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生长抑素对猕猴小肠Peyer结B细胞功能的影响
目的 探讨生长抑素(SST)对猕猴小肠Peyer结(PP)内免疫B细胞的影响,并初步探讨其机制.方法 15只健康成年猕猴按随机数字表法分为对照组、多器官功能障碍综合征(MODS)组和MODS+ SST组,每组5只.对照组:未手术处理;MODS组手术:沿腹正中切开,分离肠系膜上动脉后予以夹闭,60 min后松夹进行再灌注,恢复肠系膜上动脉血流;MODS+ SST组在夹闭肠系膜上动脉前5分钟,静脉滴注SST(5 μg· kg-1·h-1),持续至实验结束.术后24h后取出各脏器观察记录器官大体改变,HE染色法观察回肠组织PP形态学变化,免疫组化显示Toll样受体(TLR)4、TLR2、CD20、CD5、α4β7、黏附素细胞黏附分子1(MadCAM-1)、浆细胞抗体在小肠黏膜的分布及表达强弱变化,并采用Image Pro Plus 4.0图像分析软件进行半定量分析.结果 HE染色显示:MODS组小肠黏膜PP数量较对照组增加(4.8±2.3比1.2±0.9,P＜ 0.05)、形态增大,预防性给予SST后,MODS+SST组与MODS组比较,PP数量减少(2.7±1.5比4.8±2.3,P＜ 0.05),但形态大小无明显差别.免疫组化显示:MODS组B淋巴细胞CD20表达较对照组明显减少(积分光密度值,64.22±42.45比100.00±86.67,P＜0.05),MODS+SST组B淋巴细胞CD20表达与MODS组比较明显回升(129.02±75.04比64.22±42.45,P＜ 0.05);3组猕猴小肠PP内B淋巴细胞均未见或极少见α4β7、MadCAM-1表达,MODS+ SST组肠黏膜B细胞MadCAM-1表达呈强阳性;MODS组PP内TLR4及TLR2表达较对照组明显增强(93.26±10.40比25.14 ±4.56;62.06 ±9.90比15.08±2.76,P＜0.05),MODS+ SST组PP内TLR4及TLR2的表达较MODS组显著降低(56.60 ±6.83比93.26±10.40;35.56 ±4.71比62.06±9.90,P＜ 0.05);对照组肠黏膜内的浆细胞主要位于固有层,MODS组黏膜固有层内的浆细胞几乎消失,MODS+ SST组黏膜固有层内的浆细胞有所回升.结论 PP内B细胞具有执行天然免疫与获得性体液免疫的双重潜能,SST则像个开关,控制着PP内B细胞在天然免疫与获得性体液免疫之间的转换,预防性使用SST,将过强的天然免疫转换为有益的获得性体液免疫对临床预防多器官功能障碍具有直接的指导意义.
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高原地区大鼠烫伤延迟复苏后Peyer结中低氧诱导因子-1α表达对T淋巴细胞凋亡与增殖的影响
目的 探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和淋巴细胞凋亡在不同海拔高度大鼠烫伤延迟复苏后的变化及意义.方法 Wistar大鼠132只,分别在l 517 m和3 848 m海拔高度随机分为延迟复苏组(DFR,,n=30)、即时复苏组(IFR,n=30)、假伤组(SG,n=6).建立30%总体表面积(TBSA)Ⅱ度烫伤模型,分别于伤后6、12、24、48和72 h各取6只大鼠开腹,取回肠组织肠肇Peyer结,采用原位末端缺刻标记法(TUNEL)、免疫组化染色与图像分析技术.观察回肠Peyer结中淋巴细胞凋亡率及HIF-1α和CD3的阳性表达.结果 DFR组伤后各时间点Peyer结淋巴细胞凋亡率均明显高于同海拔高度IFR各组,随海拔高度上升凋亡率升高,伤后12 h凋亡率高(P均<0.05).HIF-1α阳性表达位于Peyer结中淋巴细胞胞核内,IFR组和DFR组表达强度明显高于同海拔SG组,并随海拔高度上升而增强(P均<0.05).CD3表达位于Peyer结中T淋巴细胞胞膜上,IFR组和DFR组CD3表达强度低于同海拔SG组,并随海拔高度上升而减弱,伤后12 h表达降至低(P均<0.05).结论 高原地区烫伤延迟复苏后HIF-1α表达增高可能是Peyer结T淋巴细胞凋亡率增加和细胞数降低的重要原因之一.
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芪黄煎剂对大鼠胃切除后Peyer结淋巴细胞的影响
目的 探讨芪黄煎剂对大鼠胃切除后Peyer结淋巴细胞的影响.方法 将90只大鼠随机分为假手术组、模型组、芪黄煎剂组,每组30只.假手术组大鼠仅给予腹部正中切开后缝合,不行胃切除,手术后自由饮水进食,不给予肠内营养和芪黄煎剂;模型组大鼠行胃切除手术后给予肠内营养制剂能全素;芪黄煎剂组大鼠行胃切除手术后给予能全素和芪黄煎剂.疗程1周.疗程结束后,处死大鼠,分离出Peyer结及其内淋巴细胞,采用流式细胞仪检测αβ T细胞抗原受体-白细胞分化抗原3阳性(αβ T cell antigen receptor-cluster of differentiation 3 positive,αβTCR-CD3+)T细胞,白细胞分化抗原4阳性(cluster of differentiation 4 positive,CD4+)、白细胞分化抗原8阳性(cluster of differentiation 8 positive,CD8+)T细胞;免疫组织化学法检测免疫球蛋白A阳性(immunoglobulin A positive,IgA+)B细胞.结果 模型复制后1周,与假手术组比较,模型组Peyer结中αβTCR-CD3+、CD4+ T细胞构成比和IgA+ B细胞数显著降低(P<0.05,或P＜0.01),模型组和芪黄煎剂组CD8+ T细胞构成比无显著变化;与模型组比较,芪黄煎剂组Peyer结中αβTCR-CD3+、CD4+ T细胞构成比和IgA+ B细胞数显著上升(P<0.05,或P＜0.01).结论 芪黄煎剂能刺激Peyer结中T细胞的成熟、分化和增殖,并进一步促进Peyer结中B细胞的增殖和活化,有利于胃切除手术应激后肠道免疫屏障功能的调节和恢复.
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大黄酸对IgA肾病Peyer结T细胞亚群的调节作用
目的 探讨Peyer结T细胞亚群失衡在IgA肾病(IgAN)发病机制中的作用及大黄酸对其的调节作用.方法 采用牛血清白蛋白+LPS+CCl4法建立IgA肾病大鼠模型.将32只SD雄性大鼠随机分成对照组、IgA肾病模型组、大黄酸预防组和大黄酸治疗组.10周末采用免疫荧光检测肾小球IgA沉积,ELISA方法检测血清中Th1类细胞因子IFN-γ和Th2类细胞因子IL-4含量.用流式细胞术测定各组Peyer结CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+CD25+T细胞、γδT细胞亚群和IgA+B细胞(IgA+B220+)的比例.结果 和对照组相比,模型组中Th2类细胞因子IL-4含量增加而Th1类细胞因子IFN-γ的含量降低(P均＜0.05);模型组中CD4+T细胞、CD4+/CD8+、IgA+B220+B细胞比例升高(P均＜0.05);模型组中γ8T细胞亚群的比例增加,CD8+T细胞、CD4+CD25+T细胞的比例降低,但差异均无统计学意义(P＞0.05).大黄酸预防组和大黄酸治疗组均可减少IL-4含量、CD4+T细胞比例、CD44+/CD8+比例和IgA+B220+B细胞比例,并提高IFN-γ的含量.结论 Peyer结Th细胞亚群失衡在IgAN发病机制中起到一定的作用,而大黄酸对Peyer结T细胞亚群平衡具有调节作用.
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不同淋巴组织淋巴细胞培养上清诱导Caco2细胞向微皱褶样细胞转分化
目的 复制微皱褶(M)样细胞体外诱导模型,从功能和基因水平两方面鉴定M样细胞,同时观察不同淋巴组织活化的淋巴细胞的培养上清对Caco2细胞向M样细胞转化的影响.方法 用3μg/mL伴刀豆球蛋白A(Con A)刺激Peyer结(PP)、肠系膜淋巴结(MLN)和脾脏(Sp)的淋巴细胞3d,收集细胞培养上清后,将其并与Caco2细胞共培养.在TranswellTM上室加入微球,收集下室的培养液,流式细胞术分析荧光微球数量;反转录PCR检测M样细胞相关基因CC趋化因子配体20 (CCL20)、密封蛋白基因4(CLDN4)、肿瘤坏死因子受体超家族成员9(TNFRSF9)、Ets家族转录因子Spi-B mRNA的水平,观察不同淋巴组织淋巴细胞培养上清对Caco2细胞向M样细胞转化的诱导率的影响.结果 与空白对照组相比,PP、MLN和Sp淋巴细胞培养上清诱导后,诱导后的Caco2细胞转运的微球数量和CCL20、CLDN4、TNFRSF9、Spi-B的mRNA水平均显著增加;与未刺激组相比,Con A刺激后,诱导后的Caco2细胞转运的微球数量和CCL20、CLDN4、TNFRSF9、Spi-B的mRNA水平均显著增加.结论 Con A刺激和未刺激的淋巴细胞培养上清,均可以诱导Caco2细胞向M样细胞转分化.
