人工组织神经移植物辅加神经再生素修复大鼠周围神经缺损的实验研究

目的用人工组织神经移植物辅加神经再生素(NRF)桥接修复大鼠周围神经缺损.方法用壳聚糖套管和聚乙醇酸纤维制成人工组织神经移植物,辅加促神经生长的中药有效组分NRF,桥接大鼠坐骨神经缺损10 mm.术后作足迹试验;24周时对再生神经进行电生理学测试、形态学观察和计量学统计.结果术后24周内,动物未见炎症及排斥反应.实验组的再生神经在足迹试验、电生理学、形态学及计量学上优于硅胶管桥接组.结论人工组织神经移植物辅加NRF与周围神经组织具有良好的生物相容性;它对缺损的神经修复有较好的桥梁和促进作用.

神经再生素对PC12细胞凋亡的影响

目的研究神经再生素(NRF)对PC12细胞凋亡的影响并初步探讨其机制. 方法通过观察细胞形态的变化、MTT微量比色法、流式细胞仪Annexin V和caspase-3活力检测等方法,了解NRF对低浓度血清培养下PC12细胞凋亡的影响.NGF和RPMI1640作对照. 结果培养细胞的突起生长数量和长度、MTT微量比色的A值、Annexin V-PE/7AAD显示的凋亡细胞比例、caspase-3活力的检测等指标,在NRF组和NGF组间无明显差异;而与空白对照组间差异有显著性意义. 结论神经再生素对低血清培养下PC12细胞的凋亡有抑制作用.

神经再生素促大鼠海马神经元生长的研究

目的 研究牛膝提取物神经再生素(NRF)对体外培养的大鼠海马神经元生长的促进作用及其对生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响.方法 以体外原代培养的胎鼠海马神经元为研究模型,通过相差显微镜采用Scion软件测量不同浓度NRF(0.25mg/L、0.5mg/L、1mg/L)、不同作用时间(6h、12h、24h)对海马神经元神经突起生长的影响;通过实时荧光定量PER观察NRF不同浓度(0.25mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)及不同作用时间(6h、12h、24h)对海马神经元GAP-43基因表达的影响;采用免疫荧光细胞化学法和Western blotting,观察不同浓度NRF(0.25mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)加药24h后,对海马神经元GAP-43表达的影响.结果 NRF可有效地促进海马神经元的生长,加药后24h作用浓度为1mg/L时,作用强;实时荧光定量RT-PCR、免疫荧光细胞化学法和Western blotting的结果提示,NRF能增加体外培养的海马神经元GAP-43的表达,浓度为1.0mg/L时,作用佳.结论 NRF能促进体外培养的海马神经元神经突起的生长和GAP-43基因的表达,表明NRF对海马神经元具有神经营养作用.

基于分维数的NRF促大鼠DRGs神经突起生长显微图像分析

应用分形几何原理分析神经再生素(NRF)对体外培养新生大鼠背根神经节(DRGs)生长的影响,研究分维数与NRF浓度促DRGs神经突起生长之间的关系.结果表明, 分维数可以作为一个重要指标定量表征大鼠DRGs神经元生长与NRF浓度的依赖关系.

三种Feulgen染色方法的比较

目的探索一种快速的Feulgen染色方法,并尝试其在细胞核DNA含量分析中的应用.方法选取十只健康小白鼠的肝细胞涂片,每只小白鼠的肝细胞涂片分成三组,采用快速Feulgen 染色法、改良Feulgen染色法、传统Feulgen染色法对这三组分别染色,用TIGER细胞图像分析仪测量肝细胞涂片内单个完整肝细胞核的DNA含量, 比较各组染色效果和肝细胞核DNA 含量的测量结果.结果应用快速Feulgen染色法,获得了满意的效果,细胞核染色深,结构清晰,背景着色淡,而所需染色时间仅为15分钟;同一种方法染色的不同小鼠肝细胞涂片,相同DNA含量倍体肝细胞核的DNA含量均值的变异系数(CV)＜10 %, CV(快速) ＜CV(改良) ＜CV(传统);不同方法染色的同一小鼠肝细胞涂片,同一倍体的肝细胞核DNA含量存在差异,IOD(快速)＞IOD(改良)＞IOD(传统);各组2、4、8倍体肝细胞核DNA含量间的比值均接近2或4;结论此种快速Feulgen染色方法优于其他两种方法,可应用于图像分析系统对细胞核DNA含量与倍体的测量和分析.

神经再生素促进神经干细胞的生长和分化

目的:研究神经再生素对体外培养神经干细胞分化的促进作用及对其生长相关蛋白(GAP43)、神经丝蛋白(NF-H)表达的影响.方法:取出生3～5d的新生SD大鼠大脑皮层进行神经干细胞的体外培养、鉴定,神经干细胞与0、 1、 2mg/L的神经再生素(NRF)共培养8d,相差显微镜观察分析,应用Real-time PCR对与不同浓度的NRF(0、 1、 2、 4、 8mg/L)共培养8d的神经干细胞进行GAP43、 NF-H的表达量检测.结果:成功培养出具有多向分化潜能的神经干细胞;神经再生素可明显促进神经干细胞的分化,并能在一定范围内随浓度递增而有效促进GAP43、 NF-H的表达,且佳作用浓度为4mg/L.结论:神经再生素可以促进神经干细胞的生长和分化.

神经再生素促大鼠背根神经节神经突起生长显微图像的分形特征

目的:研究分维数与神经再生素(nerve regeneration factor,NRF)剂量促离体培养新生大鼠背根神经节(dorsal root ganglions,DRGs)神经突起生长之间的关系.方法:采用计盒维数方法,计算在不同浓度NRF条件下大鼠DRGs荧光显微图像的分维数.结果:离体培养大鼠DRGs显微图像的分维数随神经突起数量和长度的变化呈现一致的变化规律.结论:分维数可以作为一个重要定量指标表征大鼠DRGs神经元生长与NRF浓度的依赖关系.

神经再生素促进大鼠坐骨神经损伤后再生

目的:探讨神经再生素(NRF)对大鼠坐骨神经损伤后再生的影响.方法:SD大鼠30只,雌雄各半,随机分为3组:NRF低、高剂量组和空白对照组.分别于坐骨神经夹伤术后10、15、20 d测定大鼠坐骨神经功能指数(SFI),分离出大鼠双侧坐骨神经行电生理学检测,计算神经干动作电位恢复率;各组随机选取2只大鼠,应用透射电镜观察再生坐骨神经超微结构;其余大鼠行光镜下观察脊髓腰膨大(L4～L6)、夹伤远端处坐骨神经、损伤侧腓肠肌组织,并测定脊髓前角运动神经元数、再生有髓神经纤维数、腓肠肌肌细胞截面积等指标.结果:术后10 d各组SFI无显著差异,术后15 d仅仅高剂量组SFI明显优于对照组(P＜0.01),术后20 d高、低剂量组SFI均优于对照组(P＜0.01,P＜0.05);术后20 d高、低剂量组及对照组大鼠坐骨神经干动作电位的恢复率分别为(57±26)%、(44±15)%、(31±9)%,其中高剂量组与对照组相比有显著差异(P＜0.05);高剂量NRF组的有髓神经纤维成熟度优于对照组,而变性纤维少于对照组;光镜下NRF高剂量组再生神经纤维排列致密整齐、结构均匀,腓肠肌肌细胞饱满、排列整齐,双侧脊髓前角运动神经元更接近;NRF高剂量组脊髓前角运动神经元计数、有髓神经纤维计数均显著高于对照组(P＜0.05,P＜0.01),NRF高、低剂量组腓肠肌肌细胞截面积显著高于对照组(P＜0.01,P＜0.05).结论:NRF能促进坐骨神经再生及其功能恢复.

神经再生素对糖尿病大鼠周围神经病变治疗作用研究

目的:观察神经再生素对糖尿病大鼠周围神经病变的影响.方法:采用链脲菌素(STZ)糖尿病(DM)大鼠模型.造模成功1个月后给予药物处理,每日腹腔注射1次,连续给药8周.测定各组大鼠坐骨神经电生理及超微结构改变.结果:经神经再生素治疗后,糖尿病大鼠坐骨神经传导速度明显增快,感觉潜伏期(SL)减小,波幅升高,超微结构亦有明显改善.结论:神经再生素可改善神经髓鞘功能,有效提高糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经的感觉神经传导速度.

神经再生素对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:研究神经再生素(NRF)对纯化培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制.方法:采用纯化培养的心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,观察心肌细胞形态学变化,测定细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)和线粒体脱氢酶含量改变,探讨NRF对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用.结果:缺氧/复氧损伤后,胞体折光性下降,突起缩短或消失,搏动减弱或消失,NRF各剂量组心肌细胞形态均较缺氧/复氧组明显改善,NRF各剂量组SOD、MDA、线粒体脱氢酶活性与缺氧/复氧组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:神经再生素具有明显的抗缺氧/复氧损伤,保护心肌作用,其机制可能与其抑制心肌脂质过氧化损伤有关.

NGD及NRF对大鼠坐骨神经缺损修复的电生理学检测

目的:观察神经生长液(NGD)及神经再生素(NRF)修复大鼠坐骨神经缺损的效果.方法:用生理盐水(NS)、NRF桥接以及NRF桥接+口服NGD修复大鼠坐骨神经缺损,术后12周检测大鼠坐骨神经干动作电位传导速度及肌电图.结果:行为方面NGD+NRF组比NS组恢复早,NS组、NRF组、NRF+NGD组神经干动作电位传导速度的平均值分别为5.720m/s、16.514m/s、21.310m/s.NS组与NGD+NRF组的神经干动作电位传导速度经统计学分析有显著性差异(P<0.01).NGD+NRF组与NS组的肌电图比较,前者的潜伏期短、峰谷值大、运动神经传导速度快.结论:NGD+NRF具有良好促进神经再生作用.

神经再生素对神经细胞生长影响的实验研究

目的:探讨神经再生素(NRF)对离体培养的PC12细胞、背根神经节细胞、大脑皮层细胞生长影响的分子生物学机制.方法:采用细胞体外培养、半定量RT-PCR、Western blot方法,观察和比较NRF组(添加NRF)、NGF组(添加NGF)和空白对照组(基础培养基)中细胞生存状况及相关基因mRNA 及其蛋白水平的表达变化.结果:NRF作用于离体培养的PC12细胞,可促使其分化;作用于背根神经节细胞,GAP-43和NF-L mRNA表达在不同时间呈不同程度的上调;作用于大脑皮层细胞,GAP-43和NF蛋白亦比对照组表达量为高.结论:NRF具有维持细胞生存和促进神经细胞突起生长的作用,并可使神经元GAP-43和NF mRNA表达及其蛋白合成上调.

HRP逆行示踪对人工组织神经移植物辅加NRF修复大鼠坐骨神经缺损的评价

目的:用HRP逆行示踪法评价人工组织神经移植物辅加神经再生素修复大鼠周围神经缺损的效果.方法:壳聚糖套管和聚乙醇酸纤维组成人工组织神经移植物并辅加神经再生素,修复大鼠的坐骨神经缺损(10mm).术后24周时,进行大鼠HRP逆行示踪试验.结果:脊髓及背根神经节中均出现数量不等的被HRP标记的神经元胞体.结论:人工组织神经移植物辅加神经再生素对缺损的神经修复具有良好的桥梁作用和促神经生长作用.

人工组织神经移植物修复狗坐骨神经缺损后荧光素逆行追踪试验

目的:用荧光素逆行追踪试验了解人工组织神经移植物辅加神经再生素桥接缺损坐骨神经后,神经再生修复的情况.方法:人工组织神经移植物辅加神经再生素桥接狗缺损的30mm坐骨神经手术后6个月时,于原远端吻合口下10mm处注射快蓝(FB);取脊髓及相应背根神经节,观察神经元被荧光素标记情况.结果:脊髓及背根神经节中均出现数量不等的被FB标记的神经元胞体.结论:人工组织神经移植物能较好的修复长距离缺损的神经.

神经再生素对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:探讨神经再生素(nerve regeneration factor,NRF)对缺氧/再复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)心肌细胞的保护作用.方法:取Winstar乳鼠心脏,制成心肌细胞悬液,贴壁法培养心肌细胞并进行缺氧/再复氧损伤,观察神经再生素对缺氧/再复氧心肌细胞形态及细胞内SOD、MDA及LDH水平的影响,采用流式细胞仪双标法检测心肌细胞凋亡百分率.结果:神经再生素能升高SOD活性,降低MDA含量和LDH活性,减少心肌细胞凋亡率.结论:神经再生素对缺氧/再复氧心肌细胞损伤具有一定的保护作用.

神经再生素对PC12细胞Caspases-3的影响

目的:探讨神经再生素抑制PC12细胞凋亡的作用机制.方法:采用流式细胞仪和RT-PCR,观察神经再生素对无血清状态下PC12细胞Caspases-3活力及Bax、Caspases-3 mRNA的影响.结果:与对照组相比,神经再生素可抑制无血清培养的PC12 细胞Caspases-3活力,并可使Bax、Caspases-3 mRNA的表达减少.结论:神经再生素可以通过抑制Caspases-3基因表达和活化,而发挥其抗凋亡作用.

神经再生素对大鼠大脑皮层细胞的作用

目的:观察神经再生素(NRF)作用于离体培养的SD大鼠大脑皮层细胞过程中细胞活性、基因的表达变化,探讨NRF促神经生长机制.方法:SD大鼠大脑皮层细胞分离、培养于含NRF L15培养基,采用RT-PCR方法检测培养细胞生长相关蛋白43 (GAP-43)、神经丝蛋白(NF-L)和锌指样蛋白(DDP2)基因经NRF作用后基因表达变化 ,MTT法检测细胞活力.结果: 2 μg/ml NRF作用于培养大脑皮层细胞为较佳使用浓度;NRF作用6～12 h,GAP-43、NF-L和DDP2基因表达分别上调至峰值200%,150%,135%;NRF作用24 h后,基因表达回复至正常值,而细胞活力仍上调23.2%.结论:NRF可通过上调神经生长相关基因表达,提高细胞活力达到促神经生长.

神经再生素对皮层细胞基因表达影响的基因芯片研究

目的:采用基因芯片技术,观察神经再生素对体外培养的胚鼠大脑皮层细胞基因表达的影响.方法:取ICR胚鼠(15 d)大脑皮层细胞,无血清培养.实验组加入神经再生素(2 μg/ml),对照组加入等量基础培养液.培养6 h后,抽提实验组和对照组皮层细胞总RNA,经反转录分别用Cy5、Cy3荧光标记成cDNA探针.将荧光标记的cDNA与MGEC-40s基因表达谱芯片杂交,芯片扫描、数据处理.结果:实验组和对照组大脑皮层细胞出现64条差异性表达的基因.呈现上调的基因有:钙调素结合蛋白、锌指蛋白激酶、核糖体蛋白等基因;下调基因有:抑制细胞分裂因子等基因.结论:神经再生素可作用于体外培养的胚鼠大脑皮层细胞,从基因调控水平促进脑细胞生长.

神经再生素对新生大鼠脊髓细胞凋亡的影响

目的:观察神经再生素对新生大鼠脊髓细胞凋亡的影响.方法:将新生SD大鼠一侧坐骨神经切断后,用无菌止血海绵包裹断离的神经近侧端,海绵内加入神经再生素,术后3、6、12 h用TUNEL法在光镜下检测L4-L5脊髓细胞凋亡情况,分别以神经生长因子和生理盐水作为阳性和阴性对照.结果:新生大鼠在坐骨神经切断后脊髓细胞出现大量凋亡,神经再生素组凋亡细胞数量较生理盐水组显著减少( P <0.01);神经再生素组与神经生长因子组之间凋亡细胞数量的差别无显著性意义( P >0.05).结论:神经再生素对受损的神经组织细胞有保护作用.

实验性铅中毒对大鼠海马p75基因表达的影响/神经生长液对D-半乳糖致衰老模型小鼠的影响/周围神经损伤后相关结构组织学变化的实验研究/神经再生素对PC12细胞凋亡的影响