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精子蛋白sp32/OY-TES-1mRNA及其蛋白在正常组织表达的探讨
目的 了解正常组织中sp32/OY-TES-1 mRNA的表达量是否存在差异以及该蛋白的表达情况,为sp32/OY-TES-1表达谱增加更多信息.方法 提取40例(19种)正常组织总RNA,逆转录-聚合酶合成cDNA,普通PCR检测cDNA质量;构建目的 基因sp32/OY-FES-1及看家基因HPRT质粒,制备标准品,绘制标准曲线,建立实时定量PCR(TaqMan)方法和优化反应体系,检测组织中sp32/OY-TES-1和HPRT的表达,sp32/OY-TES-1mRNA的表达量以OY-TES-1/HPRT表示.通过制备的OY-TES-1多克隆抗体,结合免疫组织化学检测sp32/OY-TES-1蛋白在多种正常组织中的表达.结果 正常组织中sp32/OY-TES-1mRNA阳性率为72.50%(29/40);2.非睾丸正常组织中sp32/OY-TES-1 mRNA的相对表达量值(目的 基因/看家基因)为0.000 1～0.495 0,呈对数正态分布;3.睾丸组织中sp32/OY-TES-1 mRNA的相对表达量为44.9,是其他正常组织的91～1 000倍;4.免疫组织化学(IHC)显示在所检测的多种正常组织和细胞中(10例睾丸组织、8例结肠、7例肝、6例骨骼肌、5例胃、5例晶状体、4例精子、3例外周血白细胞和1例肾),除4例精子和1例肾组织中的肾小管外,其余均未见OY-TES-1蛋白阳性反应.结论 sp32/OY-TES-1 mRNA广泛地表达在各种正常组织,表达量因组织不同而异;睾丸组织是所检测的正常组织中其mRNA表达量高的组织.而sp32/OY-TES-1蛋白比其mRNA更具有限制性表达的特点.
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精子蛋白Sp32/OY-TES-1基因mRNA表达的探讨
目的了解精子蛋白Sp32/OY-TES-1基因mRNA的表达特点,研制癌-睾丸抗原(CTA)的肿瘤疫苗.方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测95例正常人组织及125例人肿瘤组织中Sp32/OY-TES-1mRNA的表达,随机选取RT-PCR阳性产物12份进行DNA测序;对所得数据进行统计学分析. 结果Sp32/OYTES-1在正常和肿瘤组织中的表达频率分别为68.4%(65/95)和44.00%(55/125),两者比较有统计学意义(P＜0.05).在24种不同器官的正常组织中,21种表达Sp32/OY-TES-1基因mRNA(87.50%).DNA测序结果证实,RTPCR产物为Sp32/OY-TES-1基因. 结论Sp32/OY-TES-1基因的mRNA在正常组织中广泛表达,它是否可归为睾丸和肿瘤限制性表达的基因尚需进一步研究.
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癌-睾丸抗原在多发性骨髓瘤中研究进展
癌-睾丸抗原(cancer-testis antigens,CTA)是一组肿瘤相关抗原,主要定位于X染色体,限制性表达在正常的睾丸、卵巢、胎盘等免疫豁免组织,在其他正常组织中不表达或低表达,而在各种肿瘤组织中异常表达.CTA相关蛋白具有免疫原性,可以被表观遗传学药物所调控,是肿瘤免疫治疗的有效靶点.多发性骨髓瘤(multiple my-eloma,MM)难以被治愈,其临床复发率高.有研究证实,多发性骨髓瘤细胞系及原代细胞均表达CTA,并提示其与预后相关.现就CTA在MM免疫治疗中的研究现状作一综述,为多发性骨髓瘤的临床治疗提供新的思路.
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OY-TES-1在肝细胞癌中的表达及抗体血清学分析
目的:了解OY-TES-1在肝细胞癌(HCC)中的表达及其抗体出现情况,探讨将OY-TES-1用于肿瘤免疫诊疗的可能性.方法:利用实时定量PCR和免疫组织化学技术,从mRNA和蛋白质两个水平研究OY-TES-1在HcC中的表达特点;采用酶联免疫吸附实验检测HCC患者及正常人血清中相应的抗体,并对其临床意义做初步的分析.结果:经实时定量PCR检测,HCC中OY-TES-1mRNA阳性率为73.21%(41/56),癌旁阳性率为64.86%(24/37),有17对HCC及配对癌旁组织均表达阳性,OY-TES-1mRNA在HCC及癌旁组织两者的表达阳性率无差异(P>0.05);在37对HCC及配对癌旁组织中,HCC中OY-TES-1mRNA水平明显高于对应的癌旁组织,其差异与病理分级有关CP<0.05).HCC中OY-TES-1蛋白阳性率为40%(4/10).血清学检测未发现76例正常人和17例肝硬化患者血清中有相应抗体,HCC患者血清抗体阳性率为20%(12/58),OY-TES-1血清抗体的出现与HCC患者的年龄、性别等临床资料无相关.结论:OY-TES-1在HCC中有较高的表达频率及表达水平,该蛋白具有较强的免疫原性,他有望作为用于HCC辅助诊断及免疫治疗的肿瘤抗原.
关键词： 癌-睾丸抗原 OY-TES-1基因 基因表达 血清 -
滑膜肉瘤X断点基因在原发性肝癌中的表达及意义
目的 检测原发性肝癌(HCC)中滑膜肉瘤X断点基因(SSX基因)的表达及其与临床指标的相关性.方法 实时PCR检测SSX1-SSX5 mRNA的表达;蛋白印迹和免疫组化检测SSX1蛋白表达;分析SSX mRNA表达和SSX1蛋白表达与临床指标的相关性.结果 在肝癌细胞株BEL-7404、Hep G2、SMMC-7721,检测到SSX1、SSX2、SSX3 mRNA表达.在26例HCC组织SSX1、SSX2、SSX3、SSX4、SSX5 mRNA水平均有表达,表达率分别为53.8％、42.3％、50.0％、46.2％、26.9％.SSX1 mRNA的表达与AFP水平无关(P＞0.05),在正常值组及高值组均有较高的表达率,高龄组的表达率(85.7％)高于低龄组(16.7％,P＜0.05).在肝癌组织SSX1蛋白的表达率为50％,癌旁及肝硬化组织中均无表达.49例HCC石蜡组织切片检测:SSX1蛋白的表达率(46.9％)高于配对癌旁组织的表达率(18.4％,P＜0.05).SSX1蛋白在大肝癌组的表达率(68.3％)高于小肝癌组(29.6％,P＜0.05).结论 SSX1 mRNA基因在HCC中呈高比例、高特异表达,为HCC免疫治疗提供了新的理想靶位.SSX1表达检测对HCC的辅助诊断具有潜在价值.
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DNA甲基转移酶基因干扰对HepG2细胞癌-睾丸抗原再表达的影响
目的 探讨抑制甲基转移酶(DNMT1、DNMT3a和DNMT3b)对肝细胞癌细胞中癌-睾丸抗原表达的影响及相关机制.方法 分别采用针对DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的siRNA(DNMT1+3a+3b),针对DNMT1和DNMT3a的siRNA(DNMT1+3a),针对DNMT1和DNMT3b的siRNA(DNMTl+3b)以及针对DNMT3a和DNMT3b的siRNA(DNMT3a+3b)转染HepG2细胞,并以使用5-杂氮脱氧胞嘧啶(5-Aza-dC)处理的细胞作为阳性对照,采用RT-PCR、实时定量PCR和Western blotting检测细胞中DN-MT及癌-睾丸抗原的表达情况,并采用甲基化特异PCR(MSP)检测部分癌-睾丸抗原基因启动子的甲基化状态.结果 经siRNA干扰后,细胞中DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表达量均明显降低.癌-睾丸抗原CT10和SSX1在转染DNMT1+3a和DNMT1+3b的细胞中出现再表达,而MAGE1及MAGE3在各siRNA转染细胞中均有表达,且无明显差异.CT10的启动子区发生了去甲基化,但MAGE1启动子区处于非甲基化状态.结论 在HepG2细胞中,干扰DNMT可使癌-睾丸抗原基因的启动子区发生去甲基化,后者可使由甲基化导致的不能表达的癌-睾丸抗原基因发生再表达.
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黑素瘤抗原编码基因A1蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义
目的 研究黑素瘤抗原编码基因(MAGE)A1蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达情况,并探讨其与临床病理因素及预后的关系.方法 选取2006年1月至2012年12月行根治性手术治疗的197例食管鳞状细胞癌患者的癌组织和癌旁组织,制作组织芯片,应用免疫组织化学法检测MAGEA1蛋白的表达情况.结果 MAGEA1蛋白主要表达于肿瘤细胞的胞质和胞核,癌组织MAGEA1蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织[73.6％(145/197)比5.6％(11/197)],差异有统计学意义(P<0.01).食管鳞状细胞癌患者MAGEA1蛋白阳性表达与性别、年龄、吸烟史、饮酒史、上消化道肿瘤家族史、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、肿瘤分化程度、肿瘤部位及TNM分期均无关(P>0.05).Kaplan-Meier生存分析结果显示,MAGEA1蛋白阳性患者5年生存率明显低于MAGEA1蛋白阴性患者(37.2％比53.8％),差异有统计学意义(P=0.018).多因素分析结果显示,MAGEA1蛋白表达阳性是导致食管鳞状细胞癌患者预后不佳的独立危险因素(HR=1.91,95％CI 1.22～2.98,P=0.004).结论 食管鳞状细胞癌组织中MAGEA1蛋白阳性表达率较高,且与患者预后负相关,可能成为食管鳞状细胞癌免疫治疗的一个靶目标.
关键词： 食管肿瘤 预后 黑素瘤抗原编码基因A1蛋白 癌-睾丸抗原 -
癌-睾丸抗原MAGE-C1及其在肿瘤免疫方面的研究进展
癌-睾丸抗原家族(Cancer testis antigens,CTAs)是一类能在多种肿瘤组织中表达,而睾丸、胎盘和胎儿卵巢以外的正常组织几乎不表达的抗原.这一表达特性使CTAs成为肿瘤免疫治疗的理想靶抗原.MAGE-C1/CT7 (melanoma antigen family C1)是CTAs家族中一个新的亚家族,近几年在肿瘤免疫领域研究较多.本文就MAGE-C1/CT7在肿瘤免疫方面的研究进展作一综述.
关键词： 癌-睾丸抗原 肿瘤免疫疗法 MAGE-C1/CT7 -
精子相关抗原与肿瘤
癌-睾丸抗原是一种重要的肿瘤标记抗原,由于其表达特异性,以及在发挥抗肿瘤免疫作用的同时,不会对正常组织及生殖细胞产生危害,因此具有用于肿瘤免疫治疗的巨大潜力.其中精子相关抗原作为一种新型的癌-睾丸抗原已成为研究热点之一;精子相关抗原是一类主要表达于精子细胞的抗原,近年来研究表明在某些肿瘤组织中也可检测到其不同程度的表达;本文主要概述了几种研究较为深入的精子相关抗原的生物特性,及其在肿瘤组织中的表达情况以及对肿瘤生物学特性如病理分期、增殖、侵袭、转移等的影响;由于精子相关抗原在多种肿瘤组织中表达具有特异性,并且能够引起体液免疫应答,有可能成为肿瘤早期诊断及免疫治疗的理想靶分子.
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癌-睾丸抗原基因在神经胶质瘤干细胞中的表达
背景:癌-睾丸抗原基因在胶质瘤干细胞表达还不甚清楚.目的:检测癌-睾丸抗原基因在神经胶质瘤干细胞中的表达.方法:通过神经球培养的方法而分离干细胞.以半定量PCR及实时荧光定量PCR检测癌-睾丸抗原基因在母细胞、干细胞与分化细胞中的表达.结果与结论:以神经球培养方式从胶质瘤细胞系中可分离出肿瘤球,将肿瘤球培养在含血清的培养基中,它的形态呈贴壁分化,且与母细胞没有区别.半定量PCR及实时荧光定量PCR检测发现与母细胞和分化细胞相比,癌-睾丸抗原基因在干细胞中的表达高.提示癌-睾丸抗原基因可能为肿瘤干细胞的表面抗原.
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癌-睾丸抗原OY-TES-1多克隆抗体的制备及鉴定
目的 制备癌-睾丸抗原OY-TES-1多克隆抗体,并进行鉴定.方法 以大肠杆菌表达的MBP/OY-TES-1融合蛋白作为抗原,免疫新西兰白兔,制备抗血清.经蛋白A凝胶纯化后,采用ELISA法检测抗血清的效价,Western blot和免疫组化法检测多克隆抗体的特异性.结果 制备的抗血清经ELISA检测,效价不低于1∶128 000,纯化后,其效价不低于1∶8 000.Western blot显示,抗OY-TES-1多抗可与MBP/OY-TES-1融合蛋白、MBP、OY-TES-1重组蛋白和睾丸组织总蛋白特异性结合;免疫组化检测显示,精子头部呈现阳性反应.结论 已成功制备了效价高、特异性强的癌-睾丸抗原OY-TES-1多克隆抗体,为深入研究OY-TES-1的生物学功能提供了工具.
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癌睾丸抗原TFDP3与乳腺癌上皮间质化(EMT)的相关性研究
目的:本研究探讨了癌睾丸抗原TFDP3与乳腺癌细胞上皮间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系.方法:本研究中选取了乳腺癌细胞系(MCF-10A,MCF-7,SK-BR-3和MDA-MB-231)作为研究对象,通过Western Blot的方法筛选获得了TFDP3低水平表达的乳腺癌细胞株.进一步通过质粒转染的方式构建TFDP3过表达的细胞系模型,观察TFDP3在EMT中的作用.结果:TFDP3在MCF-10A及SK-BR-3中不表达,在间质化程度较高的MDA-MB-231中高水平表达,而在上皮化程度较高的MCF-7中的低水平表达.MCF-7中过表达TFDP3后,上皮细胞标记分子E-cadherin表达下调,而间质细胞标记分子N-cadherin、Snail、Twist及细胞骨架蛋白Vimentin表达上调.结论:TFDP3可以促进乳腺癌细胞发生EMT.
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肿瘤坏死因子α和甲基化转移酶抑制siRNA对Raji细胞中癌-睾丸抗原表达的影响
目的:研究细胞因子TNF-α和针对DNA甲基化转移酶的siRNA对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞的癌-睾丸抗原表达情况的影响.方法:1.加入不同终浓度的细胞因子TNF-α,与Raji细胞株共培养,在不同的时间点检测癌-睾丸抗原表达情况的改变.2.转入针对DNA甲基化转移酶的siRNA,检测癌-睾丸抗原表达情况的改变.结果:在TNF-α作用后,一些细胞组会出现SSX-1表达上调,而siRNA干扰作用后,转染针对DNMT1和DNMT3b的细胞组或受5-aza-dC作用的细胞组的PRAME发生再表达.结论:TNF-α和siRNA都能诱导某些癌睾丸抗原的表达或使其表达增强.
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DNA甲基转移酶基因干扰对K562细胞癌-睾丸抗原表达的影响
目的:探讨抑制甲基转移酶(DNMT)对K562细胞中癌-睾丸抗原表达的影响及其机制.方法:分别采用针对DNMT家族不同成员的siRNA转染K562细胞,,采用RT-PCR检测细胞中DNMT及癌-睾丸抗原的水平表达,并采用甲基化特异PCR(MSP)检测部分癌-睾丸抗原基因启动子的甲基化状态.结果:经siRNA干扰后,K562细胞中DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表达量均明显降低,癌*睾丸抗原CT10的启动子区序列发生了去甲基化,但处于非甲基化状态的MAGE-A1启动子区没有发生任何改变.干扰DNMT组的K562细胞,再表达癌-睾丸抗原CT10、PRAME和CT9,而MAGE-A1、SSX-1的表达上调,但是NY-ESO-1、HCA587和HCA661的表达状况均没有任何影响.结论:在K562细胞中,干扰DNMT可使部分癌-睾丸抗原基因的启动子区发生去甲基化,从而导致相应的癌-睾丸抗原分子的再表达或表达增加.
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卵巢癌细胞中OY-TES-1基因启动子CpG位点甲基化状态分析
目的:了解卵巢癌SKOV3细胞中OY-TES-1启动子区域CpG位点的甲基化状态.方法:运用免疫细胞化学法检测SKOV3细胞中OY-TES-1蛋白表达；通过硫化测序PCR法,分析SKOV3细胞中OY-TES-1启动子区域CpG位点的甲基化状态,并与睾丸组织相比较.结果:免疫细胞化学法检测结果显示,SKOV3细胞中OY-TES-1蛋白呈阳性反应；在检测的OY-TES-1启动子区域(转录起始点-127 bp～+110 bp,含24个CpG位点)中,CpG位点的甲基化频率为80.21％,其甲基化状态明显高于睾丸组织.结论:SKOV3细胞中OY-TES-1启动子CpG位点处于高甲基化状态,进一步可探讨甲基化抑制剂氮杂脱氧胞嘧啶对OY-TES-1甲基化状态及其表达水平的影响.
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卵巢上皮性癌组织中SP17、SPAG9、OY-TES-1基因的去甲基化表达及其与临床病理的关系
目的 检测在卵巢上皮性癌与非卵巢癌中,精子蛋白17(SP17)、精子相关抗原9(SPAG9)、OY-TES-1这三种癌-睾丸抗原基因启动子区域去甲基化表达的差异,探讨其与卵巢上皮性癌临床病理分期的关系.方法 收集2015年1月至2016年4月25例新鲜的卵巢上皮性癌组织标本,及25例新鲜的非卵巢癌组织标本,采用DNA酸性亚硫酸盐转化、PCR扩增及甲基化敏感性内切酶方法检测SP17、SPAG9、OY-TES-1在卵巢上皮性癌与非卵巢癌中CpG岛的去甲基化表达.结果 与非卵巢癌组织比较,卵巢上皮性癌组织中SP17、SPAG9、OY-TES-1基因启动子区存在高去甲基化表达(P均＜0.01).三种癌-睾丸抗原基因启动子区域去甲基化表达阳性率在卵巢上皮性癌不同年龄、组织学类型和分化程度中比较,差异无统计学意义(P均＞0.05);SP17、SPAG9启动子区域去甲基化表达阳性率在有淋巴结转移者中高于无淋巴结转移者(P＜0.01,P＜0.05),在Ⅲ～Ⅳ期患者中高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P均＜0.05);而OY-TES-1启动子区域去甲基化表达阳性率仅在有淋巴结转移者中高于无淋巴结转移者(P＜0.05).结论 SP17、SPAG9、OY-TES-1基因启动子区域在卵巢上皮性癌中存在高去甲基化表达,且其去甲基化表达均与患者发病年龄、组织学类型、分化程度无关;部分与淋巴结转移、肿瘤分期相关.SP17、SPAG9、OY-TES-1或可成为卵巢上皮性癌免疫治疗的靶位点.
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癌-睾丸抗原在肿瘤诊断和治疗中的研究进展
近年来大多数恶性肿瘤的发病率呈上升趋势,由于其常缺乏早期诊断手段,癌细胞侵袭、转移、复发的高风险,以及其治疗方法的局限性等,使其成为影响人类身体健康的重要威胁.肿瘤的终演变是由机体免疫系统和癌细胞相互作用的结果决定,健康正常的免疫系统可以及时清除突变的癌细胞,但肿瘤病人普遍存在免疫系统低下,不能有效地识别、杀灭肿瘤细胞;另一方面,肿瘤细胞大量增殖,会进一步抑制患者的免疫功能;此外,肿瘤细胞有多种机制来逃脱免疫细胞的识别与杀伤.癌-睾丸抗原(cancer-testis antigen)是一种肿瘤相关抗原,主要表达在睾丸和胚胎组织的细胞中,在其他正常的组织中低表达或不表达,但在不同组织类型的恶性肿瘤细胞中则有表达,是对于肿瘤早期检测和肿瘤免疫治疗具有潜能的抗原靶点[1].目前已经发现了47个基因家族,超过100个癌-睾丸抗原.本文对癌-睾丸抗原基因在肿瘤诊断和治疗上的发展作一综述.
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癌-睾丸抗原SSX基因家族在视网膜母细胞瘤中的表达研究
目的 检测癌-睾丸抗原SSX1～5 mRNA在视网膜母细胞瘤(RB)组织中表达情况,以及用于RB免疫治疗的可能性.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术对18例RB组织、18例非肿瘤病变视网膜组织及18例眼部正常组织中SSX1～5 mRNA的表达进行分析.结果 18例RB组织中,SSX1、SSX2和SSX4 mRNA的表达率分别为33.3%(6/18)、5.6%(1/18) 和22.2%(4/18);未检测到SSX3和SSX5的表达.RB组织中,至少表达1个SSX基因者为50.0%(9/18);表达2个或2个以上者为11.1%(2/18).在非肿瘤病变视网膜组织以及眼部正常组织中无1例表达SSX1～5 mRNA.SSX1～5基因的表达与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度和临床分期等均无显著相关性(P>0.05).结论 SSX1～5在RB组织中表达频率不尽相同,但具有较强的特异性,提示该基因家族有可能成为RB免疫治疗的靶抗原.
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癌-睾丸抗原MAGE-A1在视网膜母细胞瘤中的表达及其临床意义
目的 检测癌-睾丸抗原MAGE-A1在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)组织中的表达情况,探讨其成为RB特异性免疫治疗靶抗原的可能性.方法 采用RT-PCR技术研究人RB组织、非肿瘤病变视网膜组织及眼部正常组织中MAGE-A1基因的表达情况;采用免疫组织化学技术对RB组织和正常视网膜组织中MAGE-A1蛋白的表达进行分析.结果 MAGE-A1基因在RB组织中的表达率为33.33%;在所有非肿瘤病变视网膜组织及眼部正常组织中则无表达;MAGE-A1基因的表达与患者的各临床指标间无显著相关性(P>0.05).MAGE-A1蛋白在RB组织中的表达率为20%,在正常视网膜组织中则不表达;MAGE-A1蛋白的表达率与患者年龄相关,年龄≤2岁的患者有表达增高的倾向(P<0.05);眼内期有表达增高的倾向(P<0.01);MAGE-A1蛋白的表达与RB患者的性别、肿瘤的分化程度和大小无显著相关性(P>0.05).结论 MAGE-A1在RB组织中有一定量的表达且具有较强的特异性,提示有可能成为RB特异性免疫治疗的靶抗原.
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视网膜母细胞瘤中NY-ESO-1、NY-SAR-35基因的表达及其临床意义
背景 视网膜母细胞瘤(RB)的免疫治疗因创伤小、针对性强而受到广泛关注,寻求相关免疫原性较强的肿瘤抗原是免疫治疗的基础.NY-ESO-I和NY-SAR-35是癌-睾丸抗原(CTA)中的两种基因,检测其在RB组织中的表达可为RB的免疫治疗研究提供依据. 目的 研究RB中NY-ESO-1 mRNA、NY-SAR-35 mRNA的表达情况,探讨将其用于RB特异性免疫治疗靶抗原的可能性. 方法 收集15例RB患儿组织为RB组、12例非肿瘤病变部位视网膜组织为非肿瘤病变组,及22例眼部因其他眼部病变进行手术治疗获取的正常相关眼组织标本为正常组.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测待测组织标本中NY-ESO-1mRNA、NY-SAR-35 mRNA的表达；并按随机数字表法抽取RT-PCR检测的阳性产物直接进行DNA测序,对检测结果与肿瘤病理分级、肿瘤大小、临床分期等临床指标进行分析.结果 15例RB组织中有6例标本表达NY-ESO-1基因,9例标本表达NY-SAR-35基因；在12例非肿瘤病变视网膜组织及22例眼部正常组织中均未见到NY-ESO-1基因和NY-SAR-35基因的表达.NY-ESO-1基因和NY-SAR-35基因的表达均与患者的性别(P=0.426、0.822)、年龄(P=0.180、0.464)、病理分型(P=0.744、0.582)、肿瘤大小(P=0.760、0.790)、临床分期(P=0.868、0.707)等临床相关指标无明显关联.结论 NY-ESO-1基因及NY-SAR-35基因均可特异性地高表达于RB组织中,其表达率明显高于其他全身肿瘤,有可能成为RB特异性免疫治疗的靶抗原.
