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苦瓜蛋白对BALB/C小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎核因子κB的调节作用
为探讨苦瓜蛋白对BALB/C小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎的治疗作用机制,以核因子κB为对象,来观察苦瓜蛋白的调节作用.从苦瓜果肉中提取苦瓜蛋白后,将动物分为5组:病毒对照组、正常对照组、药物对照组、高剂量治疗组、低剂量治疗组,分别在实验的第0 d、3 d、7 d、14 d和第21 d处死动物,提取核蛋白,在用BCA方法进行蛋白定量后作凝胶滞留分析(EMSA),测定核因子κB的活性,并进行比较分析.结果发现,①病毒对照组在第21天时仍然有一定量的核因子κB活化,且其活化程度明显高于正常对照组;②高、低剂量的苦瓜蛋白对核因子κB表现出不同程度的抑制作用,其中高剂量组核因子κB几乎看不到活化,低剂量组比病毒对照组核因子κB活化程度明显降低;③正常对照组和药物对照组核因子κB只有低水平活化.结果提示,苦瓜蛋白对病毒性心肌炎的治疗作用可能与其降低核因子κB的活性有关.
关键词： 苦瓜蛋白 心肌炎 病毒性 核因子κB 心血管疾病模型/小鼠 -
苦瓜蛋白通过下调miR-23b-3p促进三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达
目的 前期工作发现苦瓜蛋白(MD28)可上调THP-1源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达而减少胞内的脂质蓄积,但其机制不清楚.文章拟从转录后水平分析其作用机制.方法 首先用miRNA芯片技术分析经MD28干预后,50 mg/L ox-LDL处理48 h的THP-1源性泡沫细胞miRNA谱中下调1.5倍的microRNA (miRNA),并与Genecards调控ABCA1基因表达的miRNA比较,找到二者共同miRNA,然后以荧光素酶报告基因系统验证其靶基因关系.qRT-PCR检测ABCA1 mRNA和miR-23b-3p的表达水平,Western blot检测蛋白表达水平,油红O染色测定胞内脂质蓄积.结果 miR-23b-3p是miRNA芯片和Genecards的交集,靶基因验证实验证实ABCA1是miR-23b-3p的靶基因.MD28剂量(0 g/L、0.4 g/L、1.2 g/L、3.6 g/L、5 g/L)和时间(0h、6h、12h、24 h、48 h)依赖性地上调ABCA1 mRNA及蛋白的表达水平,以1.2 g/L作用12 h为显著.ox-LDL上调miR-23b-3p表达且被MD28抑制,MD28能减少胞内脂质蓄积,miR-23b-3p的抑制剂可拮抗MD28对ABCA1表达和胞内脂质蓄积的作用.结论 MD28通过下调miR-23b-3p介导其促进THP-1源性泡沫细胞ABCA1表达、减少胞内脂质蓄积作用.
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苦瓜蛋白体外抗柯萨奇B3病毒感染
柯萨奇病毒B组(Coxsackievirus B group, CoxB)是病毒性心肌炎常见病原,目前尚无有效的治疗方法,近年来发现苦瓜核糖体失活蛋白(Ribosom e-inactivating protein, RIP)具有明显的抗病毒、抗肿瘤及调节免疫等多种生物活性[1],有很高的药用价值.笔者从苦瓜果肉中分离纯化苦瓜蛋白,并进行体外抗CoxB 3病毒感染作用的研究,旨在寻找高效抗CoxB3病毒感染作用的药物,现将结果报告如下.
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苦瓜蛋白的分离纯化及其体外抗CoxB3型病毒作用的研究
目的探讨苦瓜蛋白的分离纯化方法,研究其体外抗病毒作用,为开发这一新型抗病毒药物打下前期工作基础.方法离心、超滤、阳离子交换色谱、反相高效液相色谱等分离纯化方法,体外抗病毒实验方法.结果得到了色谱纯的抗3型科萨奇病毒的苦瓜蛋白,其抗病毒作用有明显的剂量-效应关系,在浓度为215 μg/mL时具有大的抗病毒作用,与对照组相比,苦瓜蛋白对CoxB3感染的HepG2的保护作用十分明显.结论体外抗病毒实验表明一定范围内的苦瓜蛋白对CoxB3感染的HepG2有明显的保护作用.
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苦瓜蛋白对柯萨奇3型病毒感染大鼠心肌细胞的保护作用
目的 在病毒性心肌炎心肌细胞模型上观察苦瓜蛋白对柯萨奇3型病毒(CVB3)感染SD大鼠心肌细胞的保护作用及其机制. 方法 体外原代培养SD大鼠心肌细胞,以CVB3感染培养大鼠心肌细胞,复制病毒性心肌炎心肌细胞模型,分别测定心肌细胞搏动百分比(PBC)、半数有效率(ED)、细胞病变(CPE)、心肌酶谱、半感染致死量(TCID50),分析其对心肌细胞的保护作用. 结果 苦瓜蛋白的ED值为0.045 mg/mL,80、40、20、10 μg/mL苦瓜蛋白可显著提高心肌细胞PBC、降低病毒的复制,80、40 μg/mL苦瓜蛋白可减少CPE,降低心肌酶水平. 结论 苦瓜蛋白对感染CVB3的心肌细胞有较强的保护作用.
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苦瓜蛋白通过肝X受体α上调三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达
目的 观察苦瓜蛋白对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)及肝X受体α(LXRα)表达的变化和细胞内胆固醇流出的影响,探讨苦瓜蛋白抗动脉粥样硬化的机制.方法 加入50 mg/L的ox-LDL共同孵育细胞24h,诱导THP-1单核巨噬细胞成泡沫细胞.分别加入0、0.5、1.5、4.5 mg/ml苦瓜蛋白或4.5 mg/ml苦瓜蛋白处理THP-1细胞0、3、6、12、24h,以检测其浓度效用和时间效用.MTT法检测苦瓜蛋白的细胞毒性,液体闪烁计数法测胆固醇流出.实时荧光定量PCR和Western blot分别检测ABCA1、LXRα的mRNA和蛋白水平,设计合成LXRα-siRNA序列,并转染THP-1细胞,Western blot法评估沉默效果.结果 苦瓜蛋白浓度低于4.5 mg/ml对THP-1细胞无毒性,并浓度和时间依赖性地促进胆固醇流出和上调ABCA1及LXRα表达水平,以4.5 mg/ml苦瓜蛋白作用效果强;使用LXRα-siRNA沉默LXRα后,ABCA1的mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P＜0.05),胆固醇流出显著减少.结论 苦瓜蛋白可通过LXRα途径上调ABCA1的表达促使THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出.
关键词： 动脉粥样硬化 泡沫细胞 苦瓜蛋白 肝X受体α 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 -
苦瓜蛋白抑制THP-1源性巨噬细胞泡沫化与下调ACAT1的表达有关
目的 研究苦瓜蛋白对THP-1源性泡沫细胞的影响,阐明是否与影响脂酰CoA-胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)的表达有关.方法 MTT法检测苦瓜蛋白(0、1、2、3、4、5 mg/ml)的细胞毒性,以50 μg/ml oxLDL处理THP-1源性巨噬细胞48 h,建立THP-1源性泡沫细胞模型,以0、0.5、1.5、4.5 mg/ml苦瓜蛋白分别作用24 h.油红0染色检测细胞内脂质,高效液相色谱检测胆固醇和胆固醇酯.Western blot检测ACAT1的表达.结果 MTT实验结果显示,低于5 mg/ml的苦瓜蛋白对THP-1细胞的存活率没有明显影响.油红0染色可见,随着苦瓜蛋白浓度增加,泡沫细胞内脂滴逐渐减少.高效液相色谱分析发现,1.5 mg/ml苦瓜蛋白处理组的总胆固醇的峰面积显著低于泡沫细胞模型组(P＜0.05);游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)都显著低于泡沫细胞模型组(P＜0.05),泡沫细胞模型组的CE含量高于FC(P＜0.05),苦瓜蛋白处理组的CE值明显低于FC值(P＜0.05).Western blot结果显示泡沫细胞模型组的ACAT1蛋白表达显著上调(P＜0.05),苦瓜蛋白处理组中的ACAT1蛋白表达水平显著低于泡沫细胞组(P＜0.05),但仍高于对照组(P＜0.05).结论 苦瓜蛋白能浓度依赖性地减少THP-1源性泡沫细胞内脂质含量,其与下调ACAT1的表达有关.
关键词： 苦瓜蛋白 泡沫细胞 氧化低密度脂蛋白 脂酰CoA-胆固醇酰基转移酶 -
苦瓜蛋白诱发胃癌细胞SGC7901凋亡的研究
目的:探讨苦瓜蛋白对胃癌细胞SGC7901增长的抑制并诱发其凋亡.方法:从新鲜的苦瓜种子中分离纯化的苦瓜蛋白,通过MTT比色法分析其对SGC1901细胞以及正常人二倍体细胞2BS增殖的影响,并应用光镜、电镜观察及流式细胞术等手段,研究苦瓜蛋白诱发胃癌细胞SGC7901的形态学、DNA含量变化.结果:苦瓜蛋白对胃癌细胞SGC7901的IC50约为18ug/ml,在相同剂量下对2BS细胞的抑制率仅为8%;与对照组细胞相比,加药后的SGC7901细胞发生典型的凋亡形态学改变及DNA含量变化.结论:苦瓜蛋白对胃癌细胞SGC7901的增长具有明显的抑制作用,并能诱发其凋亡.
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苦瓜蛋白诱发胃癌细胞SGC7901凋亡的研究
目的:探讨苦瓜蛋白抗肿瘤活性的机制.方法:从新鲜的苦瓜种子中分离纯化苦瓜蛋白,通过MTT比色法分析其对SGC7901细胞以及正常人二倍体细胞2BS增殖的影响,并应用光镜、电镜观察及流式细胞术等手段,研究苦瓜蛋白诱发胃癌细胞SGC7901的形态学、DNA含量变化.结果:苦瓜蛋白对胃癌细胞SGC7901的IC50约为18μg/ml,在相同剂量下对2BS细胞的抑制率仅为8%;与对照组细胞相比,加药后的SGC7901细胞发生典型的凋亡形态学改变及DNA含量变化.结论:苦瓜蛋白对胃癌细胞SGC7901的增长具有明显的抑制作用,并能诱发其凋亡.
