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HIV-1辅助蛋白Vpr多肽抗体的制备与鉴定
预测Vpr蛋白的B细胞抗原表位,并利用合成的B细胞表位肽制备Vpr特异性抗体.应用生物信息学技术获得Vpr蛋白共享氨基酸序列并预测其潜在B细胞抗原表位,与载体蛋白血蓝蛋白(KLH)偶联合成多肽并免疫家兔,鉴定及纯化获得的多肽特异性抗体.软件预测显示,Vpr蛋白N端的第3~19位(N)和C端的第82~95位(C)氨基酸序列为潜在B细胞抗原表位;ELISA检测抗血清中多肽特异性抗体的效价都达到1∶105以上;Western-Blotting结果显示,无论对HIV-1 B亚型还是CRF07_BC重组型的Vpr蛋白,其多肽N抗体和C抗体均能特异性识别;免疫沉淀结果显示,Vpr多肽N和C抗体也能特异性结合未变性的野生型Vpr或GFP -Vpr融合蛋白.利用生物信息学技术能成功预测Vpr蛋白B细胞抗原表位,免疫所获得的抗体具有较好的特异性和应用性.
关键词: HIV-1辅助蛋白Vpr B细胞表位 表位预测 多肽抗体 -
HIV感染者体内抗小分子多肽抗体与病情发展的初步研究
目的研究HIV感染者体内抗-R7V含量与病情发展的关系.方法用ELISA、中和沉淀等方法检测HIV感染者、长期生存者、艾滋病患者等的抗-R7V含量.结果抗-R7V检出率在无症状组和长期生存组较高,在进展者和艾滋病患者中较低,溶解处理标本后抗-R7V含量及阳性率明显提高.结论抗-R7V主要通过干扰HIV与CCR5、CXCR4结合,使HIV不能进入CD4+T淋巴细胞内,并阻止病毒的复制.
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免疫印迹法检测抗ENA抗体结果分析
抗ENA抗体是针对核内可提取性核抗原(ex-tractable nuclear antiger,ENA)的一种自身抗体.不同的自身免疫性疾病其抗ENA抗体阳性率有明显差异,有的特异性很高.本组对疑为自身免疫性疾病、风湿病患者采用免疫印迹法(IBT)检测抗ENA多肽抗体.该法将凝胶电泳、蛋白质转运、分子亲和技术、酶免疫测定融为一体,可一次性测定抗Sm、抗U1-RNP 、抗SS-A、抗SS-B、抗Jo-1、抗ScL-70和抗核抗体等7种多肽抗体,较传统的对流免疫电泳法(CI-ET)具有特异性强、灵敏度高、简便等优点.
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混合性结缔组织病的抗D'E多肽抗体检测意义
本世纪60年代Sharp等发现一些患者兼有系统性红斑狼疮(SLE)、硬皮病或多发性肌炎(PM)的临床表现,同时伴有高滴度抗核糖核蛋白(RNP)抗体.据此,1972年他提出这是一种独立的疾病,并命名为混合性结缔组织病(mixed connective tissue disease, MCTD)[1].但目前对MCTD的诊断,国际上尚无统一的标准.
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以血清肌酸激酶升高为主要表现的甲状腺功能减退症二例
例1 男性,70岁.因双下肢水肿、四肢肌肉僵硬疼痛,尤以下肢近端明显伴乏力2个月余就诊.体检:血压:150/90 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),甲状腺不大,两肺呼吸音清,心率65次/min,律齐.眼睑及双下肢轻度水肿,四肢肌群肥大,尤以前臂及双下肢肌群明显.四肢肌力、肌张力、腱反射及感觉均正常.实验室检查:肌酸激酶(CK)1594 U/L, AST 76 U/L, ALT 38 U/L,乳酸脱氢酶(LDH)354 U/L,尿素氮(BUN)4.80 mmol/L,肌酐(Cr)138.8 μmol/L,尿酸(UA)519 μmol/L,甘油三酯(TG)6.01 mmol/L,胆固醇(TC)5.45 mmol/L,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)1.0 mmol/L,低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)1.75 mmol/L,血清DNA抗体(-),ENA多肽抗体(-),血沉23 mm/1 h.甲状腺球蛋白抗体(TGAb)15.9%(0%~30%),甲状腺微粒体抗体(TMAb)10.2%(0%~20%).
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急性发热性中性白细胞增多性皮病一例
患儿女,9岁,因发热、皮疹3个月入院。3个月前患儿因上呼吸道感染而发热,多呈弛张热,无寒战。面、胸背部散在淡红色丘疹,柔软,有触痛,无搔痒。口腔粘膜多处溃疡,牙龈肿痛,关节肿痛,活动无明显受限。在当地医院查提取性核抗原多肽抗体、抗核抗体均阴性,血沉增快,抗溶血性链球菌抗体(ASO)正常,血培养阴性。给予多种抗生素及阿司匹林治疗2周,体温时升时降,皮疹变为暗褐色色素沉着斑,转我院治疗。体检:T 39℃,P 106次/min,R30次/min,神志清,中度贫血貌,面、胸背部皮肤可见非对称性暗褐色色素沉着斑。全身浅表淋巴结花生米大小。咽充血,口腔粘膜多处溃疡,牙龈红肿,有少许脓性分泌物。心肺听诊无异常。腹平软,肝肋下2 cm,质地中等,无触痛,脾肋下未触及。神经系统检查未发现阳性体征。血常规:Hb 82.9g/L,WBC14.8×109/L,N 0.80,PLT 363×109/L,未见幼稚细胞,复查2次,结果相似。骨髓检查示感染性骨髓象,符合增生性贫血骨髓象。血培养及骨髓培养均阴性。提取性核抗原多肽抗体、抗核抗体、双链DNA抗体、四联免疫抗体均阴性,血沉72 mm/h,ASO 200 U,肝、肾功能、电解质、X线胸片、心电图、双下肢关节X线片均未发现异常。
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肝素酶多肽抗体对HCCLM6肝癌细胞生长及侵袭的影响
目的 探讨自行研制的肝素酶多肽抗体对人肝癌HCCLM6细胞生长和侵袭的影响.方法 采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长曲线,平板克隆形成试验检测细胞集落数,流式细胞仪检测细胞周期,通过肝素酶活性测定和Transwell侵袭小室试验,了解自行研制的3种肝素酶多肽兔多克隆抗体(P1、P2和P3多肽抗体)对HCCLM6肝癌细胞生长及侵袭的影响.结果 与正常兔IgG对照组比较,P1、P2和P3多肽抗体对HCCLM6肝癌细胞的生长、细胞周期及增殖活性均无明显影响.终浓度为100μg/ml的P1、P2多肽抗体与HCCLM6细胞共培养后,肝素酶活性分别降低42.9%和39.1%(P<0.01),Transwell侵袭小室中48 h穿膜细胞数明显减少,抑制率分别为52.5%和36.6%(P<0.05).结论 肝素酶P1和P2多肽抗体能抑制人肝痛HCCLM6细胞的肝素酶活性和侵袭能力,P3多肽抗体对肝癌细胞的肝素酶活性和侵袭能力无影响;肝素酶P1、P2和P3多肽抗体对HCCLM6细胞的生长、细胞周期和增殖能力均无明显影响.
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第250例 多关节肿痛一双手足麻木—双足疼痛、下垂
病历摘要患者女,60岁。因多关节肿痛3个月,双手、双足麻木伴双足下垂10 d于2010年10月5日人解放军总医院风湿科。3个月前开始出现双足跖趾关节肿胀、疼痛及活动受限症状,随后渐次累及双手近端指问关节、掌指关节、双腕、双肩、颞颌关节及双侧胸肋关节,晨僵时间持续半天不缓解。2010年9年24日在中国人民解放军总医院院门诊杏血清类风湿因子1.20×106 IU/L,抗角蛋白抗体、抗环状胍氨酸多肽抗体以及抗核周因子均为阳性。
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非小细胞肺癌相关多肽IgY抗体的制备及其ELISA检测研究
目的 制备抗非小细胞肺癌(NSCLC)相关多肽的IgY抗体,并进行NSCLC酶联免疫吸附分析(ELISA)实验研究. 方法用人工自动合成仪合成2条肽段(长度分别为64 AA和36 AA),并分别偶联钥孔血蓝蛋白(KLH)作为抗原免疫鸡产生IgY抗体,水稀释-辛酸法结合硫酸铵沉淀法分离提取IgY,亲和层析进一步纯化特异性IgY,间接非竞争ELISA检测抗体效价,棋盘滴定法选择ELISA的适工作条件.将抗64 AA肽IgY抗体(Ab1)和抗36 AA肽IgY抗体(Ab2)联合,用ELISA检测96例NSCLC患者和102例正常人的血清. 结果成功制备了NSCLC相关多肽IgY抗体,效价Ab1为1 ∶ 104,Ab2为1 ∶ 105.用Ab1和Ab2组合作联合检测,以临界值0.241为阳性判断标准,96例肺癌患者血清中,阳性58例,敏感度为60.4 %;102例正常人血清中,阳性19例,特异度81.4 %.结论 运用IgY技术可以高效、大量制备多肽抗体,NSCLC相关多肽IgY抗体的ELISA检测实验表明IgY技术可在肺癌诊断中有较好的应用前景.
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ENA多肽抗体测定在风湿病诊断中的应用
为探讨ENA多肽抗体在自身免疫性风湿病诊断中的应用价值,笔者应用免疫印迹法测定119例各类风湿病患者血清中10种ENA多肽抗体,现将测定结果报道如下.
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ENA多肽抗体测定在风湿病诊断中的应用
为探讨ENA多肽抗体在风湿病诊断中的应用价值, 笔者应用免疫印迹法测定119例各类风湿病患者血清中10种ENA多肽抗体, 现将结果报道如下.
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伴有消化道出血的新生儿红斑狼疮1例报告
患儿男,3.5个月,因"皮疹3.5个月,便血1个月,呕血1d"于2003-06入院.患儿出生当天即可见全身皮肤有大小不等的红色皮疹,3个多月来,反复出现,并时有不规则发热(38~39 ℃).近1个月来,断续出现黑色便,4~5次/日.入院前4d,大便为暗红色稀便,7~8次/日,入院当天又呕血块样物4次,每次约10mL,同时精神欠佳.患儿病来外院住院治疗3次,曾查血培养阴性,1个月前查血抗ENA多肽抗体(抗Sm、抗U1RNP、抗SSA、抗SSB、抗Scl-70、抗Jo-1、抗rRNP)阴性.患儿母亲分娩后确诊为系统性红斑狼疮.
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Trim22B细胞表位预测及多克隆抗体制备与鉴定
目的:预测人Trim22的B细胞抗原表位,制备并鉴定其多克隆抗体.方法:利用生物信息学软件分析Trim22的氨基酸序列,确定抗原表位并人工合成多肽.将合成肽与牛血清白蛋白(BSA)偶联,免疫大白兔制备抗Trim22的抗体.经饱和硫酸铵沉淀法纯化抗体,并对抗体进行ELISA、Western blot鉴定.结果:获得抗Trim22的多克隆抗体,抗体效价为1∶16 000,该抗体能特异性地识别包含(382~397)区段的Trim22缺失突变体,同时该抗体不能识别Trim22旁系同源分子Trim5α、Trim6和Trim34α.结论:采用人工合成多肽作为半抗原制备出抗Trim22的多克隆抗体,对研究内源性Trim22与HIV-1衣壳蛋白的相互作用机制具有重要价值.
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人内质网分子伴侣BiP抗原表位筛选及其在RA血清学诊断中的作用研究
目的:筛选鉴定人内质网分子伴侣BiP抗原表位多肽,探讨其在类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)血清学诊断中的价值.方法:运用计算机软件分析BiP蛋白的结构特点及抗原决定簇分布,根据结果设计合成系列多肽.比较合成多肽与RA患者血清(BiP抗体阳性)IgG的反应强弱,鉴定抗原抗体反应强的抗原表位多肽.进一步以获得的BiP抗原表位多肽作为包被抗原,检测79例RA患者、34例系统性红斑狼疮(SLE)患者、66例干燥综合征(SS)患者和173例正常人血清中抗BiP抗原表位多肽IgG抗体水平.结果:筛选到一条与RA患者血清反应强的多肽(N403),抗N403多肽IgG抗体在RA患者中的阳性率(67%),明显高于SS患者(29%)、SLE患者(0%)、和正常人(0%)(P<0.01).抗N403多肽IgG抗体在RA血清学诊断中的敏感性为67%,特异性为93%.而且该抗体的检测对于RF、CCP、HRF、RA33、AKA、APF等抗体阴性的RA患者的诊断具有重要意义.结论:筛选获得的BiP抗原表位多肽N403,其检测抗体在RA临床血清诊断中具有很好的应用价值.
关键词: 人内质网分子伴侣BiP蛋白 抗原表位 类风湿性关节炎 多肽抗体 -
延边地区SLE患者ANA及ENA多肽抗体谱分析
SLE(系统性红斑狼疮)是一种多器官、多系统的复杂的自身免疫性疾病,其发病机理主要是由于机体细胞和体液免疫功能紊乱,产生多种自身抗体,形成免疫复合物,引起组织和脏器的损伤.本文对延边地区SLE患者进行ANA(抗核抗体)、dsDNA(抗双链-DNA)抗体及ENA多肽抗体谱分析和探讨.
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ENA多肽抗体测定在进行性系统性硬皮病诊断中的应用
我们选择临床确诊的进行性系统性硬化症患者(Pss)的血清,用免疫印迹法测定可提取核抗原(ENA)多肽抗体,以探讨ENA在进行性系统性硬皮病中的诊断价值.
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ENA多肽抗体对进行性全身性硬皮病的临床意义
为探讨可提取核抗原(ENA)多肽抗体对进行性全身性硬皮病(PSS)的诊断价值,我们选择确诊PSS患者用免疫印迹法测定了ENA多肽抗体.
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基于表位多肽的抗TRIM22抗体的制备及其初步应用
目的 制备抗TRIM22多肽抗体及鉴定其性能.方法 将TRIM22 N端15个氨基酸的多肽(MDFSVKVDIEKEVTC)与钥孔嘁血蓝蛋白(KLH)偶联.免疫新西兰白兔制备抗血清;将TRIM22多肽与Affi-Gel 10偶联制备免疫亲和层析柱,兔抗血清经亲和层析纯化后得到TRIM22多肽特异性抗体;采用ELISA测定抗体效价、Western blot鉴定抗体特异性,并利用该抗体通过间接免疫荧光实验来检测TRIM22蛋白的细胞内定位.结果 获得了抗TRIM22特异性抗体.Western blot结果显示该抗体能特异识别真核及原核表达的TRIM22蛋白.利用该抗体进行的间接免疫荧光实验发现TRIM22蛋白主要定位在HepG2细胞核中.结论 该抗体的制备为TRIM22分子的功能研究提供了有力的工具.
关键词: TRIM22 多肽抗体 免疫亲和层析 Western blot 间接免疫荧光 -
ANA ENA多肽抗体及体液免疫在儿童系统性红斑狼疮诊断中的应用
在各种不利因素,包括环境因素、遗传因素的作用下,机体自身免疫耐受机制遭到破坏,导致机体免疫系统将自身抗原作为异己攻击目标,终发生各种自身免疫性疾病(AID),系统性红斑狼疮(SLE)是其中之一。SLE是由于机体细胞和体液免疫功能紊乱,通过许多途径,如自身抗体、细胞因子、膜攻复合物等完成对自身组织抗原的病例损伤,其中,自身抗体的损伤作用尤为突出,所以血清中自身抗体的检测是诊断SLE的主要指标[1]。本文旨在探讨抗核抗体(antinuclearantibody ANA)、ENA多肽抗体及体液免疫在儿童SLE诊断中的作用。
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未分化肺癌1例误诊分析
患者,女,40岁,反复四肢关节酸痛4年,曾多次查血红细胞沉降率明显高于正常,抗"O"正常,ENA多肽抗体均阴性,四肢关节X片无异常,被诊断为类风湿关节炎.本次因体检发现右上肺阴影而入院手术治疗.入院前曾用雷公藤多甙及激素、云克等治疗,疗效均欠佳,未曾完全缓解过.