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花生、河虾中主要过敏原组分的研究
目的 鉴定并纯化花生、河虾中引起过敏原反应的主要蛋白组分.方法 花生、河虾蛋白浸液腹腔注射建立小鼠过敏模型,用硫酸铵分级沉淀、等电点沉淀纯化目的蛋白,建立间接ELISA检测抗血清中的特异性IgE水平.结果 SDS-PACE鉴定纯化后的花生蛋白中相对分子量63.5 kDa、60 kDa、37 kDa、17.5 kDa,虾蛋白中相对分子量36 kDa、85.kDa、52 kDa为主要过敏原组分.将纯化后的蛋白注射BALB/C小鼠腹腔,获得含特异性IgE的小鼠血清进行研究.棋盘试验表明花生蛋白抗原佳稀释度为1:300-1:600,抗血清稀释度为1:3 000-1:5 000,河虾蛋白抗原佳稀释度为1:200～1:500,抗血清稀释度为1:600～1:1 000.结论 成功获得花生、河虾中主要过敏原组分及其血清抗体,为过敏原的分析研究提供了一套比较完整的方法.
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不同免疫检验方法检测抗HIV结果的可靠性分析
目的 分析不同免疫检验方法 检测抗HIV结果的可靠性.方法 选择该院2015年1月—2018年1月确诊的82例HIV患者为研究对象,其中35例HIV抗体显示为阴性,47例HIV抗体显示阳性,分别应用ELISA法、金免疫层析试验进行检验,比较两组抗HIV检测结果.结果 ELISA法检验血清2 NCU/mL、 室间质量评价血清、 血清4 NCU/mL的阳性率分别为100.00％、100.00％、100.00％,高于金免疫层析试验(χ2=3.8926、3.8926、9.2528,P<0.05);ELISA法对抗HIV的特异度、敏感度、准确率分别为91.43％、97.87％、96.34％,明显优于金免疫层析试验(χ2=4.8251;3.8431;4.0937,P<0.05);ELISA法假阳性率为0.00％,明显低于金免疫层析试验(χ2=15.3067,P<0.05).结论 相比于金免疫层析试验法,检测抗HIV应用ELISA法检验的准确率更高,具有较高的敏感度与特异度,可靠性更强.
关键词： 抗HIV 金免疫层析试验 间接ELISA法 双抗原夹心ELISA法 可靠性 -
利用入境人员血清盘评价西尼罗病毒IgG抗体检测试剂盒
鉴于国内尚无明确的西尼罗病毒(West nile virus,WNV)感染病例报道,通过建立入境人员血清样品盘来评价自行研制西尼罗病毒IgG抗体的间接ELISA检测试剂盒.选择来自WNV感染区的入境人员血清286份,通过美国食品药物管理局(Food and drug administration,FDA)认证的FOCUS公司的West Nile Virus IgG Dxselect试剂盒以及Panbio公司的Dengue IgG Capture ELISA试剂盒筛选出评价用血清样品盘,平行比较评估自行研制的WNV IgG检测试剂盒结果,进一步对试剂盒的特异性,重复性和稳定性进行评价研究.结果显示,自行研制的试剂盒阳性检出率为35.6％,FOCUS West Nile Virus IgG Dxselect检测试剂盒则为32.5％,两者之间无统计学差异(x2 =3.05,P=0.078＞0.05),并具有良好的一致性(Kappa=0.837 2);其中两者的阳性检出符合率为91.18％,阴性符合率为95.34％,总符合率为92.66％.研制的间接ELISA方法诊断试剂盒具有良好的特异性,稳定性和敏感性,检测效果与境外权威认证的商品化试剂盒基本一致,为我国防控西尼罗病毒等外来传染病人境提供技术储备,也为尚未传人的传染病免疫试剂盒评价方法提供了参考依据.
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间接ELISA法测定猕猴血清中重组人源化抗EGFR单克隆抗体的含量
7%～11.93%.结论 该方法简便、准确、特异性强,精密度及准确度均符合药代动力学要求,可用于猕猴及人血清中抗 EGFR 单克隆抗体的检测.
关键词： 重组人源化抗EGFR单克隆抗体 间接ELISA法 猕猴血清 -
西尼罗病毒抗体间接ELISA检测方法的建立、验证及其应用
目的 建立及验证西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)抗体间接ELISA检测方法,并用于评价疫苗的免疫效果.方法 以纯化后的WNV E蛋白第三结构域(EDⅢ)蛋白作为包被抗原,建立WNV抗体间接ELISA检测方法,对抗原包被浓度(2.5、5、10、20、40、80 μg/ml)、血清稀释度(1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320)、抗原封闭时间(0.5、1、1.5、2h)、血清孵育时间(0.5、1、1.5、2h)、HRP标记的山羊抗马IgG稀释倍数(1∶5 000、1∶10 000、1∶20 000、1∶40 000、1∶80 000稀释)及其孵育时间(0.5、1、1.5、2h)进行优化,并验证该方法的特异性、敏感性及精密性.采用建立的方法检测WNV阴性马血清和病毒样颗粒(WNV-VLPs)疫苗免疫的马血清,与ALPHA公司试剂盒的检测结果进行比较.结果 间接ELISA法佳检测条件为:抗原包被浓度为20 μg/ml,4℃包被过夜;Blocking ACE封闭液于37 ℃封闭1.5h;加入血清(1∶80稀释),37℃孵育1.5h;加入HRP标记的山羊抗马IgG(1∶20 000稀释),37℃孵育1h.该方法可特异性检测WNV阳性血清中的WNVE-IgG抗体;阳性血清稀释至1∶2 560时,检测结果仍为阳性;批内和批间的变异系数(CV)均小于7％.25份WNV阴性马血清检测结果均为WNVE-IgG抗体阴性,经WNV-VLPs疫苗免疫的马血清中的WNVE-IgG抗体效价水平随免疫次数的增加呈递增趋势,间接ELISA法与ALPHA公司试剂盒的检测结果完全一致.结论 成功建立了WNV抗体间接ELISA检测方法,可用于疫苗免疫效果的评价,为开展WNV流行病学调查、诊断及新型疫苗的研发奠定了基础.
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E.coli L-天冬酰胺酶B细胞抗原表位氨基酸残基 Lys196对其抗原性的影响
目的:研究重组E.coli L-天冬酰胺酶B细胞抗原表位中关键氨基酸残基对其抗原性的影响.方法:以Ala为替代残基,对抗原表位192TPARKHTS199中Lys196进行PCR定点突变,双向免疫扩散法和间接ELISA法分析新型重组E.coli L-天冬酰胺酶的抗原性.结果:采用双向免疫扩散法和间接ELISA法检测,与重组E.coli L-天冬酰胺酶相比,新型重组E.coli L-天冬酰胺酶与重组E.coli L-天冬酰胺酶抗体结合率下降64%.结论:通过对重组E.coli L-天冬酰胺酶B细胞抗原表位关键残基的定点突变有效地降低了其抗原性.
关键词： 重组E.coli L-天冬酰胺酶 定点突变 抗原表位 间接ELISA法 -
联合检测血清抗日本血吸虫IgM和IgG4抗体意义的探讨
目的 探讨联合检测血清特异性IgM和IgG4对日本血吸虫病的诊断价值.方法 采用间接ELISA法检测急性血吸虫病、慢性血吸虫病及慢性血吸虫病患者治疗12月、24月后特异性IgM和IgG4的抗体变化.结果 急性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是100%、87.9%,慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是45.5%、68.2%,联合检测急性血吸虫病和慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是100%和75.8%,慢性血吸虫病患者治疗12月、24月后特异性IgG4阳性率分别是16%、5%.结论 并联检测特异性IgM和IgG4对急性血吸虫病早期诊断及慢性血吸虫病疗效考核具有较好的应用价值.
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兔抗霍乱弧菌O139血清群rMSHA多克隆抗体的制备和鉴定
目的 制备兔抗霍乱弧菌O139血清群rMSHA多克隆抗体.方法 用经Ni-NTA亲和层析法纯化的重组蛋白(rMSHA)免疫日本大耳兔,收集免疫兔血清.Western Blot检测重组蛋白的免疫原性;ELISA测定该抗体的效价.结果 兔抗rMSHA抗体能与重组蛋白发生特异性反应;间接ELISA法测定该抗体效价为1∶25 600.结论 成功地制备了兔抗rMSHA抗体,该抗体能够识别原核表达的重组蛋白rMSHA,为研制霍乱弧菌疫苗及相关诊断试剂盒奠定了基础.
关键词： 霍乱弧菌O139血清群 rMSHA 多克隆抗体 间接ELISA法 -
牛结核病鉴别诊断的方法研究
目的 构建含结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)tb10.4基因片断的原核表达载体,在E.coli中诱导表达带组氨酸标记的该融合蛋白.分别以TB10.4蛋白, PPD蛋白以及TB10.4与MPT83混合蛋白为抗原,用间接ELISA法鉴别牛结核病.方法 PCR法扩增tb10.4基因片段,连接到pET-22b(+)原核表达载体中,将重组子转化到大肠杆菌蛋白酶缺陷型菌株BL21(DE3)/PolysS,用IPTG诱导,进行蛋白表达、纯化.之后将TB10.4,PPD,TB10.4及MPT83混合蛋白作为抗原用间接ELISA法检测牛结核病.结果 使用结核杆菌早期分泌蛋白TB10.4作为抗原用间接ELISA方法快速检测牛结核病,并区分BCG免疫的健康牛和感染牛的结果显示灵敏度为23%,没有假阳性反应.结论 用PPD作为抗原进行检测灵敏度达到48%,但假阳性率达到21%;用TB10.4与MPT83混合抗原检测时灵敏度下降到6%,假阳性率1%.
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ELISA法检测抗-HGV 和 PCR法检测HGV RNA在不同人群中的应用
目的对比ELISA法检测抗-HGV和PTR法检测HGV PNA在不同人群中的检出情况.方法采用ELISA和RT-PCR技术对正常人群、职业献血员、HBsAg携带者、慢肝、肝硬化和原发性肝癌患者血清进行了抗-HGV和HGV RNA检测.结果抗-HGV阳性率分别为6.93%、16.00%、18.18%、24.47%、22.00%、40.00%、24.00%.用RT-PCR技术对抗-HGV阴性、可疑阳性、阳性血清分别检测HCVRNA,结果显示有较好的一致性.结论 ELISA法的特异性和敏感性还不高,适合用于一般筛查.RT-PCR方法适用于庚性肝炎筛查后的验证试验,以提高结果的特异性和敏感性.
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大鼠眼玻璃体内注射神经生长因子的药代动力学研究
目的研究大鼠眼玻璃体内注射神经生长因子(NGF)后的药代动力学特性.方法SD大鼠40只,随机分为10组,每组4只8眼,任选一组SD大鼠作为正常对照组不注射NGF,测正常玻璃体内的NGF质量浓度;其余各组SD大鼠均玻璃体内注射NGF 20 μg,分别于注药后5、15、30 min,1、2、4、8、12和24 h各处死一组大鼠,取出玻璃体样本,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)测出玻璃体内NGF质量浓度.结果正常大鼠玻璃体内NGF质量浓度为3.69 μg/L±3.75 μg/L.玻璃体内注射NGF后,在玻璃体内的消除半衰期(t1/2)为0.93 h(55.8 min),药-时曲线下面积(AUC0～t)为511.49 μg/(L*h).结论NGF在玻璃体内消除半衰期极短.
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新布尼亚病毒IgG抗体间接ELISA检测方法的建立
目的:建立基于间接ELISA法检测新布尼亚病毒IgG抗体的血清学检测方法.方法:应用基因工程原核表达的新布尼亚病毒核蛋白,初步建立用于新布尼亚病毒IgG抗体检测的间接ELISA法,用该方法对267例发热伴血小板减少综合征患者急性期和恢复期双份血清和198份标本进行检测,并与间接免疫荧光法的结果进行对比.结果:所建立的新布尼亚病毒IgG抗体间接ELISA检测方法重复性好,与其他病毒无交叉反应.与间接免疫法对267例发热伴血小板减少综合征病例的实验室诊断结果有较好的一致性(Kappa=0.69),健康人血清检测阳性率为5.56%.结论:建立的间接ELISA方法适用于新布尼亚病毒感染的实验室诊断及流行病学调查.
关键词： 新布尼亚病毒 发热伴血小板减少综合征 间接ELISA法 -
丙型肝炎病毒抗体的两种检测方法结果比较
目的 比较双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法与间接ELISA法检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)灵敏度和特异性,为无偿献血的血液筛查提供参考依据.方法 采用双抗原夹心ELISA法和间接ELISA法分别对1500份无偿献血者标本(经血液筛查抗-HCV阴性标本1416份,抗-HCV阳性标本84份)进行检测,记录标本结果与丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)的符合性,评价两种检测方法的差异.结果 双抗原夹心ELISA法检测84份抗-HCV阳性标本的灵敏度为97.6%(82/84),间接ELISA法的阳性检出率为85.7%(72/84),双抗原夹心ELISA法灵敏度高于间接ELISA法,差异有统计学意义(P<0.05);双抗原夹心ELISA法的特异性为100.0%(1416/1416),高于间接ELISA法的85.9%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 双抗原夹心法的灵敏度和特异性优于间接法,可降低间接ELISA法引起的假阳性,减少血液不必要浪费,同时也避免了献血者淘汰.
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评价铜绿假单胞菌结合疫苗免疫血清间接ELISA法的建立
目的 建立间接ELISA法用于评价铜绿假单胞菌多糖蛋白结合疫苗免疫血清效价.方法 对ELISA法的包被、封闭、加样、加酶条件进行系列研究.结果 采用PBS缓冲体系,选择0.25 μg/ml抗原作为包被浓度,经37℃振荡30min包被,用1％ BSA作为封闭剂,选用1∶8000稀释的酶标二抗,用进口的NUNC酶标板进行铜绿假单胞菌多糖蛋白结合疫苗免疫血清效价的检测,可获得较好的结果.结论 建立的间接ELISA法具有灵敏性高、重复性好的特点,可用于评价铜绿假单胞菌多糖蛋白结合疫苗免疫血清的效价.
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尖吻蝮蛇血凝酶抗体检测方法的建立及其应用
目的 建立尖吻蝮蛇血凝酶(商品名苏灵,代号Saculin)多克隆抗体检测的间接ELISA法,并应用于其临床免疫学检测.方法 免疫家兔获得多克隆抗体,Western blot鉴定其特异性,通过比较各种不同条件的检测结果来确立检测尖吻蝮蛇血凝酶多克隆抗体的间接ELISA法的佳工作条件,并以此为参考检测临床血清.结果 间接ELISA法测定兔抗血清效价高达1∶6 553 600,55例临床试验受试者(36例为Saculin实验组,19例为安慰剂组)给药3周后血清抗体检测结果均为阴性.结论 本研究建立的抗尖吻蝮蛇血凝酶多克隆抗体间接ELISA法能够用于临床血清的判定.
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利用酵母重组SSB抗原建立间接ELISA法检测抗SSB抗体的初步研究
目的:利用纯化的酵母重组SSB抗原建立间接ELISA法,用于检测抗SSB抗体.方法:将毕赤酵母菌重组表达的SSB抗原包被于聚苯乙烯微量反应板,与待检血清中抗SSB抗体反应后,经洗涤,再加入辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG与之结合,然后用TMB作用显色.结果:本法的敏感性和特异性分别为93.33%和100%,与欧蒙斑点酶免疫法检测结果之间的符合率为94.87%.结论:本法敏感性和特异性均较高,具有很好的临床诊断应用前景.
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消化系统肿瘤新标志抗survivin抗体的临床应用
目的:建立生存素(survivin)抗体的检测方法,并进行临床标本检测. 方法: 用镍离子亲和层析纯化的survivin融合蛋白包被酶标板,建立基于重组融合蛋白的抗survivin抗体检测方法,并对434份血清标本进行检测, 其中包括204例消化系统肿瘤, 186例癌前病变和44例正常对照. 结果: 在204例消化系统肿瘤中, 甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)的阳性率分别为14.2%和16.7%,抗survivin抗体阳性率为30.9%, 本方法的特异度为93.6%;在肠癌中CEA阳性率为11.1%(6/54), 抗survivin抗体阳性率为44.4%(24/54, P＜0.05);在胃癌中CEA阳性率为20%, 抗survivin抗体阳性率为33.3% (P＞0.05);在食管癌中, 抗survivin抗体阳性率高达40%, CEA阳性率仅为6.7% (P＜0.05). 在186例癌前病变中, 抗survivin抗体阳性率31.7%, AFP和CEA阳性率分别为10.8%和16.7%;在消化性溃疡患者中, 抗survivin抗体和CEA阳性率均为33.3%;在直肠息肉中抗survivin抗体阳性率33.3%,CEA的阳性率仅为5.6% (P＜0.05);在慢性结肠炎患者, 抗survivin抗体阳性率40%,CEA阳性率20% (P＜0.05). 结论: 建立的抗survivin抗体检测方法和对消化系统肿瘤抗survivin抗体检测的基础资料,可为抗survivin抗体作为消化系统肿瘤新标志分子研究奠定基础.
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间接ELISA法检测钩端螺旋体特异性IgM方法的探讨
为研制钩端螺旋体(钩体)特异性IgM检测试剂,并用于早期诊断钩体病,以钩体外膜蛋白为抗原,探索间接ELISA法检测钩体特异性IgM的各项实验条件,并对钩体病患者血清标本进行检测,结果,105份健康人血IgM阴性,钩体IgM阳性血清可被特异性阻断,2-巯基乙醇破坏试验阳性,试剂存放4℃和37℃4天的检测结果基本一致,检测临床钩体病人112份血清,IgM阳性83份,阳性率74.11%,与常规MAT法基本一致,0～7病日的阳性率明显高于MAT法.说明该法检测钩体病IgM具有特异、敏感、快速、稳定、简便等优点,对钩体病早期诊断有一定的价值.
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CVB-IgM抗体测定在儿童病毒性心肌炎中的诊断意义
目的:探讨柯萨奇病毒B组特异性抗体(CVB-IgM)在儿童病毒性心肌炎中的诊断意义.方法:采用间接ELISA法测定62例病毒性心肌炎(其中心肌炎50例,疑似心肌炎12例)及30例非心肌炎患儿的柯萨奇B组病毒特异性IgM抗体.结果:CVB-IgM阳性者分别为:心肌炎组56%(28/50),疑似心肌炎组42%(5/12),非心肌炎组13%(4/30).心肌炎与非心肌炎组比较有非常显著差异(P＜0.01);心肌炎与疑似心肌炎组CVB-IgM阳性率分别与病程关系为:病程＜1个月、1～6个月及＞6个月IgM阳性率分别为65.9%、25%和16.7%,其中病程＜1个月、1～6个月及＞6个月的阳性率分别比较有显著性差异(P＜0.05).结论:对病毒性心肌炎患儿早期测定CVB-IgM以及远期的追踪均具有病原学上的指导意义.
