雄性家兔性成熟前后下丘脑弓状核核团电生理研究

目的:观察雄性家兔下丘脑弓状核核团的神经电活动及其在性成熟前后的变化.方法:依据出生时间和睾丸大小确定雄性家兔的性发育成熟.选择性发育成熟前雄性家兔8只和已发育成熟的雄性家兔7只,采用核团微穿刺记录放电的电生理技术,比较两组动物的下丘脑弓状核核团放电.并经过脑组织切片证实微电极正确定位于弓状核.结果:经切片证实微电极准确定位于弓状核的10只(占67%).去除未准确定位的放电记录后,性成熟前的雄兔下丘脑弓状核放电频率明显少于性成熟后的雄兔,但大脉冲幅度差异不显著.结论:下丘脑弓状核是调节合成与分泌促性腺激素释放激素(GnRH)的主要核团,其电生理活性表达、尤其是脉冲频率与雄性兔的性成熟相关.

Kisspeptin/Kiss1r系统在多囊卵巢综合症大鼠下丘脑弓状核的表达

目的:通过构建多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型,探讨其下丘脑弓状核Kisspeptin/kiss1r系统和促性腺激素释放激素(GnRH)的表达变化及相互作用.方法:孕10d Wistar大鼠雌性后代随机分为对照组和PCOS组.采用来曲唑构建大鼠PCOS模型.造模结束后,测定体重参数和内分泌激素的改变;观察卵巢组织的病理学改变;同时用免疫组织化学、免疫印迹法和实时荧光定量PCR检测下丘脑弓状核Kisspeptin、Kiss1r和GnRH的蛋白和各自mR-NA水平.结果:成功构建PCOS大鼠模型,体重增加(P＜0.05),体脂肪含量增加(P＜0.05),血清黄体生成激素(LH)和睾酮(T)水平增加显著(P＜0.01),具有典型的PCOS内分泌和卵巢的改变;与对照组相比,PCOS组GnRH的蛋白和mRNA表达显著增加(P＜0.01),Kisspeptin蛋白和其mRNA表达下调(P＜0.05),未见Kiss1r蛋白和其mRNA表达的显著改变(P＞0.05).结论:大鼠下丘脑弓状核Kisspeptin/Kiss1r系统表达下调,GnRH表达异常增加,与PCOS的神经内分泌有关,可能在PCOS疾病的发生发展中有着重要的作用.

慢性束缚应激大鼠下丘脑ARC中Ob-R、AgRP及NPY的表达及逍遥散的调节作用

目的:探讨慢性束缚应激大鼠下丘脑弓状核(ARC)瘦素受体(Ob-R)、刺鼠基因相关蛋白(AgRP)、神经肽Y(NPY)变化及中药逍遥散的影响.方法:120只SD实验大鼠随机分为正常组、7d模型组、21d模型组、中药组.采用束缚制动法复制应激大鼠模型,中药组在每日束缚制动前灌服中药逍遥散21d.观察实验大鼠摄食量及体质量变化;ELISA方法检测大鼠外周血Leptin含量;Western Blot和qRT-PCR法分别检测各组大鼠下丘脑ARC中Ob-R、AgRP和NPY蛋白及基因表达.结果:在应激第7、14、21天,21d模型组大鼠体质量、摄食量均显著性少于正常组(P＜0.01);而中药组大鼠体质量增长明显优于21d模型组(尤其应激第7、21天)(P＜0.05),摄食量在应激第14、21天较21d模型组增加明显(P＜0.05).与正常组比较,7d模型组和21d模型组大鼠血清Leptin含量、下丘脑ARC中Ob-R蛋白及基因表达显著性升高(P＜0.05,P＜0.01),而AgRP和NPY蛋白及基因表达则显著降低(P＜O.05,P＜0.01);中药组大鼠血清Leptin含量、下丘脑ARC中Ob-R蛋白及基因表达较21d模型组降低(P＜0.05,P＜0.01),而AgRP和NPY蛋白及基因表达则显著提高(P＜0.01),中药组与7d模型组比较上述指标差异无统计学意义.结论:慢性束缚应激大鼠食欲下降、体质量增长缓慢等躯体不适症状可能与其下丘脑ARC中Ob-R表达增多,AgRP、NPY合成、分泌减少有关,中药逍遥散能通过调节ARC中Ob-R、AgRP和NPY蛋白及基因表达水平,有效改善慢性束缚应激大鼠上述躯体不适症状.

慢性束缚应激大鼠下丘脑弓状核ob-R与CART变化及逍遥散的调节作用

目的:探讨慢性应激模型大鼠下丘脑弓状核(ARC)中瘦素受体(ob-R)和可卡因-安非他明调节转录因子(CART)蛋白和基因表达变化及逍遥散调节作用.方法:125只SD大鼠随机分为正常组,7、21d模型组,7、21d逍遥散组,慢性束缚应激方法建立动物模型,观察各组大鼠外观表征、体质量、摄食量变化,间苯三酚法检测血清瘦素(Leptin)水平,免疫荧光双染和实时荧光定量PCR方法观测各组大鼠下丘脑ARC中ob-R和CART蛋白和基因表达变化.结果:模型组大鼠体质量增长缓慢、摄食量下降,血清Leptin含量和下丘脑ARC中ob-R与CART蛋白和基因表达水平高于正常组,逍遥散则有相应的调节作用.结论:应激状态下进入下丘脑ARC过多的Leptin与ob-R结合后,促进了CART过度表达,这可能是应激大鼠体质量和摄食量下降的中枢神经内分泌机制之一,也可能为逍遥散调节机体食欲和能量代谢的主要作用靶点之一.

逍遥散对慢性束缚应激模型大鼠行为学和下丘脑弓状核NPY及受体Y1表达的影响

目的 观察逍遥散对慢性束缚应激模型大鼠行为学和下丘脑弓状核中神经肽Y(NPY)及其受体Y1(NPY-Y1)表达的影响,探讨其对抗应激损伤的作用机制及靶点.方法 125只SD大鼠随机分为3组:正常组(25只)、模型组(50只)、逍遥散组(50只).采用每天3h,连续21日肢体束缚的方法建立慢性应激动物模型.动态监测各组大鼠体重及摄食量,借助旷场实验观察各组大鼠行为学指标变化,并运用免疫荧光染色法、RT-qPCR法,分别检测不同时段各组大鼠下丘脑弓状核(ARC)中神经肽Y(NPY)、神经肽Y受体Y1(NPY-Y1)蛋白和mRNA的表达情况.结果 与同时间点正常组比较,模型组7、14、21日大鼠体重及14、21日摄食量减少,21日5 min内总穿格数、站立次数、修饰次数减少,7、21日下丘脑ARC NPY、NPY-Y1表达阳性面积、积分光密度、平均光密度及NPY、NPY-Y1 mRNA表达降低(P ＜0.05,P＜0.01).与同时间点模型组比较,逍遥散组14、21日大鼠体重及21日摄食量增加,7日5 min内总穿格数减少,21日5 min内总穿格数和修饰次数明显增加,7、21日NPY表达阳性面积、积分光密度增加,21日NPY-Y1表达阳性面积、平均光密度和积分光密度增加,7日NPY-Y1 mRNA表达降低,而7、21日NPY mRNA及21日NPY-Y1 mRNA表达升高(P ＜0.05,P＜0.01).结论 逍遥散可通过上调慢性束缚应激模型大鼠下丘脑ARC中NPY、NPY-Y1受体蛋白及基因表达,调节机体能量代谢,改善肝郁样情绪、行为障碍,这可能是其疏肝健脾以拮抗慢性应激损伤的内在机制之一.

毁损弓状核后血清中不同成分及一氧化氮和脂质过氧化物的变化

目的探讨下丘脑弓状核在动脉粥样硬化(AS)形成中的影响.方法用谷氨酸单钠毁损弓状核后,检测血清中与AS形成密切相关的总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)、一氧化氮(NO)和脂质过氧化物(LPO)的变化.结果毁损弓状核后血清中促AS形成的物质如TC、OX-LDL、MDA明显增高,而有抗AS作用的NO则降低,HDL无变化.结论毁损下丘脑弓状核对AS的形成有促进作用,下丘脑可能参与AS的调控.

瘦素通过弓状核内神经网络激活食欲减退性POMC神经元

针刺对2型糖尿病大鼠弓状核瘦素受体基因的影响

目的 探讨瘦素与弓状核瘦素受体(OB-R)基因表达和2型糖尿病(T2DM)的关系以及针刺对T2DM机体瘦素水平和弓状核OB-R基因表达的影响.方法 给食源性肥胖大鼠腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)造成T2DM模型,随机分为针刺组、优降糖组和模型组.处理4周后,用快速血糖仪检测空腹血糖(FBS),用放免法检测空腹胰岛素(FINS),用ELISA法检测空腹瘦素(FLP),用原位杂交检测弓状核OB-R mRNA表达,测量治疗前后大鼠的身长、体重,计算Leers指数,并且与正常组比较.结果 模型组FBS、FINS高于正常组(P<0.05);治疗后,针刺组FBS、FINS明显下降(P<0.01),接近正常组水平}优降糖组FBS明显下降(P<0.01),FINS有所下降(P<0.05).模型组FLP低于正常组(P<0.05)和优降糖组(P<0.01);优降糖组FLP高于正常组和针刺组(P<0.05).模型组体重和Leers指数下降明显,针刺组、优降糖组体重和Leers指数有所下降,接近正常组水平.模型组弓状核OB-R基因表达与正常组、针刺组、优降糖组无显著差异(均P>0.05),优降糖组弓状核OB-R基因表达明显低于正常组(P<0.05),针刺组弓状核OB-R基因表达和正常组无显著性差异(P>0.05).结论 T2DM大鼠模型明显消瘦后出现血清瘦素水平下降,优降糖组存在明显的瘦索抵抗,针刺可以在一定程度上改善弓状核OB-R基因表达.

褪黑素对损毁弓状核大鼠所致肥胖的干预研究

目的 观察褪黑素对损毁弓状核大鼠所致肥胖的干预作用.方法 皮下注射谷氨酸钠,建立大鼠弓状核损毁所致中枢性肥胖,比较各组大鼠体质量指数(BMI) ;测定体温变化、摄食量和脂肪重;检测甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)等和血压;观察弓状核病理学变化.结果 褪黑素处理肥胖大鼠后,体温逐渐升高,其中高、低剂量给药组大鼠的BMI均明显回降(P<0.05,P<0.01),血压降低(P<0.01,P<0.05).褪黑素高、低剂量组大鼠体内白色脂肪重量,较模型组明显降低(P<0.01,P<0.05),棕色脂肪量明显增多(P<0.05,P<0.01).甘油三酯、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白含量,褪黑素治疗组明显降低(P<0.01).结论 褪黑素对损毁大鼠弓状核所致肥胖具有干预作用,可能是由于其使能量消耗增多对肥胖有一定的抵抗作用.

电针上调食源性肥胖大鼠弓状核α-MSH的表达

目的:研究电针对食源性肥胖(diet-induced obesity, DIO)大鼠体重及摄食量的影响并探讨其中枢神经化学机制.方法:通过高能饲料喂养,建立DIO大鼠模型,分为:(1)2 Hz电针组,(2)100 Hz电针组,(3)束缚对照组,(4)DIO组,(5)肥胖抵抗(diet resistance, DR)组,(6)普通饲料对照组.电针参数:0.5、1.0、1.5 mA各10 min.穴位:双侧足三里和三阴交.每周电针3次.每日记录体重及摄食量,共4周.免疫组织化学方法观察下丘脑弓状核α-黑色素细胞刺激素(α-melanocyte-stimulating hormone, α-MSH)免疫阳性细胞数变化.结果:与DR组和普通饲料对照组相比,DIO组的体重及摄食量增加,而α-MSH免疫阳性细胞数则明显降低.与束缚对照组和DIO组相比,2 Hz电针组、100 Hz电针组的体重和摄食量明显降低,弓状核内α-MSH免疫阳性细胞数明显增多.结论:高能食物饲养导致的肥胖可能与下丘脑弓状核α-MSH水平降低有关.电针治疗肥胖的机制之一,可能是通过刺激下丘脑弓状核前阿黑皮素(pro-opiomelanocortin,POMC)神经元释放α-MSH,抑制摄食,降低体重.

新生期大鼠注射谷氨酸单钠导致骨质疏松的研究进展

通过对新生期大鼠进行谷氨酸单钠(MSG)处理造模,观察大鼠不同发育时期骨代谢及骨生长发育的特点,深入了解骨质疏松症发生发展的全过程,这对骨质疏松症的预防及治疗,具有深远的临床意义.

黄芪对损毁弓状核大鼠所致肥胖的干预研究

[目的]观察黄芪水煎剂对损毁弓状核肥胖大鼠血浆Leptin及相关指标的影响,并初步探讨其作用机制.[方法]通过比较对照组、模型组、黄芪治疗组大鼠的体质量、Lee's指数、血浆瘦素水平和游离脂肪酸(FFA)的变化来分析黄芪对实验性肥胖大鼠的调节作用.[结果]黄芪治疗组大鼠体质量、Lee's指数、血浆游离脂肪酸明显低于模型组,而下丘脑瘦素水平明显高于模型组.[结论]口服黄芪水煎剂可抑制损毁弓状核大鼠所致的肥胖.

针刺对损毁弓状核大鼠所致骨质疏松症的干预研究

[目的]观察针刺足三里对损毁弓状核大鼠所致骨质疏松症的干预作用,以推测针效是否有赖于弓状核,性别因素是否影响针效.[方法]造模组新生期大鼠皮下注射谷氨酸单钠,120 d后针刺组进行针刺,4个疗程后取胫骨和血清检测.[结果]针刺对照组骨矿物质含量(BMC)、骨密度(BMD)显著高于针刺造模组,针刺造模组与单纯造模组之间无显著性差异,雌鼠针刺对照组的BMD高于空白对照组;各组血钙(Ca)、磷(P)、碱性磷酸酶(ALP)、睾酮(T)、雌激素(E2)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、生长激素(GH)都有不同程度的变化,且有性别差异.[结论]弓状核是针刺足三里影响大鼠胫骨骨量的必要作用环节,性别因素对针效有明显影响.

丁香酚对致热家兔弓状核及PO/AH区脑组织中PGE2和cAMP含量的影响

丁香酚是中药丁香油中的主要作用成份,它具有多种复杂的药理作用,尤其在解热降温方面有显著作用.本研究室以往的电生理实验观察到,丁香酚可反转致热原作用下的PO/AH(视前区-下丘脑前部)温度敏感神经元的放电活动,说明丁香酚的解热作用是通过直接或间接地影响PO/AH神经元的放电活动而实现的.近年来,弓状核在体温调节方面的作用倍受观注.本研究室多年的研究表明,弓状核积极地参与了体温调节活动,因为毁损弓状核后大鼠体温发生明显紊乱.本实验对PO/AH与弓状核在体温调节中的作用进行比较性研究,同时观察家兔发热以及丁香酚解热时在家兔弓状核及PO/AH中PGE2和cAMP含量的变化.

生后早期大鼠下丘脑神经核团的形态分析

目的:探讨生后不同日龄大鼠下丘脑神经核团的发育状况,为研究动物脑发育、行为改变提供形态学资料.方法:采用生后不同日龄大鼠,制作火棉胶切片.应用计算机分析系统对下丘脑弓状核、腹内侧核进行形态测量.结果:生后13日龄组大鼠下丘脑核团各项体视学数据均大于10日龄组,前者与16日龄组相比差别无显著性;13日龄组大鼠下丘脑各核团的细胞密度显著高于10日龄组,而与16日龄组比其细胞密度的增高程度更为明显.结论:出生后大鼠下丘脑各核团的大小、细胞密度仍在不断发展变化,生后第13天左右为变化明显时期,大鼠出生13天后下丘脑各核团整体形态显著增高.这种形态学上的变化趋势,可能为解释该时期大鼠的行为差异提供理论依据.

针刺对肥胖大鼠弓状核作用的研究

目的探讨针刺减肥的作用机制. 方法观察针刺治疗前后肥胖大鼠体质量、 Lee's指数、体脂、中枢和外周瘦素和胰岛素(INS)水平以及下丘脑弓状核(ARC)神经细胞自发放电频率的变化. 结果肥胖大鼠体质量、 Lee's指数、体脂、血清瘦素和INS的水平均显著高于正常大鼠, 而下丘脑瘦素和INS的水平以及ARC神经细胞自发放电频率均显著低于正常大鼠. 针刺治疗取得良好减肥疗效的同时, 肥胖大鼠血清瘦素和INS水平均显著回降, 而下丘脑瘦素和INS水平以及ARC神经细胞自发放电频率均显著回升. 结论肥胖机体瘦素和INS血脑运转异常以及ARC神经功能低下可能是产生肥胖的重要原因. 针刺对肥胖机体中枢和外周的瘦素和INS水平以及ARC神经功能的良性调整作用可能是针灸减肥的作用机制之一.

弓状核含2B亚基的NMDA受体在大鼠炎性痛形成中的作用

目的 探讨弓状核含2B亚基的NMDA受体(NR2B)在大鼠炎性痛形成中的作用.方法 雄性SD大鼠108只,体重200～ 250 g,9周龄,采用随机数字表法,将其分为4组:假手术组(S组,n=47)、炎性痛组(IP组,n=47)、二甲基亚砜对照组(DMSO组,n=7)和NR2B拮抗剂Ro25-6981组(Ro25-6981组,n=7).采用大鼠左侧后肢足垫皮内注射完全弗氏佐剂(CFA)0.1 ml的方法制备炎性痛模型.Ro25-6981组于造模后第3天弓状核内注射Ro25-6981 400 pmol.取7只大鼠,分别于CFA注射前1 d(T1)、注射后第2天(T2)、第3天给药前30 min (T3)、第3天给药后30 min(T4)和第5天(T5)时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).S组和IP组于T11-3、T5时处死大鼠,取弓状核组织,采用RT-PCR法测定NR2B mRNA的表达水平,采用Western blot法检测NR2B、磷酸化NR2B(p-NR2B)的表达水平.结果 与S组比较,IP组、DMSO组和Ro25-6981组T2-5时MWT降低,TWL缩短,IP组各时点p-NR2B表达上调(P＜0.05),NR2B及其mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05);与IP组比较,Ro25-6981组T4时MWT升高,TWL延长(P＜0.05),DMSO组各时点MWT和TWL差异无统计学意义(P＞0.05).结论 弓状核NR2B的活化参与了大鼠炎性痛的形成.

不同膳食对大鼠下丘脑弓状核NPY表达的影响

目的:研究不同膳食对大鼠下丘脑弓状核神经肽Y(NPY)表达的影响.方法:以高能饲料饲养大鼠建立膳食诱导肥胖(DIO)大鼠模型,采用SP免疫组织化学染色法观察大鼠下丘脑弓状核NPY蛋白的表达.结果:DIO组大鼠、饥饿组大鼠下丘脑弓状核NPY蛋白的表达明显高于对照组大鼠(P＜0.01,P＜0.05);DIO组大鼠与饥饿组大鼠比较,下丘脑弓状核NPY蛋白的表达无明显差别(P＞0.05).结论:禁食和高能饲料喂养均可上调大鼠下丘脑弓状核NPY的表达.

D-半乳糖衰老大鼠下丘脑弓状核超微结构的观察

目的:观察D-半乳糖衰老模型大鼠下丘脑弓状核超微结构的变化.方法:D-半乳糖连续腹腔注射制作亚急性衰老的大鼠模型,透射电镜下观察下丘脑弓状核超微结构的变化.结果:衰老模型大鼠下丘脑弓状核神经元出现线粒体嵴断裂、粗面内质网脱颗粒、高尔基体扩张等变化;另外,弓状核内的神经毡和部分突触也出现异常改变.结论:D-半乳糖可导致大鼠下丘脑弓状核超微结构发生明显改变,这可能是D-半乳糖致衰老的作用机制之一.

间歇游泳运动对大鼠下丘脑弓状核Fos蛋白表达的影响

目的 以大鼠间歇游泳训练为模型,观察其下丘脑弓状核Fos蛋白在6周游泳训练结束后不同时间点的表达及变化规律.方法 将30只雄性SD大鼠随机分为对照组(n=5)和运动组(n=25),6周游泳训练结束后用免疫组织化学技术链霉素亲和素.生物素-过氧化物酶技术(SABC)法检测即刻,0.5,1,2,4 h 5个时间点弓状核Fos蛋白的表达情况,通过图像分析系统和统计学软件进行图像和数据分析.结果 与对照组相比,运动组Fos蛋白表达在运动结束后0 h明显增加(P<0.05),0.5 h达到峰值(P<0.05),1 h表达下降(P<0.05).2h再次升高(P<0.05),4 h降至正常对照水平(P0.05).结论 运动性应激可以迅速促进下丘脑弓状核Fos蛋白的活化.