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慢性脑低灌注对海马区缝隙连接超微结构和缝隙连接蛋白的影响
目的 观察慢性脑低灌注导致的认知功能受损的大鼠海马区缝隙连接超微结构的变化以及缝隙连接蛋白亚单位的表达变化.方法 通过永久性双侧颈总动脉结扎模型(2-VO)诱导大鼠慢性脑低灌注状态.实验动物分为对照组、2-VO 3周组、8周组和12周组.Morris水迷宫检测空间学习和记忆能力,透射电镜观察大鼠的海马CAI区缝隙连接,逆转录-多聚酶联反应和Western印迹技术检测海马中缝隙连接蛋白(Cx)Cx36、Cx32和Cx26的表达.结果 在水迷宫训练期的3～5 d,手术组大鼠找到平台的潜伏期均显著长于对照组.空间探索实验中对照组在目标象限游泳时间显著长于手术组.所有手术组动物的缝隙连接超微结构都发生了变化.与对照组相比,Cx36转录和翻译水平在手术后3周、8周和12周组均显著降低,mBNA表达量分别为1.533±0.138、0.466±0.086、0.495±0.104、0.626±0.089,蛋白表达量分别是0.982±0.089、0.351±0.056、0.557±0.072、0.595±0.039(均P<0.01).与对照组相比,Cx32的转录和翻译水平在术后3周、8周和12周组均显著降低,mRNA表达量分别为1.215±0.128、0.237±0.079、0.471±0.083、0.556±0.105,蛋白表达量分别为1.089±0.050、0.401±0.055、0.712±0.074、0.837±0.048(均P<0.05或P<0.01).Cx26的转录水平在手术组无显著性改变,蛋白水平较对照组上调,蛋白表达量分别为0.435±0.047、0.635±0.047、1.396±0.056、0.797±0.051(均P<0.05或P<0.01).结论 这些实验结果提示缝隙连接的变化参与了慢性脑低灌注导致的认知功能损伤.
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连接蛋白/缝隙连接细胞间通讯对大鼠肝卵圆细胞增殖调控作用
背景:缝隙连接蛋白介导的缝隙连接细胞间通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)是细胞间重要的信息交流形式.目的:验证CX/GJIC 对卵圆细胞的增殖调控作用.方法:Wistar 大鼠分为4 组.对照组正常饮食;2-AAF/PH 组按改良Solt-Farber 法建立卵圆细胞增殖动物模型;苯巴比妥组予以苯巴比妥饮水7 d,第8 天按2-AAF/PH 组建模,苯巴比妥饮水持续至实验结束;三七总皂苷组按2-AAF/PH 组建模时予以三七总皂苷25 mg/(kg·d)腹腔内注射,并持续实验结束.结果与结论:造模后肝脏连接蛋白呈时空特异性表达,先下调后逐渐恢复,连接蛋白43 表达于卵圆细胞,先升高后逐渐恢复;采用苯巴比妥改变大鼠2-AAF/PH 模型肝脏的连接蛋白32、连接蛋白43 时空表达模式后,可下调肝脏的GJIC,减少卵圆细胞与偶联细胞间GJIC,解除卵圆细胞生长抑制,促进卵圆细胞的增殖;三七总皂苷可以增加大鼠2-AAF/PH 模型肝脏的连接蛋白32 表达、滞后连接蛋白43 的表达,增加卵圆细胞与偶联细胞间GJIC,使卵圆细胞增殖峰低、滞后、持续时间长;通过下调大鼠2-AAF/PH 模型肝脏的GJIC,可使卵圆细胞增殖早、增殖水平高;上调GJIC 使卵圆细胞增殖峰低、滞后、持续时间长,CX/GJIC 可以调节体内卵圆细胞的增殖、分化过程.
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Cx32及HNF4α在肝癌组织中的表达及意义
目的 检测Cx32和HNF4α在肝细胞肝癌组织中的表达变化. 方法 用免疫组织化学方法检测83例HCC、26例癌旁组织和5例正常肝组织中Cx32和HNF4α的表达情况. 结果 Cx32及HNF4α在HCC、癌旁组织及正常肝组织中阳性率分别为27.71％、73.07％、80.00％;49.39％、76.92％、80.00％.正常肝组织与肝癌旁组织差异无统计学意义(P＞0.05),正常肝组织及癌旁组织与HCC差异有统计学意义(P＜0.05).Cx32和HNF4α在HCC中的表达与病理分级相关(P均＜0.05);Cx32及HNF4α表达均与预后差相关;Cx32与HNF4α在肝癌组织中的表达正相关. 结论 Cx32与HNF4α可能参与了肝癌的发生、发展;Cx32与HNF4α表达密切相关.
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Cx32基因在肝癌细胞株中的表达与甲基化调节作用
[目的]了解Cx32基因在肝癌细胞株(HepG2)中的表达及甲基化调节作用.[方法1采用不同药物浓度的甲基化转移酶抑制剂(5-杂氮脱氧胞苷5-Aza-CdR)分三组培养细胞株,免疫组化分析Cx32蛋白表达,甲基化特异性PCR检测Cx32基因的甲基化状态.[结果]肝癌细胞株Cx32蛋白表达减少,去甲基化后Cx32基因表达增加且定位异常,细胞生长减慢,三组细胞总阳性率分别为18.5%、77%、88%,具有显著性差异(P<0.01).三组细胞Cx32基因甲基特异性PCR结果分别为甲基化、部分去甲基化及完全去甲基化.[结论]肝癌细胞株(HepG2株)中Cx32表达减少,受甲基化抑制,去甲基化可增加Cx32表达.
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颞叶癫痫间患者脑中连接蛋白32表达变化及其意义
目的 研究连接蛋白32在颞叶癫痫患者病变海马组织中的表达,从而为癫痫间的发病机制进一步提供理论依据. 方法 14例颞叶癫痫间(伴海马硬化)患者手术切除的病变海马组织为癫痫间组,8例因其他疾病死亡进行尸检者的正常海马组织为对照组,死者生前无癫痫间发作,利用免疫组织化学与蛋白印迹检测(Western-blot)方法检测两组连接蛋白32的表达水平,并进行比较. 结果应用免疫组织化学方法检测发现对照组连接蛋白32有比较低的水平表达,但在癫痫间患者的海马组织中表达增强,差异有显著性(P<0.01);应用Western-blot方法检测发现对照组连接蛋白32有低水平表达,在癫痫间患者的海马组织中表达明显增强,差异有非常显著性 (P<0.001).结论 颞叶癫痫间患者海马组织中连接蛋白32表达增高,缝隙连接在癫痫间的发生、发展过程中可能起到了重要作用.
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全反式维甲酸增强超声微泡包裹的单纯疱疹病毒胸苷激酶自杀基因治疗荷肝癌裸鼠的效果
目的 探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)能否提高微泡包裹的单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)自杀基因对肝癌的体内治疗作用.方法 用人肝癌SMMC-7721细胞建立皮下裸鼠移植瘤模型,先检测不同剂量ATRA的抗肿瘤效应；再用ATRA联合基因治疗,实验分4组:磷酸盐缓冲液组、ATRA组、HSV-TK组、联合治疗组,各组测量肿瘤体积,计算抑瘤率,Western blot检测输注的目的基因质粒的表达,HE染色行病理学观察,免疫组化法检测连接蛋白Cx32的表达.结果 ATRA在1 mg/kg下无抗肝癌作用,但≥4 mg/kg即具有明显抗肝癌效应；抑瘤率在磷酸盐缓冲液组、ATRA组、HSV-TK组、联合治疗组分别为0、(7.46±7.25)％、(37.65±3.87)％、(59.04±3.08)％,联合治疗组分别与磷酸盐缓冲液组、ATRA组、HSV-TK组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).HE结果显示:采用ATRA联合基因治疗后,肿瘤坏死细胞明显较对照组多,免疫组化结果显示:ATRA处理过的组织中,Cx32蛋白表达增加,且以胞膜表达为主.结论 ATRA具有抗肝癌作用；ATRA能增强超声微泡包裹的HSV-TK自杀基因杀伤肝癌的效果,其可能机制与ATRA促进了Cx32蛋白的正常表达有关.
关键词： 肝肿瘤 全反式维甲酸 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 超声微泡 连接蛋白32 -
全反式维甲酸增强携单纯疱疹病毒胸苷酸激酶基因的超声微泡对SMMC-7721细胞的旁观者效应
目的 观察经全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导后,单纯疱疹病毒胸苷酸激酶／丙氧鸟苷系统(HSV-TK/GCV)对人肝癌细胞SMMC-7721旁观者效应的影响.方法 免疫组化法观察经全反式维甲酸诱导前后SMMC-7721细胞连接蛋白Cx32的表达；将含有HSV-TK基因的质粒通过静电吸附在脂质微泡表面上,采用超声辐照转染并用倒置显微荧光镜及RT-PCR观察TK基因的转入及表达；MTT法观察经全反式维甲酸诱导后HSV-TK/GCV对肝癌细胞SMMC-7721的旁观者效应.结果 经全反式维甲酸诱导后SMMC-7721细胞膜上Cx32表达明显增加,而胞质内仅少量表达；通过超声辐照后HSV-TK基因可顺利转入SMMC-7721细胞中并稳定表达；与对照组相比,经全反式维甲酸诱导组可明显提高HSV-TK/GCV对肝癌细胞SMMC-7721的旁观者效应(P＜0.05).结论 全反式维甲酸可提高SMMC-7721细胞中连接蛋白Cx32的表达且能正确定位于细胞膜上,这可能与其能增强HSV-TK/GCV系统对肝癌细胞SMMC-7721的旁观者效应有关.
关键词： 维甲酸 肝癌 超声微泡 连接蛋白32 单纯疱疹病毒胸苷酸激酶/丙氧鸟苷 -
Cx32基因在肝癌细胞株中的表达与甲基化调节作用
目的:了解Cx32基因在肝癌细胞株(HepG2)中的表达及甲基化调节作用.方法:采用不同药物浓度的甲基化转移酶抑制剂(5-杂氮脱氧胞苷5-Aza-CdR)分三组培养细胞株,免疫组化分析Cx32蛋白表达,甲基化特异性PCR检测Cx32基因的甲基化状态.结果:肝癌细胞株Cx32蛋白表达减少,去甲基化后Cx32基因表达增加且定位异常,细胞生长减慢,差异具有显著性.不同5-Aza-CdR浓度处理的三组细胞Cx32基因分别为甲基化、部分去甲基化及完全去甲基化.结论:肝癌细胞株(HepG2株)中Cx32表达减少,受甲基化抑制,去甲基化可增加Cx32表达.
