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神经再生素对PC12细胞凋亡的影响
目的研究神经再生素(NRF)对PC12细胞凋亡的影响并初步探讨其机制. 方法通过观察细胞形态的变化、MTT微量比色法、流式细胞仪Annexin V和caspase-3活力检测等方法,了解NRF对低浓度血清培养下PC12细胞凋亡的影响.NGF和RPMI1640作对照. 结果培养细胞的突起生长数量和长度、MTT微量比色的A值、Annexin V-PE/7AAD显示的凋亡细胞比例、caspase-3活力的检测等指标,在NRF组和NGF组间无明显差异;而与空白对照组间差异有显著性意义. 结论神经再生素对低血清培养下PC12细胞的凋亡有抑制作用.
关键词： 神经再生素 凋亡 磷脂结合蛋白 半胱氨酸蛋白水解酶-3 PC12细胞 -
慢性砷中毒对小鼠齿状回caspase-3表达的影响
目的 观察慢性砷中毒对成年小鼠齿状回神经元的形态学影响,探讨慢性砷中毒对成年小鼠脑部的神经毒性机制.方法 选取健康成年昆明小鼠80只,雌雄各半,分为对照组、高、中、低剂量砷染毒组,每组20只,高、中、低剂量砷染毒组分别以As03的1/5、1/10、1/40 LD50(9、4.5、1.1 mg/kg)灌胃染毒,对照组以蒸馏水灌胃,连续3个月.利用免疫组织化学和蛋白印迹技术观察小鼠齿状回部位神经元半胱氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)蛋白的表达.结果 免疫组化染色显示,与正常对照组比较,砷染毒组小鼠齿状回caspase-3阳性细胞明显增多(P＜0.01),阳性反应产物平均光密度增高(P＜0.01),同时蛋白印迹结果显示随砷中毒剂量的增加,小鼠齿状回caspase-3蛋白含量随之增加(P＜0.01),各剂量组雌雄间各数据差异无统计学意义(P＞0.05).结论 慢性砷中毒导致脑齿状回神经元细胞凋亡可能与齿状回细胞caspase-3增加有关,同时脑细胞caspase-3随砷浓度增加而增高.
关键词： 砷中毒 半胱氨酸蛋白水解酶-3 免疫组化 齿状回 -
大鼠半胱氨酸蛋白水解酶-3基因真核表达质粒和RNA干扰质粒的构建及鉴定
目的 构建SD大鼠半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3的真核表达质粒和干扰质粒,探究干扰质粒对Caspase-3表达的干预效应。方法 从SD大鼠软骨终板细胞中获得模板cDNA并扩增,约834 bp。克隆至载体pEGFP-N1,获得重组质粒pEGFP-N1-Caspase-3。针对Caspase-3设计4对RNAi靶点序列,克隆至载体pcDNA6.2。成功构建pcDNA6.2-Caspase-3-1、pcDNA6.2-Caspase-3-2、pcDNA6.2-Caspase-3-3、pcDNA6.2-Caspase-3-4,构建对照质粒pcDNA6.2-miRNA。将5个干扰质粒分别与pEGFP-N1-Caspase-3(用量比为7:1)共转染至293T细胞,qPCR检测转染48h后对Caspase-3表达的干预效应。结果 通过菌落聚合酶链反应(PCR)、酶切及测序表明pEGFP-N1-Caspase-3和干扰质粒构建成功;共转293T细胞后,qPCR示pcDNA6.2-Caspase-3-2、pcDNA6.2-Caspase-3-3干预组的Caspase-3的表达高于对照组,分别为33％和8％,而pcDNA6.2-Caspase-3-1、pcDNA6.2-Caspase-3-4干预组的Caspase-3的表达与对照组比较明显减少,抑制效率分别为24％和67％ (P ＜0.05)。结论 成功构建了Caspase-3的表达质粒和干扰质粒,并证实pcDNA6.2-Caspase-3-4对Caspase-3的表达具有明显的抑制效应。
关键词： RNA干扰 半胱氨酸蛋白水解酶-3 质粒
