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癌睾丸抗原TFDP3与乳腺癌上皮间质化(EMT)的相关性研究
目的:本研究探讨了癌睾丸抗原TFDP3与乳腺癌细胞上皮间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系.方法:本研究中选取了乳腺癌细胞系(MCF-10A,MCF-7,SK-BR-3和MDA-MB-231)作为研究对象,通过Western Blot的方法筛选获得了TFDP3低水平表达的乳腺癌细胞株.进一步通过质粒转染的方式构建TFDP3过表达的细胞系模型,观察TFDP3在EMT中的作用.结果:TFDP3在MCF-10A及SK-BR-3中不表达,在间质化程度较高的MDA-MB-231中高水平表达,而在上皮化程度较高的MCF-7中的低水平表达.MCF-7中过表达TFDP3后,上皮细胞标记分子E-cadherin表达下调,而间质细胞标记分子N-cadherin、Snail、Twist及细胞骨架蛋白Vimentin表达上调.结论:TFDP3可以促进乳腺癌细胞发生EMT.
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TFDP3对前列腺癌LNCaP细胞自噬及凋亡调控作用的初步研究
目的:研究TFDP3对前列腺癌LNCaP细胞自噬及凋亡作用的影响,以及探讨TFDP3与E2F1相互作用后对前列腺癌LNCaP细胞自噬及凋亡的调控作用.方法:采用重组质粒pcDNA3.1-TFDP3,pCMV-E2F1-HA分别转染LNCaP细胞,并设空载体对照组.转染24h后提取细胞总RNA和蛋白,以实时定量RT-PCR检测TFDP3、E2F1、以及LC3B基因表达的变化,Western blot方法检测自噬相关基因(LC3B)蛋白表达水平的变化.并采用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化.结果:TFDP3可以诱导LNCaP细胞中自噬基因LC3B的表达,并且这种作用可以受到E2F1的抑制；TFDP3可以抑制E2F1诱导的细胞凋亡.结论:TFDP3可以诱导LNCaP细胞中自噬基因LC3B的表达,可以抑制E2F1诱导的细胞凋亡,提示TFDP3在前列腺癌细胞中发挥着重要的调控作用.
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抗人转录因子DP3和TFDP1多肽抗体的制备
目的: 制备兔抗人转录因子TFDP3、 TFDP1的多克隆抗体, 并鉴定其反应性及特异性.方法: 选择TFDP3和TFDP1差异较大肽段, 利用人工合成多肽免疫家兔, 采用真核表达载体瞬时转染HEK293细胞表达TFDP3和TFDP1真核蛋白, 通过Western blot分析抗体的反应性和特异性.结果: 通过氨基酸序列比对选择TFDP3 17-26, TFDP1 17-32氨基酸残基合成多肽, 制备了兔抗人TFDP3、 TFDP1多肽抗体, Western blot检测显示, 抗TFDP3抗体可以特异性识别TFDP3, 而抗TFDP1抗体既可识别TFDP1又可与TFDP3结合.结论: 制备了兔抗人TFD31和TFDP1的多肽抗体, 且TFDP3抗体与TFDP1无交叉反应.
