Mn2+和Mn3+对大鼠肝细胞膜的毒性作用

锰(manganese,Mn)作为正常机体所必需的微量元素,在生物体内众多反应中发挥重要作用,同时也是职业危害因素和环境污染物之一[1].研究发现,锰除具有神经毒性作用外,主要经过肝细胞进入胆汁排泄.

锌金属硫蛋白拮抗甲基汞对红细胞膜损伤的作用

为了探讨锌金属硫蛋白(ZnMT)拮抗MeHg对细胞膜的损伤作用及其机理,为预防甲基汞(MeHg)中毒提供科学依据,研究了不同剂量的锌诱导产生的ZnMT对MeHg染毒小鼠红细胞膜构象、膜巯基含量、膜流动性和膜通透性等的影响,实验结果表明:不同剂量的Zn可以诱导小鼠肝脏产生ZnMT,随着实验组Zn剂量的增加,肝脏内ZnMT的含量也相应的增加,呈剂量-效应关系(r=0.996).ZnMT具有保护膜构象及膜巯基、拮抗MeHg对膜流动性及膜通透性的损伤作用.实验结果同时显示了诱导ZnMT的锌的剂量要适当,过高则有毒性作用.

维生素A干预对大鼠抗氧化能力及细胞膜流动性影响的研究

目的通过对大鼠补充不同剂量维生素A(VA)观察机体抗氧化能力及对红细胞膜流动性的影响,了解抗氧化活性的佳剂量.方法将Wistar大鼠随机分为4组,分别为维生素A缺乏组(VA1组)补充11.43(VA2组)、42.86(VA3组)和142.86μg RE·kg-1·d-1(VA4组)维生素A三个剂量组.测定各组大鼠血浆VA含量、SOD、MDA和GSH-^的含量和活性,用荧光偏振度P值和微粘度η值评价红细胞膜的流动性.结果各组血浆中VA水平随补充剂量的增加而增加.血浆中SOD、GSH-Px和MDA的结果显示,补充剂量为VA2、VA3组SOD的水平较VA缺乏组和VA4组明显偏低(P＜0.01).VA3组的MDA较其它3个剂量组明显下降(P＜0.01).VA4组的SOD、MDA含量明显高于其它三个剂量组(P＜0.01).VA3组血浆中GSH-Px的活性明显升高,P＜0.01.细胞膜流动性的结果显示:VA3组P值小(P＜0.01);VA4组P值明显增高(P＜0.01).微粘度η在VA3组与VA缺乏组和VA2组之间未见明显差异,与VA4组相比明显下降(P＜0.01).结论维生素A补充剂量为42.86μgRE·kg-1·d-1时,能够发挥较好抗氧化作用,红细胞膜的流动性明显增加,过量摄入维生素A可造成机体的中毒反应,增加机体的氧化损伤.

维生素E补充对外周血细胞活性的影响及机制研究

目的观察不同剂量维生素E(VE)补充对大鼠外周血淋巴细胞增殖活性和抗DNA氧化损伤能力以及红细胞膜流动性的影响.方法将48只Wistar大鼠随机分为对照组和VE1、VE2及VE3三个VE补充组,各组VE摄入量分别为每天7.5、50、200和750IU/kg bw,实验期为8周.实验结束后无痛处死动物并留取全血,分别测定血浆VE和MDA含量,分析红细胞膜GSH-Px活性、红细胞膜流动性、淋巴细胞转化率及DNA氧化损伤.结果3个干预组血浆VE水平较对照组明显升高(P＜0.05);50IU/kg bw·d VE(VE1)组血浆MDA含量为(2.29±0.55)nmol/ml,显著低于其它三组(P＜0.05),红细胞膜GSH-Px活性为(367.17±129.86)U/mgprot,明显高于其它三组(P＜0.05);与对照、VE2、VE3组相比,VE1组淋巴细胞转化率分别提高了261.86%、199.23%、412.97%(P＜0.05),10μmol/L H2O2诱导的DNA氧化损伤程度显著降低(P＜0.05);VE1组红细胞膜P、η值明显低于其它三组(P＜0.05),即该组膜流动性显著提高.结论本实验揭示VE能明显改善红细胞膜流动性、提高淋巴细胞DNA抗氧化能力及增殖活性的有效补充剂量为50IU/kg bw·d;补充剂量过大时未观察到类似作用,甚至显示细胞功能下降.

运动对脑老化小鼠学习记忆能力及突触可塑性的影响

目的 从突触可塑性方面探讨运动的抗脑老化作用及其机制.方法 雄性ICR小鼠40只分为4组,即脑老化模型组、脑老化+运动组、运动对照组、普通对照组,每组10只.以电动跑台进行有氧跑步运动,速度25m/min,持续运动20min,每天运动1次,每周运动6d,休息1d.以D-半乳糖100mg/kg·d颈背部皮下注射制备脑老化模型.实验干预期共9周.以Morris水迷宫测试小鼠空间记忆和学习能力,流式细胞术测定皮层海马神经元突触体数量,荧光偏振法测定突触体膜流动性,羟胺比色法测定脑组织乙酰胆碱酯酶(AChE)活性.结果 (1)水迷宫实验中,脑老化组小鼠的逃避潜伏期(EL)明显大于普通对照组小鼠(P<0.05),脑老化+运动组小鼠的EL低于脑老化组(P<0.05)而与普通对照组无显著差异,运动对照组与普通对照组小鼠的EL无显著差异(P>0.05).(2)脑老化组和脑老化+运动组小鼠突触体数量低于非脑老化组(运动对照组和普通对照组,P<0.05),脑老化+运动组高于脑老化组(P<0.05),运动对照组与普通对照组无显著差异(P>0.05).(3)突触体膜流动性:脑老化组小鼠突触体膜粘滞度高于非脑老化组并且高于脑老化+运动组(P<0.05),脑老化运动组与非脑老化组之间、运动对照组与普通对照组之间无显著差异(P>0.05).(4)脑老化组和脑老化+运动组小鼠脑组织AchE活性高于非脑老化组(P<0.05),运动对照组与普通对照组之间无显著差异(P>0.05).结论 运动能够减轻脑老化小鼠空间学习记忆能力的衰退.

维生素C缺乏对豚鼠抗氧化能力及红细胞膜流动性的影响

目的观察维生素C(以下简称VC)缺乏对豚鼠血浆抗氧化酶类、脂质过氧化产物及红细胞膜流动性的影响.方法每日通过灌胃给幼年豚鼠不同剂量VC以构建动物模型,VC干预剂量分别为0(缺乏组)、7.5、125、250mg/kgbw补充组,干预时间为20天.干预结束后收集血样,分离获取血浆及红细胞,测定血浆超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)含量;采用荧光偏振法,以DPH为探针,检测红细胞膜流动性.结果各组血浆SOD差异无显著性;缺乏组GSH-Px活力较每日7.5mg/kgbwVC补充组降低了20.8%;与各VC补充组比较,缺乏组血浆MDA水平明显升高(P<0.05),红细胞膜流动性明显降低(P<0.01).结论维生素C缺乏可导致豚鼠血浆GSH-Px含量降低,红细胞膜流动性下降,MDA水平增高.

抗肿瘤性植物化学成分引起的膜流动性变化与膜脂质作用部位

地黄饮子对老龄大鼠的血、脑组织过氧化脂质及相关酶的影响

为探讨古方地黄饮子延缓衰老的效用及机理,老年大鼠按4g/kg和12g/kg连续灌服地黄饮子10周后,测定血、脑过氧化脂质(LPO)含量、超氧化物歧化酶(S0D)活性,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及红细胞膜、线粒体膜的流动性.结果地黄饮子能使老年大鼠血、脑LPO含量明显下降,S0D、GSH-Px活性明显升高,红细胞膜、脑线粒体膜流动性显著提高.表明地黄饮子的抗衰老效用与其提高老龄机体的抗氧化能力有关.

金匮肾气丸对微波辐射性生殖功能障碍小鼠生精细胞膜流动性的影响

目的:探讨微波辐射对小鼠生精细胞膜流动性的影响及金匮肾气丸治疗机制.方法:雄性BALB/c小鼠50只,随机分为5组,每组10只.平行对照组不做任何处理;辐射对照组、金匮肾气丸1组、金匮肾气丸2组、金匮肾气丸3组均暴露于频率为2 450MHz连续微波中,功率密度为10mW/cm2,辐射18d,每天辐射1h;辐射对照组用0.9％氯化钠溶液分别灌胃,每天1次,每次0.1mL;金匮肾气丸组用金匮肾气丸(0.1、0.2、0.4g/kg体质量)分别灌胃,每天1次.组合酶法分离各组小鼠生殖细胞,荧光偏振法及激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测膜微黏度(η)、荧光偏振度(P).结果:微波辐射后,P及η显著升高(P＜0.05);金匮肾气丸治疗后,P及η皆有显著改善(P＜0.05),金匮肾气丸1组、2组、3组均接近正常,3组之间无显著差异.结论:微波辐射可以使小鼠生精细胞膜流动性下降,而金匮肾气丸的治疗机制是通过增加小鼠精子膜的流动性而起到治疗作用.

川芎嗪对缺氧缺糖状态下培养的血管内皮细胞ECV-304的影响

目的:观察缺氧缺糖条件下血管内皮细胞(ECV-304)释放乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)水平和细胞膜流动性的变化及川芎嗪对它们的影响.方法:缺氧缺糖诱导血管内皮细胞损伤,自动生化分析仪测定培养液和细胞层中LDH活性;用比色法测定细胞培养液中NO水平;用荧光法检测细胞内脂质过氧化产物MDA以评价脂质过氧化程度;荧光偏振法测定内皮细胞膜流动性.结果:缺氧缺糖引起的血管内皮细胞LDH释放增加、MDA生成增多和膜流动性增高,NO水平降低.而川芎嗪可抑制缺氧缺糖引起的血管内皮细胞释放LDH,MDA生成和降低细胞膜流动性,提高NO水平.结论:川芎嗪可保护缺氧缺糖诱导血管内皮细胞的损伤,其作用机制有待进一步研究.

水飞蓟素对小鼠肝细胞微粒体及线粒体膜流动性的影响

目的:观察水飞蓟素 silymarin 对小鼠肝微粒体及线粒体膜流动性的影响.方法:以ANS,DPH为荧光探针标记肝微粒体及线粒体膜浅层及深层,测定肝微粒体及线粒体膜荧光强度(F),荧光偏振度(P)及平均微粘度(η).结果:水飞蓟素能增高肝微粒体及线粒体膜浅层流动性,同时能降低肝微粒体及线粒体膜深层流动性.CCl4亦可导致肝微粒体及线粒体膜浅层流动性增加及肝微粒体及线粒体膜深层流动性降低,而给予水飞蓟素 140,280 mg*kg-1后,能使增高的肝微粒体及线粒体膜浅层流动性降低,亦能使降低的肝微粒体及线粒体膜深层流动性增高.结论:水飞蓟素对肝损伤的保护作用可能与水飞蓟素恢复肝微粒体及线粒体的膜流动性有关.

栀子提取物ZG对副流感病毒1型感染后宿主细胞膜的影响

为了探讨栀子提取物ZG抗病毒作用的生物学机制,观察了栀子提取物ZG对副流感病毒1型(PIV-1)感染后宿主细胞膜电位、膜Na+-K+-ATP酶活性和膜流动性的影响.以氯化乙酰胆碱为阳性对照,采用荧光探针Di-BAC4(3)标记Hep-2细胞膜电位,借助流式细胞仪检测膜电位;定磷法,分光光度计检测Na+-K+-ATP酶活性;荧光探针NBD-C6-HPC标记细胞膜磷脂,以荧光漂白恢复法和激光扫描共聚焦显微镜检测膜流动性.结果显示:PIV-1感染后宿主细胞膜电位下降,处于超极化状态;膜Na+-K+-ATP酶活性显著增加,膜流动性显著降低.栀子提取物ZG作用后,对宿主细胞膜的超极化状态没有明显影响;对膜Na+-K+-ATP酶活性没有明显影响;而对膜流动性则有明显的恢复作用.阳性对照药乙酰胆碱能明显改善病毒感染后膜电位的超极化状态.PIV-1感染后膜电位、Na+-K+-ATP酶活性和膜流动性等细胞膜能态和功能的改变,可能为病毒感染的生物学机制之一;栀子提取物ZG可能是通过改善细胞膜流动性,维持细胞膜的正常功能来发挥抗病毒感染的作用,而与膜电位和膜Na+-K+-ATP酶活性等能态来源的环节可能无关.

糖尿病合并冠心病患者红细胞膜脂肪酸成分改变与胰岛素抵抗

我们采用高效液相色谱(PHLC)和荧光偏振技术测定了2型糖尿病合并冠心病病人红细胞膜脂肪酸成分和膜微粘度，并分析了脂肪酸成分、膜流动性和胰岛素敏感指数(ISI)与冠心病发生的关系。结果表明糖尿病人红细胞膜花生四烯酸(AA，C20：4)含量及组成明显低于对照组，而伴冠心病组AA含量又低于单纯糖尿病组，且其总脂肪酸含量明显低于对照组。两组病人膜微粘度明显高于对照，而冠心病组又明显高于单纯糖尿病组。糖尿病人红细胞膜AA含量与膜微粘度呈负相关，与ISI呈正相关，膜微粘度与ISI呈负相关。AA含量，微粘度和ISI均与冠心病的发生有关。提示糖尿病人冠心病的发生、发展与其脂肪酸代谢紊乱有关。

β-淀粉样蛋白对神经元膜流动性的影响

目的:研究Aβ对神经元膜流动性的影响,探索Aβ的神经毒性机制.方法:制备急性分离的新生SD大鼠海马和皮层神经元细胞悬液,采用显微准弹性激光散射技术和荧光偏振技术.结果:采用显微准弹性激光散射技术发现Aβ25～35作用5min和35min后均降低海马和皮层神经元ACF的衰减速率及频移线宽Γ,而采用荧光偏振技术发现Aβ25～35作用5min和35min后虽然有升高海马和皮层神经元荧光各向异性的趋势,但无统计学意义.结论:提示Aβ可降低神经元膜流动性,显微准弹性激光散射技术比荧光偏振技术更敏感.

染料木素对去卵巢大鼠脑突触体[Ca2+]i及膜流动性的影响

目的观察去卵巢大鼠大脑皮质和海马突触体[Ca2+]i和膜流动性变化以及染料木素的治疗作用.方法雌性SD大鼠随机分为假手术组、去卵巢对照组、染料木素组、苯甲酸雌二醇组.分别皮下注射生理盐水50μl、生理盐水50μ1、染料木素250μg和苯甲酸雌二醇50μg,隔日1次.术后8周测定各组大鼠大脑额、顶叶皮质和海马的突触体[Ca2+]i及膜流动性.结果去卵巢对照组大鼠大脑皮质及海马突触体[Ca2+]i分别为(243.31±31.21)nmol/L和(305.10±54.31)nmoL/L,与假手术组、苯甲酸雌二醇组和染料木素组之间有显著性差异(P＜0.01);但在假手术组、苯甲酸雌二醇组和染料木素组之间无显著差异(P＞0.05);去卵巢对照组海马突触体膜相对黏滞度(η)为3.03±0.39,与假手术组和苯甲酸雌二醇组之间有显著性差异(P＜0.05);与染料木素组相比有高度显著性差异(P＜0.01).染料木素组、苯甲酸雌二醇组及假手术组之间无显著差异(P＞0.05).结论大鼠去卵巢后突触体膜流动性降低及突触体内自由钙增加,染料木素能增加去卵巢大鼠突触体膜流动性及维持钙稳态.

人单核细胞来源的树突状细胞微观流变学研究

目的探讨不同发育阶段树突状细胞(DC)的微观流变学特性及其差异. 方法应用密度梯度离心法从正常人外周血分离获得单个核细胞,经贴壁培养和免疫磁珠阴性选择获取纯化的单核细胞,以此作为DC前体(pDC)在体外培养诱导获得未成熟DC(imDC)和成熟DC(mDC).并用免疫细胞化学、免疫荧光、酶细胞化学、流式细胞仪等技术对不同发育阶段的DC进行鉴定;应用微观流变学研究方法对以上细胞的电泳率、渗透脆性、膜流动性和傅立叶红外光谱(FT-IR)进行测量和分析. 结果改进的分选法所获得的CD14+pDC＞97%.体外加入rhGM-CSF和IL-4培养6d后,S-100+imDC占细胞总数的96.9%;再加入rhGM-GSF、IL-4和TNF-α培养48 h后,CD86+mDC占细胞总数的87%.其微观流变学特性为:mDC电泳率明显高于pDC和imDC(P<0.05);3种细胞均具有较强的抗低渗能力,但imDC强(细胞未破碎率为27%);mDC的膜流动性大,其荧光偏整度P值为0.062±0.001(P<0.01);FT-IR显示mDC中的蛋白质二级结构发生了较大变化. 结论DC的微观流变学特性随其不同的发育阶段而发生了明显变化.

栀子提取物ZG对单纯疱疹病毒1型感染后细胞膜流动性的影响

目的 观察栀子提取物ZG对单纯疱疹病毒1型感染后宿主细胞膜流动性的影响,以探讨其抗病毒作用机理.方法 采用NBD-C6-HPC特异性荧光探针标记Hep-2细胞膜脂质,以肝素钠为阳性对照,借助激光共聚焦扫描技术检测栀子提取物ZG对病毒感染后宿主细胞膜流动性的影响.结果 正常细胞膜具有良好的流动性,漂白后荧光恢复率为73.89%;病毒感染后Hep-2细胞膜流动性显著降低,荧光恢复率为18.54%;栀子提取物ZG作用后细胞膜流动性明显恢复,荧光恢复率为61.21%;肝素钠作用后细胞膜流动性明显恢复,荧光恢复率为56.62%.结论 通过改善细胞膜的流动性,从而维持细胞膜的正常功能可能是栀子提取物ZG抗病毒感染的机理之一.

低强度He-Ne激光对人红细胞血液流变特性的影响

目的观察不同功率的低强度He-Ne激光对正常人体红细胞流变学特性的影响.方法以正常人体红细胞为研究对象,测量了低强度He-Ne激光在不同照射时间(20、40、60、80和120 min)、不同功率条件(2、4、6和8 mW)下红细胞的变形、取向、膜流动性、膜的微黏度和渗透脆性的变化情况.结果照射后红细胞的变形性和膜流动性增强、渗透脆性下降.照射对红细胞流变学特性影响显著.结论激光照射功率密度为2.55 mW/cm2,照射时间120 min、照射血样为2 ml时取得的照射效果佳.

卷苦肝泰对CCl4肝损伤大鼠肝脏线粒体膜的影响

目的:观察中药复方卷苦肝泰对慢生四氯化碳肝损伤的治疗作用,探讨其可能的作用机制,为中医药治疗肝病提供@定依据.方法:用CCl4灌胃4 wk复制慢性肝损伤模型.予卷苦肝泰6 wk.检测并观察了各组大鼠:肝线粒体膜总磷脂(DL)、总胆固醇(Chol)的含量及膜脂质组分磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、神经磷脂(SM)、心磷脂(CL)的含量.结果:与自然恢复组比较,卷苦肝泰煎剂能降低膜胆固醇含量,维持膜磷脂稳定;显著提高PC、PE、CL含量;降低膜老化指数Ch/PL,SM/PC.结论:卷苦肝泰具有保护肝线粒体膜的作用即抗膜磷脂降解作用;降低膜胆固醇含量;稳定膜流动性、防止膜老化.

胰岛淀粉样纤维对体外胰岛细胞膜的毒性作用

目的 探讨胰岛淀粉样多肽(IAPP,也称胰淀素Amylin)的纤维状态胰岛淀粉样纤维(IAf)对胰岛细胞膜的毒性作用及可能机制.方法 比较用可溶性IAPP和IAf孵化培养的胰岛细胞膜流动性的变化,并在黏附细胞仪570记录各组[Ca2+]i的动态变化;以10μmol/L IAf组为对照组,分别比较Ca2+通道阻断剂组、无Ca2+培养液组、胆固醇干预组[Ca2+]i的动态变化,了解[Ca2+]i变化与钙离子通道的关系.结果 细胞膜流动性和[Ca2+]i在IAf组中呈剂量依赖性升高,与可溶性IAPP组及空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);而可溶性IAPP组与空白对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).Ca2+通道阻断剂预处理组加10μmol/L IAf刺激后[Ca2+]i变化与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05),而无Ca2+培养液组和胆固醇预处理组加10μmol/L IAf 刺激后[Ca2+]i变化均明显低于对照组(P＜0.01).结论 IAf可能通过改变胰岛细胞膜流动性和细胞内钙超载而导致细胞损伤,钙超载是由于外钙内流所致,其途径可能并非经过钙离子通道,可能与"淀粉样通道"形成有关.胆固醇具有拮抗此毒性的作用.