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人肝细胞核因子4基因 Ⅱ 型启动子的双向转录调控的特性
目的 探讨人肝细胞核因子4α基因Ⅱ型启动子(hHNF4α-P2)双向调控基因表达的作用.方法 克隆hHNF4α-P2–23~–1291(1268 bp)序列;构建由该段正、反序列驱动的荧光蛋白真核表达载体;将其通过细胞转染和显微注射导入细胞或斑马鱼体内,考察其表达的时空特性.通过DNA缺失实验和序列预测分析寻找hHNF4α-P2的正、反向核心启动序列.结果 hHNF4α-P2的正向和反向DNA序列(–23~–1291)均可驱动其下游报告基因在人正常肝细胞L02及肝癌细胞Huh7中表达;在斑马鱼体内正向启动子驱动的红色荧光蛋白基因可在耳石、嗅泡和神经丘等感觉器官中高表达,在肝区可见较弱的红色荧光.反向启动子驱动的绿色荧光蛋白基因可在血细胞、神经细胞、体节及脊索等组织表达.该启动子正链存在一段核心序列,反链存在两段核心序列.结论 首次发现hHNF4α-P2的 –23~–1291序列具有双向调控基因在不同组织表达的功能.
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过表达肝细胞核因子4 alpha对人骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化的作用
目的 应用转基因技术将肝细胞核因子4 alpha(HNF-4α)转导入人骨髓间充质干细胞(MSCs)内,使其连续过表达HNF-4α并促进MSCs向肝样细胞分化.方法 HNF-4α基因通过慢病毒表达载体pLV/Final-puro-hHNF4α-hrGFP转入人MSCs(UE7T-13细胞)内,用流式细胞分析法检测及分选后,收集hrGFP阳性的UE7T-13细胞进行扩增.体外成肝诱导一周后,免疫荧光染色检测过表达HNF-4α基因的UE7T-13细胞(E7-hHNF-4α细胞)的白蛋白(ALB)和细胞角蛋白(CK18)的表达情况,糖原染色检测UE7T-13细胞及E7-hHNF-4α细胞的糖原储存功能.结果 建立稳定、过表达hH-NF-4α基因的E7-hHNF-4α细胞,持续过表达HNF-4α促进MSCs向肝样细胞分化,经过7天体外成肝诱导,E7-hHNF-4α细胞具有成熟肝样细胞表达ALB和CK18蛋白及糖原储存功能.结论 利用Gateway技术可将HNF-4α高效转导入人MSCs细胞中,并有效促进MSCs向肝样细胞分化.
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小檗碱对高果糖饲养诱导胰岛素抵抗大鼠肝组织HNF-4α表达的影响
目的: 探讨小檗碱对高果糖饲养诱导胰岛素抵抗大鼠肝细胞核因子(hepatocyte nuclear factor-4α, HNF-4α)表达的影响以及其改善胰岛素抵抗的分子机制.方法:高果糖饲料喂养SD大鼠6 wk, 建立胰岛素抵抗模型; 大鼠分为4组: 正常对照组(普通饮食)、普通饮食+小檗碱处理组、高果糖饮食组及高果糖饮食+小檗碱组; 小檗碱按187.5 mg/(kg·d)灌服4 wk; 测定血糖、血清胰岛素、胰岛素抵抗指数及甘油三酯的变化; 用RT-PCR法及免疫印迹法观察肝脏HNF-4α基因及蛋白的表达.结果: 高果糖饮食组胰岛素、胰岛素抵抗指数HOMA及甘油三酯水平较正常对照组均明显升高(均P<0.01), 而高果糖饮食+小檗碱组与高果糖饮食组比较上述指标明显下降(51.62±5.68 vs 64.91±7.87, P<0.01; 12.40±1.76 vs16.06±3.32, P<0.01; 11.16±1.58 vs 14.46±2.99, P<0.05), 小檗碱可促使肝脏表达下降的HNF-4α恢复.结论:小檗碱可改善胰岛素抵抗, 其机制可能与促进HNF-4α的表达有关.
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肝细胞核因子4α和3β在人主要器官中的表达
目的:观察肝细胞核因子4α(Hepatocyte Nuclear Factor 4α,HNF-4α)和HNF-3β在人主要组织器官中的表达情况,为进一步探索这两个因子与慢性乙型肝炎患者HBV复制之间的可能关系提供理论基础.方法:采用免疫组织化学染色方法检测HNF-4α和HNF-3β在14例尸解标本的主要器官(肝、脑、肺、肾、心、脾、肠、胰腺、胃和甲状腺)中的表达情况.结果:HNF-4α和HNF-3β在10个器官的表达情况不同(HNF-4α:F=22.479,P＜0.01;HNF-3β:F=13.021,P＜0.01).HNF-4α在肝、肾、心、脾和肠中呈高水平表达,在肺和甲状腺呈低水平表达;HNF-3β在肝、肾、心和胰腺中呈高水平表达,在脾、肺、肠和甲状腺中呈低水平表达;HNF-4α和HNF-3β在脑、胃、阑尾、胸腺、肾上腺和扁桃体中均不表达;上述HNF-4α和HNF-3β高表达组和低表达组的表达水平差异有统计学意义(P＜0.05),而高表达组各器官之间的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论:人体各组织中HNF-4α与HNF-3β的表达水平不同,在肝脏的表达水平较高,这提示二者有可能参与了HBV的组织特异性复制.
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肝细胞核因子4α及1α与糖尿病的关系
肝细胞核因子(HNF)是一类异质的保守转录因子,参与调节肝脏内糖代谢、脂代谢相关基因的表达.HNF在胰岛中也有表达,其家族成员在β细胞胰岛素基因的转录活化、维持胰岛β细胞正常功能及调节糖代谢等方面都起重要的作用.
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过表达肝细胞核因子4α脐带间充质干细胞促进小鼠大部肝切后肝再生
目的：探讨人源性脐带间充质干细胞（UC-MSC）以及过表达肝细胞核因子4α（HNF4α）的UC-MSC能否促进小鼠大部肝切后肝再生。方法体外分离、培养、鉴定人UC-MSC，慢病毒转染过表达HNF4α。体外收集细胞培养上清液，将L02与上清液共培养，通过细胞增殖实验试剂盒（CCK8）检测细胞增殖活性。体内实验建立肝大部切除模型（约70%），分别经尾静脉向肝切除小鼠移植0.9%生理盐水（NS）、MSC、MSC-HNF4α。48h后比较3组肝切后肝再生的变化，通过免疫组化来观察肝标本Ki67的表达。结果成功分离鉴定UC-MSC，并且成功建立稳定过表达HNF4α的MSC。体外实验MSC组和MSC-HNF4α组中L02的增殖能力都明显高于NS组（P＜0.01），MSC组高于MSC-HNF4α组（P＜0.05）。同样体内实验相对于NS组，经MSC或MSC-HNF4α细胞处理的肝脏，其Ki67的表达明显高于NS组（ P＜0.01），同样MSC组高于MSC-HNF4α组（P＜0.05）。结论 UC-MSC和过表达HNF4α的MSC都分泌一系列因子促进肝再生。
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中国青少年的成人起病型糖尿病1型一例家系研究
目的探讨中国青少年的成人起病型糖尿病1型（MODY 1）患者的临床特点和分子遗传学特征。方法对北京协和医院于2015年8月诊断的1例MODY患者家系的临床特征、实验室资料进行分析，运用Sanger测序技术对先证者及相关家系成员进行肝细胞核因子（HNF）1α基因、HNF4α基因、葡萄糖激酶（GCK）基因测序。结果在该家系的2名家系成员（先证者及其母亲）中检测到HNF4α基因（NM_000457.4）第8号外显子c.992G>A（p.R331H）杂合突变。对基因诊断明确为MODY 1型的先证者进行小剂量磺脲类药物替代胰岛素转换治疗，患者血糖控制更加平稳。结论中国人群中存在HNF4α基因突变导致的MODY 1型家系。MODY可能与2型糖尿病混合存在于同一家系内，容易被误诊，需要引起重视。
关键词： 青少年的成人起病型糖尿病 肝细胞核因子4α 基因突变 磺脲类药物 -
佐米曲坦诱导雄性大鼠肝CYP3A2的作用机制
作者前期研究发现佐米曲坦(ZOL)对雄性大鼠肝中CYP3A2具有诱导作用,而对雌性大鼠没有诱导作用.阐明其机制对于研究ZOL的药物相互作用和个体化用药具有积极意义.由于生长激素(GH)与一些蛋白的性别差异性表达密切相关,因此,本研究探究了ZOL对大鼠GH分泌的影响,以及其对脑垂体化学损伤大鼠模型肝中CYP3A2的诱导作用.结果发现,ZOL可以抑制正常大鼠体内血浆GH水平.与正常组大鼠的诱导结果不同,ZOL抑制了损伤组雄性大鼠肝中CYP3A2的表达.另外,ZOL对于雌雄原代肝细胞中的CYP3A 1/2无明显诱导作用.进一步研究发现,给予ZOL后正常雄性大鼠肝中肝细胞核因子4α(HNF4α)的入核水平明显增加,而正常雌性大鼠、脑垂体化学损伤大鼠和大鼠原代肝细胞中HNF4α的入核水平无明显变化.结果表明,GH和HNF4α在ZOL性别差异性诱导CYP3A2的过程中发挥了重要的作用.
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肝细胞核因子4α:肝脏疾病研究与治疗的新方向
肝脏是人体内大的实质性器官,是人体的“化工厂”.肝脏组织60％～ 80％由肝细胞组成,肝细胞通过特异性地表达一系列功能与分化相关基因,为肝脏发挥重要的生物学功能提供保障.肝细胞核因子4α(HNF4α)是细胞核受体超家族成员,在分化成熟的肝细胞中高表达,能与成熟肝脏中12％的基因的启动子结合,对促进正常的肝细胞分化和维护正常的肝细胞生物学功能发挥着重要的调控作用.近年来,人们开始研究HNF4α与各种肝脏疾病间的关系,并且取得了一定的研究成果,为肝脏疾病的进一步研究和临床治疗提供了新的思路.
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肝细胞核因子4α与肝细胞癌关系的研究进展
肝细胞核因子4α(HNF4α)是调节肝脏内特异性基因表达的转录因子,在肝细胞发育分化,肝脏脂质、胆固醇代谢及肝脏药物代谢中起重要作用,并且抑制肝脏肿瘤的发生.HNF4α主要通过抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞分化、凋亡,逆转肝细胞上皮-间质转化等过程,影响肝细胞癌(HCC)的发生发展.本文对HNF4α的来源分布、结构特点、生物学功能及其在HCC发生发展中的作用进行了系统综述,旨在探索HNF4α干预HCC的新思路.
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丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏组织中TNF-α和HNF-4α表达的影响
目的:通过观察丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏组织中肿瘤坏死因子α (TNF-α)和肝细胞核因子4α(HNF-4α)表达的影响,探讨丝胶治疗糖尿病的可能机制.方法:36只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组和丝胶治疗组,每组12只.链脲佐菌素(STZ)连续腹腔注射法制作2型糖尿病大鼠模型.待模型成功建立后,模型组大鼠不做任何处理,丝胶治疗组大鼠给予丝胶(2.4g· kg-1·d-1)灌胃35d.采用免疫组织化学SP法染色、蛋白免疫印迹法和RT-PCR法检测大鼠肝脏组织中TNF-α和HNF-4α的表达.结果:TNF-α蛋白免疫产物为棕黄色和棕褐色颗粒状,位于肝细胞的细胞浆;HNF-4α免疫阳性产物为棕褐色,位于肝细胞的细胞核.与正常对照组比较,糖尿病模型组大鼠肝脏组织中TNF-α、HNF-4α蛋白和mRNA的表达水平明显升高(P＜0.01);与糖尿病模型组比较,丝胶治疗组大鼠肝脏TNF-α、HNF-4α蛋白和mRNA的表达水平明显降低(P＜0.01).结论:丝胶可能通过下调肝脏组织中TNF-α和HNF-4α的表达保护糖尿病时肝脏损伤.
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结直肠癌组织中HNF4α的细胞内定位及临床意义
目的 检测肝细胞核因子4α(HNF4α)在结直肠癌组织中的细胞内定位及其表达情况,探讨HNF4α定位及其表达与结直肠癌临床各病理因素的关系.方法 应用免疫组化方法检测132例结直肠癌组织标本及其癌旁正常组织中HNF4α的细胞内定位及其表达情况.结果 结直肠癌组织中HNF4α蛋白分子的表达定位于细胞浆或细胞核；结直肠癌组织细胞浆HNF4α的阳性率(76.5％)显著高于癌旁正常组织(3.8％,P＜0.05)；结直肠癌组织细胞核HNF4α的阳性率(12.9％)显著低于癌旁正常组织(64.4％,P＜0.05)；HNF4α在结直肠癌组织细胞浆中的表达与组织分化程度及Dukes分期有关(P=0.02、P=0.03),与性别、年龄、肿瘤位置、有无淋巴结转移等临床病理特征无明显相关性(P均＞0.05).结论 结直肠癌组织中HNF4α在细胞浆中高表达或在细胞核中低表达,HNF4α的细胞内定位异常可为结直肠癌的诊断及预后判断提供客观依据.
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肝细胞核因子4α抑制人肝癌细胞株血管内皮生长因子表达和人脐静脉内皮细胞小管形成
背景:肝细胞核因子4α(HNF4α)在肝脏的发育过程中发挥重要作用.研究证实HNF4α与肝细胞癌(HCC)的发生相关.然而HNF4α对人肝癌细胞株血管内皮生长因子(VEGF)表达和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)小管形成的调控作用尚不明确.目的:探讨HNF4α对人肝癌细胞株VEGF表达和HUVEC小管形成的影响.方法:构建过表达HNF4α的慢病毒,并转染人肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721(实验组),以转染慢病毒空载体和未转染的细胞分别作为阴性对照组和空白对照组.分别以qRT-PCR、蛋白质印迹法检测HNF4α、VEGF mRNA和蛋白表达.将HUVEC与HepG2和SMMC-7721细胞不含血清的条件培养基共培养,检测小管形成数量.结果:成功构建了过表达HNF4α的HepG2和SMMC-7721稳转株.与阴性对照组和空白对照组相比,实验组HepG2和SMMC-7721细胞中VEGF mRNA和蛋白表达均明显降低(P＜0.05),HUVEC小管形成数量明显减少(P＜0.05).结论:HNF4α能明显抑制人肝癌细胞株中VEGF表达以及HUVEC小管的形成.
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肝细胞核因子4α在胆汁酸诱导的胃黏膜肠上皮化生中的作用及其机制
目的 探讨肝细胞核因子4α (HNF4α)在鹅脱氧胆酸(CDCA)诱导的胃黏膜肠上皮化生中的作用与机制.方法 以不同浓度的CDCA刺激人永生化胃黏膜上皮细胞GES-1后,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测GES-1和人胃癌细胞系(AGS、SGC7901、BGC823)中HNF4α、尾侧同源盒转录因子2(CDX2)和三叶肽因子家族3(TFF3)的mRNA和蛋白质表达变化.用HNF4α短发夹RNA和对照短发夹RNA分别转染GES-1后,以CDCA刺激,采用蛋白质印迹法检测HNF4α、CDX2和TFF3的蛋白质表达.采用慢病毒感染的方法,分别在GES-1和SGC7901中过表达HNF4α,在BGC823和AGS中静默HNF4α,以实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测HNF4α、CDX2、TFF3的mRNA和蛋白质表达.采用荧光素酶报告基因实验分析HNF4α对CDX2的调控作用.统计学分析采用t检验.结果 GES-1、SGC7901、BGC823和AGS的HNF4α mRNA水平分别为1.00±0.12、263.01±10.23、848.01±18.13和3 049.86±91.75;其中AGS、BGC823和SGC7901的HNF4α mRNA水平均高于GES-1,差异均有统计学意义(t=33.23、46.72、25.62,P均＜0.01);AGS、BGC823、SGC7901和GES-1的HNF4α蛋白质表达与mRNA表达一致.转染HNF4α短发夹RNA组的CDX2和TFF3蛋白质表达低于未转染HNF4α短发夹RNA组.在GES-1细胞中,过表达HNF4α组HNF4α、CDX2和TFF3的mRNA水平分别为16 281.839±1 843.017、6.275±0.137和17.310±1.533,分别高于过表达对照组的1.000士0.048、1.000±0.012和1.000±0.108,差异均有统计学意义(t=8.83、38.29、10.61,P均＜0.01);在AGS细胞中,静默HNF4α组HNF4α、CDX2和TFF3的mRNA水平分别为0.021±0.001、0.088±0.007和0.074±0.002,分别低于静默对照组的1.000±0.108、1.000±0.131和1.000±0.122,差异均有统计学意义(t=9.09、6.93、7.57,P均＜0.01);在GES-1过表达细胞和AGS静默细胞中,HNF4α、CDX2、TFF3的蛋白质表达与mRNA表达一致.在克隆有CDX2-1(-2 000～-1 bp)和CDX2-2(-1 510～1 bp)启动子的双报告质粒中,小干扰HNF4α后的活性分别为0.387±0.013和0.533±0.040,分别低于小干扰对照组的0.605±0.012和0.882±0.019,差异均有统计学意义(t=21.49、13.53,P均＜0.01).结论 HNF4α可能是通过上调CDX2的表达参与胆汁酸介导的胃黏膜肠上皮化生的发生.
关键词： 肝细胞核因子4 肝细胞核因子4α 肠上皮化生 尾型同源盒转录因子-2 -
PEP-1介导的重组肝细胞核因子4α蛋白转导对肝癌细胞的抑制作用
目的 利用细胞穿膜肽PEP-1介导重组肝细胞核因子4α(HNF4α)蛋白进入肝癌细胞,并明确外源融合蛋白P-HNF4α对肝癌细胞的作用.方法 构建表达质粒pET28a-P-HNF4α,优化原核表达体系的诱导条件,经大量表达、亲和层析纯化及浓缩、透析后获得纯度较高的带有细胞穿膜肽PEP-1的融合蛋白P-HNF4α;P-HNF4α转导人肝癌细胞,蛋白质印迹法检测其穿膜效率,核质分离和细胞免疫荧光检测P-HNF4α的亚细胞定位,Real-time PCR检测肝癌细胞基因表达,CCK-8法检测肝癌细胞增殖,细胞划痕实验及小室侵袭实验检测P-HNF4α对肝癌细胞转移能力的影响.结果 细胞穿膜肽PEP-1成功介导融合蛋白P-HNF4α进入Huh7细胞并定位于细胞核;P-HNF4α蛋白可促进Huh7细胞肝功能基因表达,抑制干细胞相关基因表达(P＜0.05或0.01),并显著抑制肝癌细胞增殖(P＜0.05)、迁移(P＜0.001)和侵袭(P＜0.05)能力.结论 P-HNF4α可诱导肝癌细胞向成熟肝细胞分化,降低肝癌细胞的恶性程度,是诱导分化治疗肝癌的潜在手段.
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基于报告基因系统的肝细胞核因子4仅活性检测体系的建立
目的 建立一个基于荧光素酶报告基因系统的肝细胞核因子4α(HNF4α)活性检测系统,筛选可调控HNF4α活性的小分子化合物.方法 采用亲和层析法纯化HNF4α蛋白,行蛋白热迁移实验检测相关DNA片段及小分子化合物与HNF4α蛋白的直接相互作用.分别构建含有3个拷贝和9个拷贝的Ninjurin 1(NINJ1)基因启动子区HNF4α反应元件的荧光素酶报告基因质粒pGL3-NINJ1-3p和pGL3-NINJ1-9p,转染肝癌细胞,采用荧光素酶报告基因法检测肝癌细胞内HNF4α转录活性的改变,qPCR检测小分子化合物木犀草素或阿尔维林处理后肝癌细胞中HNF4α及下游基因的表达情况,荧光素酶报告基因法检测小分子化合物处理后细胞内HNF4α转录活性的改变.结果 蛋白热迁移实验证实,NINJ1基因启动子区HNF4α的DNA结合片段可与HNF4α蛋白结合.在过表达HNF4α的肝癌细胞中,pGL3-NINJ1-3p和pGL3-NINJ1-9p均可检测到肝癌细胞中HNF4α活性的改变,且pGL3-NINJ1-9p较pGL3-NINJ1-3p的检测灵敏度更高(P＜0.01).木犀草素和阿尔维林与HNF4α蛋白存在直接相互作用,分别下调和上调HNF4α靶基因;pGL3-NINJ1-9p可检测到木犀草素和阿尔维林对HNF4α转录活性的影响.结论 利用报告基因载体pGL3-NINJ1-9p成功建立了HNF4α活性的检测系统,为筛选调控HNF4α活性的小分子化合物等提供了基础工具.
关键词： 肝细胞核因子4α Ninjurin 1 报告基因系统 小分子化合物 -
肝细胞核因子4α抑制大鼠肝癌细胞增殖、侵袭能力和新生血管生成相关基因表达
目的:研究肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)在体内、体外实验中与大鼠肝癌新生血管生成相关基因表达之间的相互关系.方法:将过表达HNF4α腺病毒转染CBRH-7919细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖效应,Transwell法检测细胞侵袭能力,RT-PCR和Western blot检测血管生成素2(angiopoietin-2,Ang-2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial grouth factor,VEGF)的表达情况.体内试验建立肝大部切除模型(70％),分别在残肝上注入CBRH-7919细胞(空白组)或转染空载体腺病毒CBRH-7919细胞(阴性对照组)或转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞(实验组).4周后处死大鼠,通过免疫组化来观察肝标本Ang-2、VEGF的表达情况.结果:转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞增殖能力和侵袭能力较空白、阴性对照组均明显抑制(P＜0.05);实验组Ang-2、VEGF在基因、蛋白水平表达较空白、阴性对照组均明显抑制(P＜0.05).体内实验大鼠肝脏组织免疫组织化学切片显示实验组Ang-2、VEGF蛋白表达水平较空白、阴性对照组均明显抑制(P＜0.05).结论:HNF4a可以抑制大鼠肝癌7919的增殖、侵袭能力,并且抑制肝癌新生血管生成相关基因Ang-2、VEGF的表达.
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人HNF4α基因真核表达载体的构建与鉴定
目的 体外构建人肝细胞核因子4α(HNF4α)基因真核表达载体,并初步鉴定其在HepG2细胞的表达.方法 从肝癌手术患者获得肝组织,分离得到肝组织总RNA,将其逆转录合成cDNA,经特异性引物扩增HNF4α基因片段,将其定向连接到pcDNA3.1(+)真核表达载体,经抗生素筛选后,酶切及测序鉴定其序列正确.提取质粒,转染HepG2细胞,48 h后裂解细胞,应用抗HNF4 α行Western blot检测目的蛋白.结果 从临床肝癌患者肝组织中成功分离得到总RNA,扩增出HNF4α基因,经筛选、酶切鉴定和测序,确认pcDNA3.1-4α真核表达载体构建成功.在转染HepG2细胞48 h后,检测显示53 kDa位置有明显融合蛋白条带.结论 我们成功构建了HNF4 α基因真核表达载体,体外转染HepG2细胞成功表达HNF4α蛋白,为后续研究奠定了基础.
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肝癌组织HNF4αmRNA定量检测方法的建立与初步应用
目的 建立一种定量检测肝细胞癌(HCC)组织肝细胞核因子4α(HNF4α)mRNA的方法.方法 取手术获得的HCC组织16例,提取总RNA,逆转录PCR扩增获得全长HNF4αmRNA对应cDNA产物,经TA克隆后,测序确认.根据获得序列,设计检测HNF4αmRNA引物及MGB荧光探针.以体外转录HNF4αmRNA为标准品,建立一步法逆转录荧光定量PCR检测方法,同时设定β-actin mRNA为内参对照,终计算得到组织HNF4αmRNA水平.采用免疫组化染色检测HNF4α蛋白表达,比较HNF4αmRNA水平与HNF4α蛋白表达的对应结果.结果 HCC组织HNF4αmRNA定量标准曲线斜率为-3.237,相关系数r值达0.994,β-actin mRNA定量标准曲线斜率为-3.037,相关系数r值为0.996,表明建立的方法可用于检测HNF4αmRNA定量(V-4α值),16例HCC组织HNF4αmRNA与HNF4α 蛋白表达结果呈一致性对应关系.结论 我们初步成功建立了定量检测HCC组织HNF4αmRNA水平方法,其意义还需要进一步研究.
关键词： 肝细胞癌 肝细胞核因子4α 逆转录荧光定量PCR法 -
HBV相关肝癌组织HBsAg和HNF4α表达及其与组织学分化的关系
目的：探讨在乙型肝炎病毒(HBV)相关肝细胞癌（HCC）患者癌组织中HBsAg和肝细胞核因子4α（HNF4α）表达及其与组织学分化的关系。方法回顾性分析2008年11月～2013年3月首都医科大学附属北京佑安医院经术后病理学检查证实为HCC组织256例。采用免疫组化法检测HBsAg、HNF4α和磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（GPC-3）表达。结果在256例HCC癌组织中，发现HBsAg阳性12例（4.7%）；在39例高分化、119例中分化和98例低分化肿瘤组织中，HBsAg阳性率分别为20.5%、1.7%和2.0%，前组显著高于后两组（P<0.05）；HNF4α阳性百分比在高分化癌患者中为65.6%（21/32），显著高于中、低分化癌患者18.8%（3/16，P<0.001）；在12例HBsAg阳性癌组织中，HNF4α阳性11例（91.7%），而在选择的36例HBsAg阴性癌组织中，HNF4α阳性13例（36.1%， P<0.05）；在4例HBsAg阳性中分化和低分化HCC组织中，免疫组化显示GPC-3呈补丁样分布。结论 HBsAg在HBV相关HCC患者肿瘤细胞中的低表达可能与肿瘤细胞低表达HNF4α有关。
