mRNA的表达、抑制bax mRNA的表达有关.
