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黄芪甲甙对慢性心肌炎心肌纤维化的影响
目的 探讨中药黄芪的活性成分黄芪甲甙对慢性心肌炎心肌纤维化的影响及其相关机制.方法 80只Balb/c小鼠随机分为3组,分别为空白对照组(对照组,20只)、慢性心肌炎组(模型组,30只)和黄芪甲甙干预心肌炎组(干预组,30只).模型组和干预组小鼠每月1次腹腔接种柯萨奇病毒B3(CVB3),对照组腹腔注射等量病毒培养液.对照组和模型组小鼠每日以饮用水喂养,干预组小鼠以加有羧甲基纤维素钠助溶的黄芪甲甙饮用水(浓度300 mg/L)喂养.3个月后处死所有存活小鼠,小鼠心脏组织经苦味酸天狼星红染色后以自动图像分析系统计算胶原容积积分(CVF),以Western blot方法检测各组小鼠心脏组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)及其组织抑制物(TIMP-1)、MMP-13和MMP-14的表达情况.结果 黄芪甲甙干预后,与模型组比较,小鼠死亡率降低(53.3%、23.3%,χ2=4.23,P＜0.05)、心脏CVF明显下降[模型组为(17.4±1.2)%、干预组为(8.6±0.9)%,χ2=5.38,P＜0.05];与对照组比较,TGF-β1、MMP-1和TIMP-1表达减少而MMP-13和MMP-14的表达增多.结论 黄芪甲甙可以降低慢性心肌炎小鼠死亡率、减轻其心肌纤维化,其抗纤维化作用是通过抑制TGF-β1、促进MMP-13和MMP-14在心脏中的表达而实现.
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CCK8和PGE2对CVB体外攻击人外周血pDC的调控
目的:了解八肽胆囊收缩素(CCK8)是否参与柯萨奇病毒B(CVB)体外攻击人外周血浆细胞样树突状细胞(pDC)的调控.方法:RT-PCR和IF检测CCK受体的表达;FCM分析协同刺激分子的变化,用ELISA和RT-PCR检测IFN-α的分泌.结果:CVB体外攻击pDC,CCK1R和CCK2R 的表达增加;CCK8 可以抑制CD80、CD86 和HLA-DR表达的增高,而PGE2可以进一步促进CD80、CD86和HLA-DR的表达;同时,CCK8抑制CVB攻击后IFN-α的分泌,而PGE2进一步促进IFN-α的分泌.结论:CCK8和PGE2可双向调控CVB体外攻击人外周血pDC的免疫应答.
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柯萨奇B3病毒中国分离株VP1基因序列分析
目的分析柯萨奇B3病毒(CVB3)中国分离株编码主要中和抗原的VP1基因序列.方法用逆转录PCR技术扩增CVB3中国分离株的VP1基因,通过TA克隆法构建pCR2.1-VP1并进行核苷酸序列的测定分析.结果测序发现CVB3中国分离株与CVB3 Nancy株VP1基因均编码293个氨基酸,二者存在59个核苷酸差异, 其中10处影响到氨基酸的编码,其余均为同义变异.结论 CVB3中国分离株与Nancy株VP1基因序列存在一定的差异,该差异对免疫学性状的影响有待进一步鉴定.
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柯萨奇B1病毒VP1基因在大肠杆菌中的表达
目的在大肠杆菌中表达柯萨奇B1(CVB1)病毒VP1蛋白.方法用限制性酶切方法将CVB1 VP1基因从pMD18-T-VP1上切下,连接至pQE30构建原核表达系统pQE30-VP1.经酶切和PCR验证后转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导目的基因表达.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western-blot检测VP1蛋白的表达.结果酶切、PCR证明构建的原核表达系统携带方向正确的CVB1 VP1基因.SDS-PAGE和Westernblot实验均可于33.0kDa处见到目的条带.结论 CVB1 VP1基因在大肠杆菌的成功表达为开发新的血清学检测试剂提供了基础.
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小柴胡汤对病毒感染体外心肌细胞琥珀酸脱氢酶的影响
柯萨奇病毒B组(Coxsackievirus B Group,CVB)是一组单链RNA病毒,小RNA肠道病毒属,是病毒性心肌炎的主要病原体,病毒性心肌炎目前尚无有效的治疗药物.本研究选取中药小柴胡汤来研究其对体外新生大鼠病毒性心肌炎模型的心肌酶组织化学的影响.
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柯萨奇病毒B诱导的免疫性多发性肌炎模型的建立
目的:探讨制作实验性免疫性多发性肌炎动物模型的方法,以及柯萨奇病毒感染与多发性肌炎发病的关系.方法:分别用不同毒力0.3 ml的柯萨奇病毒B1(CVB1 10-2,10-3,10-4 TCID50)感染和兔肌肉匀浆(30 mg/ml)加完全弗氏佐剂多次免疫28只正常豚鼠,共观察3～5周;和不同毒力0.2 ml CVB1 10-3,10-5,10-7 TCID50分别腹腔接种各20只BALB/C和C57BL/6小鼠;以及0.1 ml CVB3 10-6 TCID50腹腔接种28只BALB/C小鼠,共观察1～3周,制成实验性多发性肌炎动物模型,观察其在血清肌酶、巨检和组织病理的改变.结果:发现0.3 ml毒力为10-2(A组),10-3(B组)和10-4(C组)TCID50柯萨奇病毒B1感染豚鼠组,3周后仅少数豚鼠出现多发性肌炎的症状,但均能导致肌酶谱(CK,CK-MM,LDH和AST)异常升高,与正常组相比有明显差异(均P＜0.05),以B组升高值高,但巨检肌肉无异常;4周后10-3组(F组)豚鼠33.3%出现下肢瘫痪,巨检发现肌肉萎缩,弹性差,病理检查证实为多发性肌炎改变;3周与5周的CK和CK-MM升高值相比,无显著差异(P=0.1031和P=0.1164).单纯兔肌肉匀浆免疫(E组)也能导致豚鼠肌酶谱异常升高,但不如病毒感染后明显,也不引起股肌肉肌炎的病理改变.柯萨奇病毒B1和B3均不能诱导BALB/C和C57BL/6小鼠出现多发性肌炎改变.结论:柯萨奇病毒B1感染的毒力和病毒量与豚鼠多发性肌炎的发病相关,在感染5周后比较明显.本模型可作为研究人类多发性肌炎的一个重要手段,为人类肌炎的发病机理和治疗提供较好的动物模型.
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肺炎患儿感染柯萨奇病毒后对机体细胞免疫的影响
为探讨肺炎患儿感染柯萨奇病毒(CVB)后对机体免疫功能的影响,与细胞因子在小儿肺炎发生发展中的作用,检测了45例肺炎患儿的CVB-IgM、白细胞介素-2(IL-2)及可溶性IL-2受体(sIL-2R).肺炎患儿IL-2水平显著低于正常组,sIL-2R水平显著高于正常组.喘憋组CVB-IgM阳性率及sIL-2R水平显著高于非喘憋组,IL-2水平显著低于非喘憋组;而CVB-IgM阳性者与CVB-IgM阴性者之间,IL-2及sIL-2R水平无显著不同.结果提示,IL-2及sIL-2R在肺炎的发生发展过程中起重要作用,IL-2及sIL-2R水平变化似与CVB感染无密切关系.
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柯萨奇病毒B致面神经麻痹15例
目的:总结由柯萨奇病毒B(CVB)引起的面神经麻痹.方法:应用酶联免疫吸附试验,测定15例患者血清中CVB-IgM\,IgG抗体.结果:15例中近期感染4例,既往感染11例,临床均给予抗病毒治疗,效果满意.结论:由CVB引起的面神经麻痹可能存在隐性感染或慢性感染,近期感染较既往感染效果较好,对可疑患者进行CVB特异性抗体检查,有助于早期快速诊断.
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病毒性心肌炎小鼠LPO与NK细胞活性观察
目的:探讨自然杀伤(NK)细胞活性及过氧化脂质(LPO)在病毒性心肌炎发病中的作用及其相关性.方法:采用125IduR释放法及MDA-TBA比色法,分别测定23只柯萨奇(Coxsackie)B3病毒接种BALB/c小鼠(模型组)和10只健康小鼠(对照组)脾脏的NK细胞活性及心脏组织中的LPO含量.结果:模型组小鼠的NK细胞活性明显低于对照组(P＜0.001),而LPO明显高于对照组(P＜0.005).两者呈显著负相关(P＜0.01).结论:心肌炎小鼠存在免疫功能紊乱及LPO异常,氧自由基损伤是导致NK细胞活性下降的可能原因之一.
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祛毒养心冲剂对病毒性心肌炎的疗效及机制
目的 探讨祛毒养心冲剂对病毒性心肌炎(VMC)的疗效及作用机制.方法 将60只小鼠随机分为正常对照组、病毒组、药物组,每组20只.后两组小鼠每只腹腔注射柯萨奇病毒(CVB3)液,正常对照组腹腔注射不含病毒的Eagle's液.药物组于接种病毒后24 h灌胃给予祛毒养心冲剂.21 d后,处死所有小鼠并取其心脏.进行心肌病理检查,采用实时荧光定量PCR法和免疫组化技术检测心肌组织中白细胞介素-6(IL-6)mRAN和蛋白的表达.结果 与病毒组相比,应用祛毒养心冲剂治疗后,小鼠心肌组织病变积分显著下降(P<0.05),心肌组织中IL-6的表达明显降低(P<0.05).结论 祛毒养心冲剂对VMC具有明显治疗作用,其作用机制是通过抑制IL-6在心脏中的表达而实现的.
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漏芦提取物对病毒性心肌炎心肌细胞的抗氧化作用观察
将心肌细胞分五组,病毒对照组及漏芦大、中、小剂量治疗组接种柯萨奇B3病毒制作病毒性心肌炎模型,分别加入正常或含5、2.5、1 mg生药/ml的漏芦提取物的生长液,正常对照组加等量正生长液.分别检测各组丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 病毒对照组较正常对照组MDA增高,而SOD活性降低;祁州漏芦治疗组明显降低被感染细胞内MDA含量,升高SOD活性,且呈剂量依赖性.认为漏芦提取物通过其抗氧化作用保护心肌.
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灵芝对小鼠病毒性心肌炎细胞凋亡的影响
目的探讨灵芝对病毒性心肌炎(VM)小鼠细胞凋亡及凋亡调控基因Fas、FasL表达的影响,观察灵芝对VM的治疗作用.方法建立VM动物模型:雄性Balb/c小鼠腹腔内接种0.5ml柯萨奇病毒B组(CVB3)病毒液,感染后d10处死.采用TUNEL法原位检测细胞凋亡;光镜、电镜观察其病理学改变及凋亡形态改变;免疫组织化学技术检测不同时期Fas、FasL蛋白表达水平.结果与正常小鼠比较,实验组鼠心肌病变积分、细胞凋亡数及Fas、FasL蛋白表达明显增加;与未治疗组比较,灵芝治疗后上述指标均下降.结论灵芝可通过下调Fas、FasL蛋白表达,抑制心肌细胞凋亡而保护心肌.
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心肌梗死患者与柯萨奇B组病毒感染关系的研究
心肌梗死与柯萨奇B组病毒(CoxBV)感染的关系,已引起国内外关注[1～3],为探讨CoxBV感染在心肌梗死患者发病中的意义,我们对急性心肌梗死(AMI)患者和正常人进行了调查,现将结果报告如下.
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黄芪对病毒性心肌炎心脏细胞因子mRNA表达的影响
目的:研究黄芪治疗病毒性心肌炎(VMC)对心脏组织白细胞介素2(IL-2)mRNA、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA及白细胞介素10(IL-10)mRNA表达的影响,探讨其治疗VMC的免疫调节作用机制.方法:60只小鼠随机分成4组,其中黄芪治疗组以黄芪口服液灌胃,0.2 ml/次,2次/d,共10 d.采用半定量RT-PCR方法检测所有存活小鼠心脏组织中细胞因子mRNA表达情况.结果:与病毒对照组比较,应用黄芪治疗后,VMC小鼠心脏组织中IL-2 mRNA与TNF-α mRNA表达下降(P＜0.05),而IL-10 mRNA表达则升高(P＜0.05).结论:黄芪通过改变细胞因子在心脏组织的表达而发挥其治疗VMC的有益的免疫调节作用.
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渗出性胸腔积液柯萨奇病毒B抗体的检测
目的:明确柯萨奇病毒所致胸膜感染的发病情况及其胸液特征.方法:应用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测131例良性渗出性胸腔积液患者血清和/或胸液中柯萨奇病毒B抗体.结果:131例良性渗出性胸腔积液患者,11例检测出柯萨奇病毒B抗体,其中有4例仅在胸液中检测出柯萨奇病毒B抗体(IgG阳性1例,IgM阳性3例),5例在血清中检测出柯萨奇病毒B抗体(IgG阳性4例,IgM阳性1例),2例在胸液及血清中均检测出柯萨奇病毒B IgM.与柯萨奇病毒B抗体阴性、诊断为结核性胸腔积液的患者胸液相比,柯萨奇病毒B抗体阳性的渗出性胸液患者的胸液并无显著性特征.结论:柯萨奇病毒B感染确实可致胸腔积液.由于胸液无显著性特征,病毒性胸腔积液极易和结核性胸腔积液相混淆.
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小儿扩张型心肌病与病毒性心肌炎的临床研究
目的探讨小儿扩张型心肌病(DCM)病因、DCM与病毒性心肌炎(VMC)关系以及两者之间的鉴别,提高对小儿DCM临床认识.方法该研究以DCM、VMC患儿各33例为研究对象,以33例健康儿为对照,应用酶联免疫吸附试验检测血清中柯萨奇病毒(CoxB)IgM抗体浓度和心肌酶浓度,彩色多普勒超声心动图观测心脏形态改变及心功能状况.结果①DCM组,CoxB IgM抗体阳性率33.3%;②与正常健康组比较,DCM抗CoxBIgM阴性组心肌酶谱各项指标差异无显著性(P＞0.05);DCM抗CoxB IgM阳性组和VMC组心肌酶谱各项指标均显著升高,差异有显著性(P＜0.01);③超声心动图示心脏房室腔扩大、心脏收缩与舒张功能降低,肺动脉平均压升高,DCM组均重于VMC组,差异有显著性(P＜0.01).结论①CoxB病毒感染与小儿VMC、DCM发病存在密切关系;②超声心动图对DCM诊断具有颇高的价值;③DCM与VMC的鉴别诊断须综合多项指标方能作出正确判断.
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苦瓜蛋白体外抗柯萨奇B3病毒感染
柯萨奇病毒B组(Coxsackievirus B group, CoxB)是病毒性心肌炎常见病原,目前尚无有效的治疗方法,近年来发现苦瓜核糖体失活蛋白(Ribosom e-inactivating protein, RIP)具有明显的抗病毒、抗肿瘤及调节免疫等多种生物活性[1],有很高的药用价值.笔者从苦瓜果肉中分离纯化苦瓜蛋白,并进行体外抗CoxB 3病毒感染作用的研究,旨在寻找高效抗CoxB3病毒感染作用的药物,现将结果报告如下.
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长沙地区成人不同人群柯萨奇B组病毒抗体水平研究
用免疫酶组化法对46例病毒性心肌炎、121例各型肝炎患者及108名合格献血者进行抗柯萨奇B组病毒(CVB)-IgM和抗CVB-IgG抗体检测,并以倍比稀释进行抗体滴度测定.结果显示:心肌炎组的抗体阳性率明显高于另二组(P<0.01);心肌炎组两种抗体的几何平均滴度亦明显高于另两组.提示长沙地区正常人群对CVB普遍易感,大多数病毒性心肌炎可能与CVB感染有关.
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老年心脏病患者血清柯萨奇病毒B特异性抗体和核酸的检测
目的了解柯萨奇B组病毒(CVB)在老年人中的感染状况,探讨CVB感染与心血管疾病的内在关系.方法采用间接酶联免疫吸附试验(EUSA)和反转录PCR方法对230例老年人进行了CVBIgG抗体和核酸检测.结果心脏病组CVBIgG抗体阳性率为43.61%(75/172),对照组抗体阳性率为15.52%(9/58),两者比较有显著性差异(P＜0.01).CVBRNA检测结果显示,心脏病组阳性率为20.93%(36/172),对照组为3.45%(25/58),两者比较有显著性差异(P＜0.01).结论在老年心脏病患者中CVB感染较为普遍,应引起重视.
关键词： 柯萨奇病毒B 间接酶联免疫吸附试验 反转录PCR 心脏病 老年人 -
CVB-IgM抗体测定在儿童病毒性心肌炎中的诊断意义
目的:探讨柯萨奇病毒B组特异性抗体(CVB-IgM)在儿童病毒性心肌炎中的诊断意义.方法:采用间接ELISA法测定62例病毒性心肌炎(其中心肌炎50例,疑似心肌炎12例)及30例非心肌炎患儿的柯萨奇B组病毒特异性IgM抗体.结果:CVB-IgM阳性者分别为:心肌炎组56%(28/50),疑似心肌炎组42%(5/12),非心肌炎组13%(4/30).心肌炎与非心肌炎组比较有非常显著差异(P＜0.01);心肌炎与疑似心肌炎组CVB-IgM阳性率分别与病程关系为:病程＜1个月、1～6个月及＞6个月IgM阳性率分别为65.9%、25%和16.7%,其中病程＜1个月、1～6个月及＞6个月的阳性率分别比较有显著性差异(P＜0.05).结论:对病毒性心肌炎患儿早期测定CVB-IgM以及远期的追踪均具有病原学上的指导意义.
