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苦瓜蛋白抗肿瘤作用及其分子机制
目的 探讨苦瓜蛋白对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响和荷瘤小鼠血清基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的活性及变化以及细胞因子白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 将清洁级ICR雄性小鼠按体重随机分成5组,建立肝癌H22皮下移植瘤模型,分为模型组、苦瓜蛋白高、中、低剂量(100、50、25 mg/kg)组及环磷酰胺组(CTX,40 mg/kg),各组均ip给药,观察苦瓜蛋白对肿瘤生长的影响;分离血清,明胶酶谱法检测荷瘤小鼠血清基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的活性及其变化,ELISA检测细胞因子IL-6及TNF-α表达.结果 苦瓜蛋白组与模型组相比,肿瘤质量明显减轻(P<0.01),小鼠体重也较模型组小鼠轻(P<0.01);苦瓜蛋白(100、50、25 mg/kg)组及CTX组抑瘤率分别为85.81%、66.89%、52.05%、65.10%;各苦瓜蛋白组与模型组相比,MMP-2、MMP-9的活性降低,酶原表达下调(P<0.01);细胞因子IL-6及TNF-α表达明显下调(P<0.01),上述作用与苦瓜蛋白剂量相关.结论 苦瓜蛋白具有较强的体内抗肿瘤活性;其抗肿瘤作用可能与苦瓜蛋白抑制MMPs的活性及表达,以及调节IL-6及TNF-α等细胞因子的表达水平有关.
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苦瓜蛋白的药用价值
苦瓜为葫芦科苦瓜属植物,从中提取的蛋白质成分包括:蛋白酶抑制剂、核糖核酸酶、核糖体失活蛋白等,具有比较广泛的药理学作用.MAP30等可以通过使核糖体失活,抑制肿瘤细胞蛋白质的合成,抑制肿瘤细胞的生长;通过抑制T细胞的增长,抑制HIV病毒的复制,达到治疗艾滋病的目的.笔者着重对其抗肿瘤作用及抗艾滋病作用进行了综述,认为苦瓜蛋白成分的开发和应用给恶性肿瘤和艾滋病的治疗提供了新的思路,具有潜在的开发应用前景.
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苦瓜的药理作用
近年来,苦瓜及其提取物在多系统疾病中的治疗效果引起了广泛关注.综述了苦瓜及苦瓜蛋白在抗糖尿病、抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗生育、抗溃疡、调节免疫等方面的药理作用.
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苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡及其对Bcl-2、PCNA蛋白表达的影响
目的:观察苦瓜蛋白是否具有诱导K562细胞凋亡的生物学活性,探讨苦瓜蛋白对K562细胞Bcl-2及PCNA表达水平的影响及其作用的分子机制.方法:以一定浓度的苦瓜蛋白处理K562细胞12～72小时,CCK-8检测其对细胞生长的影响;流式细胞术(Annexin Ⅴ)、细胞形态学(光镜及电镜)等方法检测细胞凋亡;同时应用流式细胞术检测Bcl-2及PCNA蛋白表达的变化.结果:苦瓜蛋白对K562细胞生长具有明显的抑制作用;流式细胞术及形态学观察(光镜及电镜)证实一定作用浓度的苦瓜蛋白可诱导K562细胞发生明显的细胞凋亡,且随着作用时间的延长细胞凋亡率逐渐升高.苦瓜蛋白处理组K562细胞中Bcl-2及PCNA蛋白的表达分别为0.33%和98.36%,对照组分别为74.03%和97.63%.结论:苦瓜蛋白对K562细胞生长具有明显抑制作用,其作用主要通过诱导K562细胞产生细胞凋亡,而不是抑制细胞增殖.苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡过程中,Bcl-2蛋白表达的下调对调控细胞凋亡有重要作用.
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苦瓜药用有效成分的提取及诱导肺癌细胞凋亡的作用
目的：探讨苦瓜药物有效成分的提取及诱导肺癌细胞凋亡的作用。方法提取新鲜苦瓜蛋白，配置成不同浓度梯度溶液5、10、15、20、50μg ／ml（干预组），分别干预 A549细胞不同时间6、12、24、48、36 h，凋零组只加培养液、对照组（0μg ／ml）不干预，操作步骤与干预组均相同，四甲基偶氮唑盐比色法（MTT ）测定细胞抑制率，TUNEL 法测定细胞凋亡率，倒置显微镜下观察细胞凋亡形态。结果干预24、36、48 h 时，浓度为5～50μg ／ml。不同浓度梯度细胞 OD 值分别与相应的对照组相比，差异均具有统计学意义（ P＜0．05）；苦瓜蛋白与细胞抑制率间存在明显剂量－反应关系（r ＝0．453，P＜0．05）；选择细胞抑制率在50％以下的浓度梯度分别为0、5、10、15、20μg ／ml，对 A549细胞干预24 h，细胞凋亡率分别为（2．69±0．35）％、（12．30±0．28）％、（42．23±2．31）％、（31．67±1．25）％、（35．25±2．41）％，其中苦瓜蛋白在10μg ／ml 时细胞凋亡率高。结论苦瓜蛋白对于肺癌细胞具有明显的抑制作用，并且促进细胞凋亡率。
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苦瓜蛋白在K562/A02细胞生长抑制和凋亡中的作用及其机制研究
目的:研究苦瓜蛋白(momordin)诱导人慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/A02的凋亡及作用机制.方法:采用CCK-8法检测细胞生长抑制率,FCM法和细胞形态学检测细胞凋亡,FCM法检测P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)、p53、bcl-2和caspase-3蛋白表达水平,并运用caspase-8活性检测试剂盒检测caspase-8的活性.结果:苦瓜蛋白能抑制K562/A02耐药细胞的生长且呈剂量依赖关系,并能诱导细胞凋亡,能使P-gp、p53和bcl-2的表达下降,而使caspase-3和caspase-8活性增强.结论:苦瓜蛋白可逆转耐药细胞株K562/A02的细胞凋亡受抑性,主要机制可能与其下调p53、P-gp和bcl-2的表达以及提高caspase活性有关.
关键词： 白血病 苦瓜蛋白 多药耐药相关蛋白质类 细胞凋亡 K562/A02细胞 -
苦瓜蛋白诱导A549肺癌细胞凋亡及对相关蛋白的影响
[目的]观察苦瓜蛋白对A549非小细胞肺癌细胞凋亡的影响,探讨苦瓜蛋白对PI3K/AKT细胞信号传导通路中相关蛋白分子的作用影响.[方法]以梯度浓度苦瓜蛋白处理A549细胞48h,流式细胞术(TUNEL方法)检测A549细胞凋亡;10μg/ml苦瓜蛋白处理A549细胞,分别作用不同时间(0h、6h、12h、24h、48h、72h)后,提取细胞总蛋白,Western blot检测AKT信号通路中AKT及p-AKT等信号分子表达的变化.[结果]苦瓜蛋白可以明显诱导A549细胞凋亡,以10μg/ml苦瓜蛋白处理组A549细胞凋亡率高(50.15%).苦瓜蛋白处理A549细胞12h后,p-AKT及AKT表达明显下调,呈现时间-效应依赖关系.[结论]苦瓜蛋白可以诱导A549细胞发生显著凋亡,其机制可能是部分通过抑制AKT蛋白的表达及其磷酸化.抑制AKT信号传导通路,导致肿瘤细胞凋亡.
关键词： 苦瓜蛋白 癌 非小细胞肺 细胞凋亡 PI3K/Akt通路 -
苦瓜蛋白抑制肿瘤基质金属蛋白酶的活性及表达
[目的]探讨苦瓜蛋白对H22荷瘤小鼠基质金属蛋白酶表达及其活性的影响.[方法]将清洁级ICR雄性小鼠随机分成5组,建立肝癌H22移植瘤模型,分为阴性对照组、高剂量组(T3)、中剂量组(T2)、低剂量组(T1)及阳性对照组(CTX,环磷酰胺处理组).在普通饲料饲喂的基础上采用腹腔注射给药法分别予阴性对照组生理盐水;高、中、低剂量组分别给以不同剂量苦瓜蛋白;阳性对照组予环磷酰胺.观察苦瓜蛋白对抑瘤率的影响,明胶酶谱法检测荷瘤小鼠血清基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的活性及其变化.[结果]苦瓜蛋白组低、中、高剂量组及阳性对照组抑瘤率分别为52.05%、66.89%、85.81%及65.10%;各苦瓜蛋白干预组与阴性对照组相比,MMP-2、MMP-9的活性降低,酶原表达下调(P＜0.01),上述作用与苦瓜蛋白剂量相关.[结论]苦瓜蛋白具有抑制基质金属蛋白酶表达及其活性的作用,其抗肿瘤作用可能与苦瓜蛋白具有抑制MMPs的活性及其表达有关.
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苦瓜蛋白诱导K562/A02细胞凋亡
目的:观察苦瓜蛋白对K562/A02细胞凋亡受抑逆转作用及其分子机制.方法:CCK-8法测定苦瓜蛋白对耐药细胞K562/A02的IC50值,细胞形态学和AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡,流式细胞法测定P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达及caspase-3和 caspase-8活性.结果:苦瓜蛋白显著抑制K562/A02耐药细胞的增殖;经苦瓜蛋白处理后细胞形态上出现典型的凋亡改变,AnnexinV/PI双染法显示凋亡细胞明显增加;P-gp蛋白表达下降,caspase-3和caspase -8活性显著增强.结论:苦瓜蛋白能诱导K562/A02耐药细胞凋亡,逆转耐药白血病细胞P -gp高表达所介导的细胞凋亡抑制.
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苦瓜蛋白对H22细胞增殖抑制作用的实验研究
苦瓜(momordica charantia L)为葫芦科苦瓜属植物,因其潜在的药用价值引起国内外学者的关注.迄今为止,人们已成功地从苦瓜中提取了数种蛋白质,其中MAP30(Momordica anti-HIV protein of 30 kD)为1990年Lee等[1]从苦瓜的种子及果实中纯化得到的碱性蛋白.
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苦瓜蛋白对K562/A02耐药逆转作用的研究
[目的]观察苦瓜蛋白对K562/A02细胞多药耐药的逆转及时P-gP表达、功能的影响.[方法]采用CCK-8法测IC50,用流式细胞仪测定苦瓜蛋白对K562/A02细胞上P-gp表达及细胞内ADM潴留的影响.[结果]苦瓜蛋白能提高K562/A02对多种化疗药物敏感性,使P-gp蛋白表达下降,提高细胞内ADM的浓度.[结论]苦瓜蛋白能部分逆转K562/A02的耐药性,逆转机制与下调P-gp蛋白的表达有关.
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苦瓜蛋白逆转K562/AO2细胞多药耐药性的研究
目的:研究非细胞毒性质量浓度苦瓜蛋白对耐阿霉素的人红白血病细胞株K562/AO2多药耐药性的逆转作用和促凋亡作用.方法:采用CCK-8法测定苦瓜蛋白的细胞毒性及其对K562/AO2细胞敏感性的影响,用流式细胞仪检测K562/AO2细胞经不同药物处理后细胞的凋亡情况.结果:苦瓜蛋白对K562/AO2细胞有一定的细胞毒作用,其非细胞毒性质量浓度为5μg/mL,非细胞毒性质量浓度苦瓜蛋白对K562/AO2细胞对阿霉素、长春新碱(VCR)和柔红霉素的耐药性都有部分逆转作用(分别为5.4、6.5和4.0倍);5μg/mL苦瓜蛋白联合VCR诱导K562/AO2细胞凋亡,凋亡率为(19.38±1.06)%,而对照组为(1.64±0.27)%,单一苦瓜蛋白组为(3.79±0.82)%,单一VCR组为(9.83±0.98)%.结论:苦瓜蛋白能部分逆转人红白血病K562/AO2细胞对阿霉素、VCR和柔红霉素的耐药,一定剂量的苦瓜蛋白与VCR联合应用可增加肿瘤细胞凋亡率.
关键词： 苦瓜蛋白 K562/AO2细胞 多药耐药 -
苦瓜蛋白对A549肺癌细胞的抑制作用及其对MAPK信号通路的影响
目的:观察苦瓜蛋白对非小细胞肺癌A549细胞的生长抑制及促凋亡作用;探讨苦瓜蛋白对A549细胞p42/44-MAPK及其磷酸化p42/44-MAPK蛋白表达水平的影响及其作用分子机制.方法:以不同浓度梯度的苦瓜蛋白处理A549细胞,分别作用不同时间,CCK-8检测其对细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡.提取苦瓜蛋白不同作用时间点的全细胞蛋白,western blot检测p42/44-MAPK及p-p42/44-MAPK信号分子的变化.结果:苦瓜蛋白对A549细胞生长具有明显抑制作用,可显著地诱导A549细胞凋亡.与阴性对照比较,苦瓜蛋白可以不同程度下调p42/-MAPK及p-p42/44-MAPK信号分子的表达(P<0.05).结论:苦瓜蛋白对非小细胞肺癌A549细胞具有明显地抑制作用及抗肿瘤作用,其作用可能通过诱导A549细胞凋亡来实现;苦瓜蛋白可以不同程度地下调p42/44-MAPK和磷酸化p42/44-MAPK的表达;MAPK信号通路可能部分参与了苦瓜蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制,驱使肿瘤细胞发生凋亡.
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粘附分子CD54、CD44在苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡中的作用
目的:观察苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡时细胞粘附分子(CD54、CD44)表达水平的变化,探讨粘附分子在苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡中的作用.方法:以一定浓度的苦瓜蛋白处理K562细胞;CCK-8试剂盒检测其对细胞生长的影响;流式细细术(Annexin Ⅴ)、透射电镜等方法检测细胞凋亡;同时应用流式细细术检测粘附分子(CD54、CD44)蛋白表达水平的变化.结果:苦瓜蛋白对K562细胞生长具有明显的抑制作用;流式细胞术及形态学观察(电镜)证实一定作用浓度的苦瓜蛋白可诱导K562细胞发生明显的细胞凋亡;苦瓜蛋白处理组K562细胞中CD54、CD44表达分别为 18.62%和 1.32%,对照组分别为0.25%和 0.17%,分别上调了 18.37%、1.15%.结论:苦瓜蛋白引起K562细胞凋亡的过程中,粘附分子CD54表达上调;CD54表达上调可能是苦瓜蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的机制之一,其机制可能涉及细胞粘附依赖性细胞凋亡.
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苦瓜蛋白提取工艺的研究
目的 优选苦瓜蛋白提取工艺.方法 考察乙醇浓度、温度、加氯化钠的量三因素对结果 的影响,用L9(34)正交表优选提取工艺.结果 影响苦瓜蛋白结晶得率的主要因素依次是加入氯化钠的倍数,温度及乙醇浓度,曩佳工艺为A3B1G3.结论 确定佳工艺为:在19℃下,用95%的乙醇,加0.05倍氯化钠所得的结晶得率高.
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苦瓜蛋白通过FXR/miR-23b-3p/HNF4α途径抑制载脂蛋白(a)表达
目的 研究苦瓜蛋白(MD28)对HepG2细胞载脂蛋白(a)[Apo(a)]表达的影响,探索其作用机制.方法 离心、超滤、透析、阳离子交换色谱、反相高效液相色谱等方法提取苦瓜蛋白;MTT法检测苦瓜蛋白处理HepG2细胞后细胞存活率;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot分别检测Apo(a)、法尼酯X受体(FXR)、肝细胞核因子4α (HNF40α)的mRNA和蛋白表达水平;qRT-PCR检测hsa-miR-23b-3p的表达水平,采用小于扰RNA转染沉默FXR.结果 与对照组相比,0.1、0.2、0.4、0.8及1.6 g/L苦瓜蛋白处理HepG2细胞24 h,细胞存活率无统计学差异;与对照组相比,苦瓜蛋白呈剂量和时间依赖性抑制Apo(a)表达,以1.6 g/L苦瓜蛋白作用48 h的效果为显著;苦瓜蛋白上调FXR和hsa-miR-23b-3p表达水平,下调HNF4α表达水平,沉默FXR则逆转苦瓜蛋白的上述作用,沉默hsa-miR-23b-3p能逆转苦瓜蛋白对HNF4αα的下调作用,但对FXR的表达无影响.结论 苦瓜蛋白通过FXR/miR-23b-3p/HNF4α途径抑制HepG2细胞Apo (a)的表达,有望成为临床降低脂蛋白(a)的候选药物.
关键词： 载脂蛋白(a) 法尼酯X受体 肝细胞核因子4α 苦瓜蛋白 miR-23b-3p -
苦瓜蛋白通过阻止核因子κB核转位抑制炎性因子生成
目的 研究苦瓜蛋白对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠炎症因子核因子κB(NF-κB)蛋白核转位的影响,探讨苦瓜蛋白抗炎的分子机制.方法 40只6周龄雄性ApoE-/-小鼠,随机分为普食组、高脂高胆固醇组、高脂高胆固醇苦瓜蛋白组、普食苦瓜蛋白组.12周后眼球采血,ELISA测定血浆中炎性因子NF-κB、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6和γ干扰素(IFN-γ)及抗炎因子IL-10的水平,免疫组织化学检测主动脉壁IκB表达,RT-PCR和Western blot检测NF-κB和IκB表达.结果 ApoE-/-小鼠经高脂高胆固醇饲料喂养12周后,血液中炎症因子NF-κB、IL-1β、TNF-α、IL-6、IFN-γ水平均显著高于普食组(P＜0.01,n=5),但抗炎因子IL-10仍维持较高水平.经苦瓜蛋白干预后,血清中炎症因子水平下降,而抗炎因子IL-10水平并不上升.RT-PCR以及Western blot检测结果表明,苦瓜蛋白显著降低高脂高胆固醇饲料喂养小鼠动脉血管壁细胞核内NF-κB蛋白水平,阻止其核转位.与普食组比较,高脂高胆固醇组IκB被显著降解(0.19±0.05比0.74 +0.15,P＜0.05,n=5),但其经苦瓜蛋白干预后,这种降解作用得到显著的抑制(0.19±0.05比0.36±0.07,P＜0.01,n=5).结论 苦瓜蛋白通过减少IκB降解抑制NF-κB蛋白核转位而发挥抑制炎性因子生成的作用.
关键词： 苦瓜蛋白 载脂蛋白E基因敲除小鼠 炎性因子 核因子κB IκB -
苦瓜蛋白对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化形成及小肠胆固醇转运相关基因表达的影响
目的 探讨苦瓜蛋白对载脂蛋白E基因敲除小鼠小肠胆固醇转运相关基因表达的影响,阐明苦瓜蛋白在动脉粥样硬化发生中的作用机制.方法 选用36只6周龄的雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠,随机分为普食组(对照组)、高脂高胆固醇饲料组(高脂组)、高脂高胆固醇+苦瓜蛋白组(苦瓜蛋白组).喂养12周后处死,比较各组血脂水平,苏丹Ⅳ染色观察全主动脉粥样硬化病变程度,主动脉窦冰冻切片油红O染色检测脂质沉积,逆转录聚合酶链反应和Western Blot分别检测ATP结合盒转运体G5和G8的mRNA和蛋白表达.结果 高脂组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇的水平比对照组明显升高(P＜0.05),而苦瓜蛋白组总胆固醇(14.52±1.06 mmol/L比18.21±1.95 mmol/L)、甘油三酯(0.51±0.11 mmol/L比0.92±0.07 mmol/L)和低密度脂蛋白胆固醇(4.12 mmol/L±0.95比7.16±0.98 mmol/L)水平显著低于高脂组(P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇的水平与高脂组比差异无显著性(P＞0.05).苦瓜蛋白组主动脉斑块面积(31.2%±3.6%比69.6%±4.8%)和主动脉窦脂质面积(26.02±3.07 μ m2/比45.23±11.2 μm2)比高脂组显著减少.苦瓜蛋白组小肠中ATP结合盒转运体G5和G8的mRNA和蛋白表达都比高脂组明显升高(P＜0.05).结论 苦瓜蛋白可通过增加载脂蛋白E基因敲除小鼠小肠中ATP结合盒转运体G5和G8的表达,降低血脂水平,减少主动脉斑块及主动脉窦脂质沉积.
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苦瓜蛋白对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞的形成及三磷酸腺苷结合盒转运体A1的影响
为研究苦瓜蛋白对泡沫细胞形成的作用及其机制,用离心、超滤和色谱技术从苦瓜(Momordica charantia L)果肉中提取苦瓜蛋白(Momordicin),THP-1细胞经160 nmol/L PMA孵育24 h,诱导其分化成巨噬细胞,然后用25 mg/L乙酰化低密度脂蛋白孵育48 h,使其泡沫化,以观察苦瓜蛋白对泡沫细胞形成的影响.用高效液相色谱法分析细胞内胆固醇和胆固醇酯的变化,用逆转录-聚合酶链反应技术检测苦瓜蛋白对三磷酸腺苷结合盒转运体A1的影响.结果发现,经苦瓜蛋白作用后,细胞内总胆固醇及胆固醇酯均显著减少(对照组总胆固醇为634±21,苦瓜蛋白处理组为257±26, P<0.01; 对照组胆固醇酯为339±21, 苦瓜蛋白处理组为93±9, P<0.01).胆固醇酯与总胆固醇比值从对照组的62.9%下降到36.2%.同时,细胞内三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达显著上调(P<0.05).提示苦瓜蛋白抑制THP-1单核巨噬细胞源性泡沫细胞的形成可能与上调三磷酸腺苷结合盒转运体A1有关.
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苦瓜蛋白对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠半胱天冬酶3活性及凋亡的抑制作用
为研究苦瓜蛋白对凋亡的关键酶半胱天冬酶3及凋亡的调节作用,用已经建立起来的方法从苦瓜果肉中提取苦瓜蛋白.将BALB/C小鼠分为4组:病毒对照组、正常对照组、药物对照组和药物治疗组,分别在第0天、第3天、第7天和第14天各处死5只小鼠,第21天全部处死动物,心肌组织半胱天冬酶3活性测定按照CALBIOCHEM公司的试剂说明书进行,并稍加改正,凋亡鉴定按照Oncogene公司的TdT-DNA裂解片断末端原位标记试剂说明书进行.结果发现,①病毒对照组第7天开始出现半胱天冬酶3活性(0.63±0.21 pmol/min,n=5),第14天的活性(10.9±1.5 pmol/min,n=5)显著高于第7天,第21天的活性(12.6±1.3 pmol/min,n=5)又高于第14天.②药物治疗组,只有一个第21天的标本有半胱天冬酶3活性(0.41 pmol/min),其它两组均未检测到此酶的活性.③DNA裂解片断末端原位标记法发现,病毒对照组在第7天心肌中有少数细胞凋亡,第14天、第21天凋亡细胞明显增多,在非病变区域可发现单个凋亡的心肌细胞.治疗组未发现凋亡细胞,其它两组也未发现凋亡细胞.结果提示,CVB3病毒性心肌炎中发现有明显的凋亡现象,凋亡和半胱天冬酶3发现于第7天,且随着时间增加而逐渐加重(增强);苦瓜蛋白可显著抑制半胱天冬酶3和凋亡.
