首页 > 文献资料
-
表达鼠精子受精素β的减毒沙门菌疫苗株的构建
目的构建表达鼠精子抗原受精素β亚单位(Fβ)的可口服减毒沙门菌活疫苗株. 方法通过酶切从克隆载体TOPO中获得FβcDNA片段,将其插入表达载体PYA3149中,构建重组质粒pFFL,将该重组质粒转入鼠沙门伤寒杆菌疫苗株X4632,获得重组菌株X4632(pFFL),行Western blot 分析及初步毒性试验. 结果此无抗药性的重组菌株X4632(pFFL)可稳定表达被Fβ抗体识别的重组Fβ蛋白,口服该菌株无明显毒性作用. 结论该疫苗株的构建为研究以Fβ为靶抗原的精子抗原避孕疫苗打下了基础,值得进一步行诱导免疫观察.
-
精子去整合素和卵子整合素在受精过程中的作用
迄今为止的研究揭示了许多能介导精卵相互作用的分子.精子至少有三种去整合素(α-受精素、β-受精素和Cyritestrin)可介导精卵的结合;在卵子方面则有多种整合素.α-6/β-1整合素似乎能作为β受精素的受体发挥功能.同时,其它一些精子去整合素及精子表面的其它整合素也可能与α-6/β-1这一受体结合.而β受精素也能与其它一些受体结合.α受精素含有一个去整合素结构域,其胞外段的另一部分与卵子胞膜的相互作用有关,提示它也可能具有多个受体.
-
精子表面蛋白受精素β在精卵结合和融合中的作用研究
为探讨精子表面蛋白受精索β(Fβ)在精-卵结合和融合中的作用.本文应用鼠Fβ单抗,通过体外受精试验观察该单抗预孵育不同浓度精子后,对精-卵结合和融合功能的影响;应用免疫细胞化学方法确定Fβ在精子表面的特异性定位.结果在不同精子浓度下,Fβ单抗均可显著降低体外精-卵的结合和融合能力;可使精-卵结合指数降低34.43%～75.46%,平均56.05%;使精-卵融合的受精指数降低47.68%～56.32%,平均52.18%;受精率下降28.06%～54.32%,平均41.56%.在精子顶体反应前后,Fβ在精子表面均特异性定位于精子头部赤道区域和顶体内膜区域.结论:Fβ在精-卵的结合和融合中均具有重要作用,支持将Fβ蛋白作为精子靶抗原之一用于避孕疫苗的开发研究.
-
表达小鼠精子受精素β胞外区减毒沙门菌疫苗株的构建
目的:构建表达鼠精子抗原受精素β亚单位(Fβ)胞外区的可口服减毒沙门菌活疫苗株. 方法:设计一对引物,应用PCR方法获得Fβ胞外区cDNA片断,将其插入表达载体pYA3149中,构建重组质粒pFEC,将该重组质粒转入鼠沙门菌疫苗株X4632,获得杂合菌株X4632(pFEC).该重组菌口服免疫雌鼠,通过ELISA方法检测其诱导雌鼠血清IgG抗体和阴道分泌物IgA抗体滴度变化. 结果:此疫苗株X4632(pFEC)可稳定表达被Fβ抗体识别的重组Fβ胞外区蛋白,口服该菌株不但可激发雌鼠产生高水平血清抗重组Fβ蛋白IgG抗体,而且在阴道分泌物中可出现一定程度抗重组Fβ蛋白IgA抗体,无明显毒性作用. 结论:X4632(pFEC)疫苗株的构建为研究以Fβ为靶抗原的精子抗原避孕疫苗打下了基础.
-
表达人受精素β去整合素结构域的重组沙门菌疫苗株的构建
目的构建表达人受精素β去整合素结构域的重组沙门菌疫苗株.方法应用PCR方法获得人受精素β去整合素结构域的cDNA片断,将其插入高拷贝表达载体pYA3339中,构建重组质粒pYA3339/hf279,将该重组质粒转入鼠沙门菌疫苗株X4550,获得重组菌株X4550 (pYA3339/hf279).结果该重组疫苗株可稳定表达能被抗人受精素β多克隆抗体识别的重组蛋白HF93,其分子量约为16×103.结论该疫苗株的构建为进一步研究以人受精素β为靶抗原的免疫避孕疫苗打下了基础.
