首页 > 文献资料
-
一例供精人工授精反复失败的精子蛋白质组学分析
目的 分析1例供精人工授精(AID)反复失败捐献者精子的蛋白质组成差异,探讨精子蛋白质组学变化与妊娠结局的相关性. 方法 1例连续9个AID周期失败的捐献者作为实验组；AID成功率在50％以上的3例捐献者作为对照组.收集两组精液样品,每位志愿者取3份精液,每次取精前禁欲3～7d,提取精子全蛋白,应用双向凝胶电泳分离精子蛋白,并行MALDI-TOF/TOF-MS质谱鉴定. 结果 实验组在分析区域内检测到432个蛋白点,对照组有460个蛋白点,两组中共有347个匹配蛋白点,匹配率达80.32％.检测到22个差异蛋白点,其中实验组有11个蛋白点高表达,8个蛋白点低表达,在对照组中3个蛋白点是缺失的. 结论 本研究利用蛋白质组学技术研究了1例AID反复失败供精者的精子蛋白质表达差异,发现22个差异蛋白点,其生物学意义有待进一步的研究.
-
精子蛋白sp32/OY-TES-1mRNA及其蛋白在正常组织表达的探讨
目的 了解正常组织中sp32/OY-TES-1 mRNA的表达量是否存在差异以及该蛋白的表达情况,为sp32/OY-TES-1表达谱增加更多信息.方法 提取40例(19种)正常组织总RNA,逆转录-聚合酶合成cDNA,普通PCR检测cDNA质量;构建目的 基因sp32/OY-FES-1及看家基因HPRT质粒,制备标准品,绘制标准曲线,建立实时定量PCR(TaqMan)方法和优化反应体系,检测组织中sp32/OY-TES-1和HPRT的表达,sp32/OY-TES-1mRNA的表达量以OY-TES-1/HPRT表示.通过制备的OY-TES-1多克隆抗体,结合免疫组织化学检测sp32/OY-TES-1蛋白在多种正常组织中的表达.结果 正常组织中sp32/OY-TES-1mRNA阳性率为72.50%(29/40);2.非睾丸正常组织中sp32/OY-TES-1 mRNA的相对表达量值(目的 基因/看家基因)为0.000 1～0.495 0,呈对数正态分布;3.睾丸组织中sp32/OY-TES-1 mRNA的相对表达量为44.9,是其他正常组织的91～1 000倍;4.免疫组织化学(IHC)显示在所检测的多种正常组织和细胞中(10例睾丸组织、8例结肠、7例肝、6例骨骼肌、5例胃、5例晶状体、4例精子、3例外周血白细胞和1例肾),除4例精子和1例肾组织中的肾小管外,其余均未见OY-TES-1蛋白阳性反应.结论 sp32/OY-TES-1 mRNA广泛地表达在各种正常组织,表达量因组织不同而异;睾丸组织是所检测的正常组织中其mRNA表达量高的组织.而sp32/OY-TES-1蛋白比其mRNA更具有限制性表达的特点.
-
精子蛋白Sp32/OY-TES-1基因mRNA表达的探讨
目的了解精子蛋白Sp32/OY-TES-1基因mRNA的表达特点,研制癌-睾丸抗原(CTA)的肿瘤疫苗.方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测95例正常人组织及125例人肿瘤组织中Sp32/OY-TES-1mRNA的表达,随机选取RT-PCR阳性产物12份进行DNA测序;对所得数据进行统计学分析. 结果Sp32/OYTES-1在正常和肿瘤组织中的表达频率分别为68.4%(65/95)和44.00%(55/125),两者比较有统计学意义(P＜0.05).在24种不同器官的正常组织中,21种表达Sp32/OY-TES-1基因mRNA(87.50%).DNA测序结果证实,RTPCR产物为Sp32/OY-TES-1基因. 结论Sp32/OY-TES-1基因的mRNA在正常组织中广泛表达,它是否可归为睾丸和肿瘤限制性表达的基因尚需进一步研究.
-
精子蛋白17的研究进展
精子蛋白17(sperm protein 17,Sp17)是一种高度保守的睾丸组织特异性蛋白,与在卵细胞透明带上的乙酰肝素糖基进行结合,参与顶体反应,促进受精过程[1].近年来,Sp17作为一癌瘤一睾丸(CT)抗原,其作为肿瘤疫苗的前景被广泛研究和关注.
-
精子蛋白32研究进展
1989年,Baba等[1]从猪精子中分离出一种相对分子质量为32000的蛋白,该蛋白能特异性地结合顶体素原和顶体素中间体,参与顶体素的形成,称其为精子蛋白32(sperm protein 32, sp 32).本文从sp32生物学特性、基因表达和生物功能等方面的研究进展作一综述.
-
精子表面蛋白受精素β在精卵结合和融合中的作用研究
为探讨精子表面蛋白受精索β(Fβ)在精-卵结合和融合中的作用.本文应用鼠Fβ单抗,通过体外受精试验观察该单抗预孵育不同浓度精子后,对精-卵结合和融合功能的影响;应用免疫细胞化学方法确定Fβ在精子表面的特异性定位.结果在不同精子浓度下,Fβ单抗均可显著降低体外精-卵的结合和融合能力;可使精-卵结合指数降低34.43%～75.46%,平均56.05%;使精-卵融合的受精指数降低47.68%～56.32%,平均52.18%;受精率下降28.06%～54.32%,平均41.56%.在精子顶体反应前后,Fβ在精子表面均特异性定位于精子头部赤道区域和顶体内膜区域.结论:Fβ在精-卵的结合和融合中均具有重要作用,支持将Fβ蛋白作为精子靶抗原之一用于避孕疫苗的开发研究.
-
人精子表面蛋白P34H重组表达载体的构建及诱导表达
目的:获得纯化的人精子表面蛋白P34H用于基础和临床研究.方法:在克隆到P34H基因编码区全长的基础上,将P34H基因亚克隆至原核表达载体pQE-30中,构建重组表达载体pQE-30/P34H.将pQE-30/P34H转化至大肠埃希菌后,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过Ni-NTA树脂进行亲和层析纯化上清中可溶性形式的重组蛋白P34H.对表达纯化重组蛋白的质粒进行DNA测序,并对重组蛋白P34H行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,鉴定其是否为所需目的蛋白.结果:经PCR和双酶切鉴定,重组表达载体pQE-30/P34H为正确克隆.SDS-PAGE和DNA测序证实,所获的重组蛋白确系所需目的蛋白.结论:用上述原核表达的方法可获得纯化的人精子表面蛋白P34H.
-
精子蛋白Ropporin的研究进展
Ropperin一直以来被认为是精子细胞特异性蛋白,在睾丸组织中特异性表达,并参与精子的运动、获能、顶体反应等生理活动.然而,新的研究表明Ropporin在正常的非睾丸组织也有微弱表达,而且作为一种新的肿瘤睾丸抗原(CT抗原)在恶性血液病的肿瘤细胞中高表达.Ropporin在哺乳动物中的表达具有高度保守性,说明它对生命的重要性.本文就Ropporin的特性、表达与分布、生理学功能及临床研究的新进展进行了综述.
-
小鼠精子蛋白Sp17的克隆、表达及其免疫原性研究
目的 获得鼠精子蛋白Sp17基因,构建重组表达载体并实现其在大肠杆菌中的高效表达,为制备免疫性避孕疫苗奠定基础.方法 提取BALB/c小鼠睾丸组织总RNA,通过RT-PCR扩增Sp17基因全长cDNA序列,并将其克隆至pMD 18-T质粒载体中,再经HindⅢ/ XhoⅠ双酶切将Sp17基因片段亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot对表达产物进行初步鉴定,并检测重组蛋白Sp17免疫小鼠后血清特异抗体滴度.结果 获得了小鼠Sp17的全长cDNA,成功构建了重组原核表达载体pET/Sp17,在IPTG的诱导下实现了目的蛋白在大肠杆菌中的高效表达,免疫后小鼠血清中检测到特异性抗体.结论 小鼠精子蛋白Sp17基因序列已被克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效、正确的表达,重组蛋白Sp17能够诱导产生特异性免疫反应,具有一定程度的免疫原性.
-
鼠fscb基因靶向敲除载体的构建及动物模型的建立
目的 利用CRISPR/Cas9系统构建鼠fscb基因打靶载体,为研究鼠FSCB蛋白在精子鞭毛运动和获能中作用建立fscb基因敲除动物模型.方法 根据fscb基因全长序列,设计CRISPR/Cas9作用靶点,合成3对单链向导RNA(single-guide RNA,sgRNA),并克隆进PU57-T7-GDNA载体,通过PCR测序鉴定,获得sgRNA表达质粒.利用T7 RNA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9 RNA.将Cas9mRNA和sgRNA以适当比例混合后注射入B6J小鼠受精卵中,获得fscb基因敲除的初建鼠(F0).通过PCR对基因突变情况进行鉴定,选取靶基因敲除的小鼠进行传代并进一步测序分析确定突变情况.结果 成功构建表达sgRNA的载体并进行体外转录,将有活性的sgRNA和Cas9 RNA直接注射入鼠受精卵,获得39只F0代阳性小鼠,选取3只明确删除目的基因片段并产生移码的雄鼠与野生雌鼠回交繁育得到5只F1代阳性小鼠(2只雄鼠,3只雌鼠),将F1代杂合子雄鼠与雌鼠交配,获得纯合子小鼠.通过鉴定,建立了两种不同基因型的fscb基因敲除鼠系,并传代繁育.Western blot分析证实两种鼠系纯合子雄鼠睾丸及精子内的FSCB蛋白表达消失.结论 通过CRISPR/Cas9系统靶向敲除fscb基因并获得纯合子小鼠,为进一步分析FSCB蛋白的功能提供了基因敲除小鼠模型.
关键词： 基因敲除 精子蛋白 CRISPR/Cas9 动物模型 -
不孕相关精子蛋白抗体检测的临床意义
目的:分析不孕相关精子蛋白抗体与免疫性不孕的关系.方法:收集临床抗精子抗体阳性的不孕患者的外周血标本,ELISA法检测STP-4、TSA-1、SPAG7、FA-1及YLP-12与免疫性不孕相关的精子蛋白的抗体.结果:免疫性不孕相关精子蛋白的抗体阳性率仅有15％.结论:检测不孕相关精子蛋白的抗体对免疫性不孕的临床诊疗更为有益.
