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栀子提取物抗病毒试验研究
目的:观察栀子提取物ZG对小鼠流感病毒性肺炎模型的影响和体外对多种病毒致细胞病变作用的影响.方法:小鼠经滴鼻感染流感病毒造成肺炎模型,观察肺部炎症、死亡率和生命延长率,体外抗病毒试验采用CPE法,按Reed-Muench方法计算TCO,TC5O,IG5O,TI.结果:栀子提取物ZG对流感病毒致小鼠肺部炎症有明显抑制作用,可明显降低流感病毒感染后小鼠的死亡率、延长存活时间,同时降低小鼠血清中NO含量;在体外对流感病毒等6种病毒引起的细胞病变有明显抑制作用.结论:栀子提取物ZG对流感病毒等6种病毒有明显抑制作用,其对小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用与降低血清中NO含量有关.
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栀子提取物ZG对单纯疱疹病毒1型细胞吸附的影响
采用负染技术,借助高倍电子显微镜观察栀子提取物ZG作用后,病毒颗粒及其病毒吸附蛋白(virus attachment protein,VAP)的变化,考察药物是否直接改变或破坏病毒包膜蛋白的结构,使其失去感染性;采用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记病毒,以肝素钠为参照,借助冷却慢扫描电荷耦合器件荧光成象技术,用Aquacomos软件进行图象分析,以探讨栀子提取物ZG不同加药方式对HSV-1吸附量的影响.结果表明栀子提取物ZG对HSV-1包膜表面的VAP无直接破坏作用,不影响病毒对Hep-2细胞的感染性;先加入肝素钠再进行病毒吸附及肝素钠病毒同时加入培养细胞这两种用药方式可明显减少细胞表面病毒的吸附量;栀子提取物ZG各种不同加药方式均能阻止HSV-1对Hep-2细胞表面的吸附,使病毒吸附量减少.
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栀子提取物ZG对副流感病毒1型感染后宿主细胞膜的影响
为了探讨栀子提取物ZG抗病毒作用的生物学机制,观察了栀子提取物ZG对副流感病毒1型(PIV-1)感染后宿主细胞膜电位、膜Na+-K+-ATP酶活性和膜流动性的影响.以氯化乙酰胆碱为阳性对照,采用荧光探针Di-BAC4(3)标记Hep-2细胞膜电位,借助流式细胞仪检测膜电位;定磷法,分光光度计检测Na+-K+-ATP酶活性;荧光探针NBD-C6-HPC标记细胞膜磷脂,以荧光漂白恢复法和激光扫描共聚焦显微镜检测膜流动性.结果显示:PIV-1感染后宿主细胞膜电位下降,处于超极化状态;膜Na+-K+-ATP酶活性显著增加,膜流动性显著降低.栀子提取物ZG作用后,对宿主细胞膜的超极化状态没有明显影响;对膜Na+-K+-ATP酶活性没有明显影响;而对膜流动性则有明显的恢复作用.阳性对照药乙酰胆碱能明显改善病毒感染后膜电位的超极化状态.PIV-1感染后膜电位、Na+-K+-ATP酶活性和膜流动性等细胞膜能态和功能的改变,可能为病毒感染的生物学机制之一;栀子提取物ZG可能是通过改善细胞膜流动性,维持细胞膜的正常功能来发挥抗病毒感染的作用,而与膜电位和膜Na+-K+-ATP酶活性等能态来源的环节可能无关.
关键词： 栀子提取物ZG 副流感病毒1型 膜电位 Na+-K+-ATP酶活性 膜流动性 -
栀子提取物ZG对单纯疱疹病毒1型感染后细胞膜流动性的影响
目的 观察栀子提取物ZG对单纯疱疹病毒1型感染后宿主细胞膜流动性的影响,以探讨其抗病毒作用机理.方法 采用NBD-C6-HPC特异性荧光探针标记Hep-2细胞膜脂质,以肝素钠为阳性对照,借助激光共聚焦扫描技术检测栀子提取物ZG对病毒感染后宿主细胞膜流动性的影响.结果 正常细胞膜具有良好的流动性,漂白后荧光恢复率为73.89%;病毒感染后Hep-2细胞膜流动性显著降低,荧光恢复率为18.54%;栀子提取物ZG作用后细胞膜流动性明显恢复,荧光恢复率为61.21%;肝素钠作用后细胞膜流动性明显恢复,荧光恢复率为56.62%.结论 通过改善细胞膜的流动性,从而维持细胞膜的正常功能可能是栀子提取物ZG抗病毒感染的机理之一.
关键词： 栀子提取物ZG 单纯疱疹病毒1型 膜流动性 NBD-C6-HPC -
栀子提取物ZG对单纯疱疹病毒1型吸附量的影响
目的 观察栀子提取物ZG对单纯疱疹病毒1型(HSV-1)吸附过程中病毒吸附量的影响,以探讨其抗病毒作用机理.方法 采用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)作为荧光探针标记病毒,以肝素钠为对照,借助流式细胞仪,通过收集多种不同的加药方式后细胞表面的荧光强度,来考察病毒吸附过程中病毒吸附量的变化及栀子提取物ZG对此变化的影响.结果 单纯疱疹病毒1型在Hep-2细胞表面吸附存在饱和性、特异性;肝素钠3种加药方式均能明显降低病毒吸附量,先加药后吸附及吸附和加药同时进行两种方式,优于先吸附后加药的方式,其吸附抑制率分别为84.76%和82.02%;栀子提取物ZG 3种加药方式均能明显降低病毒吸附量,其中以吸附和加药同时进行组为显著,吸附抑制率为68.46%.结论 栀子提取物ZG可能是通过作用于病毒吸附的多个环节来达到抑制HSV-1的吸附作用.
