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肝细胞核因子4α在肝脏疾病发生发展中的作用
肝细胞核因子(HNF) 4α属于细胞核受体超家族成员,在分化成熟的肝细胞中高表达.HNF4α在转录水平上调控肝脏特异基因的表达,促进肝细胞的发育和分化,参与肝细胞极性的建立和维持,增强肝脏的合成、代谢以及解毒功能.HNF4α可通过抑制肝星状细胞的活化、逆转上皮间质细胞转化、抑制肝癌细胞增殖、侵袭和转移等机制,参与肝纤维化、肝硬化、肝细胞癌等疾病的发生和变化过程.阐述了HNF4α的生物学功能,对其参与多种主要肝脏疾病信号通路机制的研究进展进行了分析总结,旨在为进一步发掘这一潜在的肝脏疾病靶向治疗途径提供参考.
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脱氧核糖核酸甲基化对肝细胞核因子4α表达的影响
目的 探讨DNA甲基化对肝细胞核因子4α(HNF4α)表达的影响,及其在转化生长因子-β1 (TGF-β1)调节HNF4α表达过程中所起的作用.方法 用实时RT-PCR方法检测6种人肝癌细胞株(HepG2、Huh-7、Hep3B、SMMC-7721、BEL-7405、FOCUS)、20份人肝癌和相应癌旁组织中HNF4αP1 mRNA的表达.用亚硫酸盐测序法(BSP法)检测6种人肝癌细胞株中HNF4αP1启动子区甲基化程度.用5-脱氧杂氮胞苷(5-AZA-CdR)处理FOCUS细胞株,用BSP法检测HNF4αP1启动子区甲基化程度,用实时RT-PCR法检测HNF4αP1 mRNA的表达.用TGF-β1处理6种人肝癌细胞株,用实时RT-PCR法检测HNF4αP1 mRNA的表达.分别用5-AZA-CdR、TGF-β1、5-AZA-CdR联合TGF-β1处理FOCUS细胞株,用实时RT-PCR法检测HNF4αP1 mRNA的表达.采用f检验进行统计学分析.结果 在20份人肝癌和癌旁组织中,13份肝癌组织的HNF4αP1 mRNA相对表达量低于癌旁组织(f=2.350,P＜0.05).HepG2、Huh-7、Hep3B中的HNF4αP1 mRNA相对表达量较高,SMMC-7721、BEL-7405、FOCUS中则相对较低.HepG2、Huh-7、Hep3B中HNF4αP1启动子区甲基化程度较低,SMMC-7721、BEL-7405、FOCUS中则较高.随着5-AZA-CdR浓度上升(分别为0、0.1、1.0、2.5 μmol/L),FOCUS的HNF4αP1启动子甲基化程度逐渐降低(分别为61％、46％、32％、27％),而HNF4αP1 mRNA相对表达量则逐渐增加(分别为[(9.661±0.336)×10-7、(2.001±0.432)×10-6、(3.689±0.714)×10-6、(4.732±2.451)×10-6].经TGF-β1刺激后,启动子区甲基化程度较低的HepG2、Huh-7、Hep3B的HNF4αP1 mRNA相对表达量下调(t=12.994、8.441、9.032,P均＜0.01),启动子区甲基化程度较高的SMMC-7721、BEL-7405、FOCUS的HNF4αP1 mRNA相对表达量变化差异均无统计学意义(P均＞0.05).经5-AZA-CdR处理的FOCUS细胞株的HNF4αP1 mRNA相对表达量[(4.972±0.035)×10-6]高于空白对照组[(1.411±0.104)×10-6],差异有统计学意义(t=13.212,P＜0.01).经5-AZA-CdR联合TGF-β1处理的FOCUS细胞株的HNF4αP1 mRNA相对表达量[(1.181±0.132)×10-6]低于单用5-AZA-CdR处理组[(4.972±0.035)×10-6],差异有统计学意义(t=13.873,P＜0.01).结论 肝癌组织中HNF4αP1表达水平下调.DNA甲基化可调控HNF4αP1在人肝癌细胞株中的表达.HNF4αP1启动子区甲基化可抑制TGF-β1对HNF4αP1表达的调节作用.
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肝细胞核因子4α在胆汁酸诱导的胃黏膜肠上皮化生中的作用及其机制
目的 探讨肝细胞核因子4α (HNF4α)在鹅脱氧胆酸(CDCA)诱导的胃黏膜肠上皮化生中的作用与机制.方法 以不同浓度的CDCA刺激人永生化胃黏膜上皮细胞GES-1后,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测GES-1和人胃癌细胞系(AGS、SGC7901、BGC823)中HNF4α、尾侧同源盒转录因子2(CDX2)和三叶肽因子家族3(TFF3)的mRNA和蛋白质表达变化.用HNF4α短发夹RNA和对照短发夹RNA分别转染GES-1后,以CDCA刺激,采用蛋白质印迹法检测HNF4α、CDX2和TFF3的蛋白质表达.采用慢病毒感染的方法,分别在GES-1和SGC7901中过表达HNF4α,在BGC823和AGS中静默HNF4α,以实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测HNF4α、CDX2、TFF3的mRNA和蛋白质表达.采用荧光素酶报告基因实验分析HNF4α对CDX2的调控作用.统计学分析采用t检验.结果 GES-1、SGC7901、BGC823和AGS的HNF4α mRNA水平分别为1.00±0.12、263.01±10.23、848.01±18.13和3 049.86±91.75;其中AGS、BGC823和SGC7901的HNF4α mRNA水平均高于GES-1,差异均有统计学意义(t=33.23、46.72、25.62,P均＜0.01);AGS、BGC823、SGC7901和GES-1的HNF4α蛋白质表达与mRNA表达一致.转染HNF4α短发夹RNA组的CDX2和TFF3蛋白质表达低于未转染HNF4α短发夹RNA组.在GES-1细胞中,过表达HNF4α组HNF4α、CDX2和TFF3的mRNA水平分别为16 281.839±1 843.017、6.275±0.137和17.310±1.533,分别高于过表达对照组的1.000士0.048、1.000±0.012和1.000±0.108,差异均有统计学意义(t=8.83、38.29、10.61,P均＜0.01);在AGS细胞中,静默HNF4α组HNF4α、CDX2和TFF3的mRNA水平分别为0.021±0.001、0.088±0.007和0.074±0.002,分别低于静默对照组的1.000±0.108、1.000±0.131和1.000±0.122,差异均有统计学意义(t=9.09、6.93、7.57,P均＜0.01);在GES-1过表达细胞和AGS静默细胞中,HNF4α、CDX2、TFF3的蛋白质表达与mRNA表达一致.在克隆有CDX2-1(-2 000～-1 bp)和CDX2-2(-1 510～1 bp)启动子的双报告质粒中,小干扰HNF4α后的活性分别为0.387±0.013和0.533±0.040,分别低于小干扰对照组的0.605±0.012和0.882±0.019,差异均有统计学意义(t=21.49、13.53,P均＜0.01).结论 HNF4α可能是通过上调CDX2的表达参与胆汁酸介导的胃黏膜肠上皮化生的发生.
关键词： 肝细胞核因子4 肝细胞核因子4α 肠上皮化生 尾型同源盒转录因子-2 -
Cx32及HNF4α在肝癌组织中的表达及意义
目的 检测Cx32和HNF4α在肝细胞肝癌组织中的表达变化. 方法 用免疫组织化学方法检测83例HCC、26例癌旁组织和5例正常肝组织中Cx32和HNF4α的表达情况. 结果 Cx32及HNF4α在HCC、癌旁组织及正常肝组织中阳性率分别为27.71％、73.07％、80.00％;49.39％、76.92％、80.00％.正常肝组织与肝癌旁组织差异无统计学意义(P＞0.05),正常肝组织及癌旁组织与HCC差异有统计学意义(P＜0.05).Cx32和HNF4α在HCC中的表达与病理分级相关(P均＜0.05);Cx32及HNF4α表达均与预后差相关;Cx32与HNF4α在肝癌组织中的表达正相关. 结论 Cx32与HNF4α可能参与了肝癌的发生、发展;Cx32与HNF4α表达密切相关.
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肝细胞核因子4在肝细胞分化和成熟中的作用
肝细胞核因子4在肝脏发育及肝细胞的分化、成熟过程中有着重要的调控作用,通过与肝特异基因启动子结合而影响肝特异基因的表达,促进肝细胞极化结构的形成,调节肝细胞的物质代谢和生物转化,并且能够抑制肝脏肿瘤的发生.
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肝细胞核因子4在肝癌细胞干细胞特性及上皮-间充质转化中的作用
目的 观察肝细胞核因子4(HNF4)在肝癌细胞SMMC7721中对干细胞特性及上皮-间充质转化的影响.方法 分别利用烟酸己可碱33342(Hoechst33342)染色及CD133流式细胞术分选肝癌细胞SMMC7721,通过Western blot检测侧群细胞及CD133+细胞中HNF4的表达水平,转染HNF4特异性siRNA沉默HNF4的表达,通过Western blot检测细胞中上皮-间充质转化相应标志蛋白的变化;后通过流式细胞术及体外细胞球体形成实验检测沉默HNF4对干细胞特性的影响.结果 Hoechst33342阴性的侧群细胞占细胞总数的比例为(8.77±0.59)％,而CD133+细胞占细胞总数比例为(4.19±-0.26)％,侧群细胞及CD133+细胞中HNF4的表达水平分别较Hoechst33342阳性及CD133-细胞明显降低,而沉默HNF4可促进细胞上皮性标志蛋白的下降,伴随间质性标志蛋白升高;沉默HNF4后可升高肝癌细胞中的侧群细胞比例(NC比si-HNF4=7.73±0.57比22.38±2.56)及CD133+细胞比例(NC比si-HNF4=4.67±0.56比17.31 ±1.77),同时促进SMMC7721细胞成球(NC比si-HNF4=1.67±0.62比5.33±1.52).结论 HNF4在维持肝癌细胞干细胞特性发挥重要作用,沉默其表达可促进肝癌细胞上皮-间充质转化,并增强肝癌细胞的干细胞特性.
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青少年的成人起病型糖尿病1型一家系报告
目的 探讨青少年的成人起病型糖尿病(MODY)一家系的致病基因.方法 分析1例M ODY家系的临床特点、实验室资料等,对先证者及其家系成员进行基因测序.结果 该家系中有3名成员(先证者及其姐姐、母亲)均检测到HNF4α(NM175914)突变基因,外显子8框移突变、杂合突变,框移结果使氨基酸编码提前终止.先证者规律应用胰岛素增敏剂,血糖控制良好.结论 该家系为HNF4α基因突变所致MODY1家系,且同一家系内同时存在2型糖尿病病人.
