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佐米曲坦诱导雄性大鼠肝CYP3A2的作用机制
作者前期研究发现佐米曲坦(ZOL)对雄性大鼠肝中CYP3A2具有诱导作用,而对雌性大鼠没有诱导作用.阐明其机制对于研究ZOL的药物相互作用和个体化用药具有积极意义.由于生长激素(GH)与一些蛋白的性别差异性表达密切相关,因此,本研究探究了ZOL对大鼠GH分泌的影响,以及其对脑垂体化学损伤大鼠模型肝中CYP3A2的诱导作用.结果发现,ZOL可以抑制正常大鼠体内血浆GH水平.与正常组大鼠的诱导结果不同,ZOL抑制了损伤组雄性大鼠肝中CYP3A2的表达.另外,ZOL对于雌雄原代肝细胞中的CYP3A 1/2无明显诱导作用.进一步研究发现,给予ZOL后正常雄性大鼠肝中肝细胞核因子4α(HNF4α)的入核水平明显增加,而正常雌性大鼠、脑垂体化学损伤大鼠和大鼠原代肝细胞中HNF4α的入核水平无明显变化.结果表明,GH和HNF4α在ZOL性别差异性诱导CYP3A2的过程中发挥了重要的作用.
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实时定量PCR法绝对定量检测大鼠肝脏CYP3A1和CYP3A2mRNA的诱导表达
由CYP3A诱导作用引起的临床药物-药物间相互作用能同时降低CYP3A酶底物药物的体内暴露量和药理活性.CYP3A mRNA水平的增高常用于评价受试化合物对CYP3A酶的诱导作用.本实验建立并验证了一种绝对定量的实时PCR方法用于测定大鼠肝中CYP3A1和CYP3A2 mRNA的表达水平.设计的CYP3A1、CYP3A2和GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶,看家基因)引物具有很高的特异性.CYP3A1、CYP3A2和GAPDH在1-1×106 attomol/μL浓度范围内,循环阈值和对数浓度呈现良好的线性关系,并且具有良好的实验组内和组间可重复性.该方法成功应用于考察大鼠腹腔注射给予100 mg/kg地塞米松后肝脏中CYP3A1和CYP3A2 mRNA诱导作用随时间的变化规律.总RNA中CYP3A1和CYP3A2mRNA的基础水平分别为37.78和252.31 attomol/μg.随后CYP3A1和CYP3A2 mRNA水平逐渐增加并分别在24小时和42小时达到大诱导效应,分别为基础水平的19倍和8倍.终CYP3A1和CYP3A2 mRNA在地塞米松给药60小时后回落到各自的基础水平.
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艾迪注射液对大鼠原代肝细胞中CYP1A2、CYP3A2酶活性的影响
目的 评价艾迪注射液对大鼠原代肝细胞中CYP1A2、CYP3A2酶活性的影响.方法 采用两步胶原酶循环灌流法分离大鼠原代肝细胞,建立体外肝细胞温孵体系,选择非那西丁、咪达唑仑分别作为CYP1 A2、CYP3A2的探针药物,建立同时测定肝细胞中代谢物对乙酰氨基酚、α-羟基咪达唑仑的UPLC-MS/MS法.将阳性诱导剂奥美拉唑和苯巴比妥、不同浓度艾迪注射液、空白溶剂分别作用肝细胞2d,给予探针药物孵育60 min后,测定各探针代谢物生成量,计算相对阳性对照活性,评价艾迪注射液对CYP1 A2和CYP3A2酶活性的影响.结果 艾迪注射液对大鼠原代肝细胞中CYP1A2、CYP3A2亚型酶的相对阳性对照活性均小于40％.结论 艾迪注射液对大鼠原代肝细胞中CYP1 A2、CYP3 A2亚型酶活性无明显影响.
关键词： 艾迪注射液 CYP1A2 CYP3A2 原代肝细胞 UPLC-MS/MS -
毛冬青胶囊对大鼠体内细胞色素P450代谢活性的影响
目的：采用Cocktail探针药物法研究毛冬青胶囊对大鼠CYP1A2、CYP3A2、CYP2C6、CYP2D1、CYP2D2和CYP2E1体内代谢活性的影响。方法：分别以茶碱、咪达唑仑、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、右美沙芬和氯唑沙宗作为探针底物，将大鼠随机分为3组：空白对照组、毛冬青的低剂量组和高剂量组。低、高剂量组每日分别灌胃给予毛冬青胶囊1.8、3.6 g·kg-1，空白对照组每日给予与低剂量组等体积的生理盐水，各组均为1次/天，连续14 d。各组分别于第15天给予Cocktail探针药物，于给药前、后不同时间点取血，用LC-MS/MS检测各探针药物的血药浓度，计算药代动力学参数。结果：茶碱低剂量组cmax、AUC0-t有极显著差异（P≤0.01）；甲苯磺丁脲高剂量组和氯唑沙宗低剂量组AUC0-t有显著差异（P≤0.05）；其他无统计学差异。结论：毛冬青胶囊对大鼠体内CYP2C6和CYP1A2有强诱导作用，对CYP2E1有中强诱导作用，其他亚型基本无影响。
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栀子苷对大鼠肝指数、肝功能及肝脏微粒体中CYP3A2的影响
目的:研究栀子苷对大鼠肝指数、肝功能及肝脏微粒体中CYP3A2在酶活性方面的影响,以期为探讨栀子苷致大鼠肝毒性提供实验依据.方法:用紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素CYP3A2含量,通过红霉素N-去甲基反应评价酶活性.结果:栀子苷大剂量组对大鼠肝功能有损害;在酶活性方面,栀子苷小、中、大3个剂量组均高于空白对照组,差别有统计学意义(P＜0.01),但栀子苷大剂量组明显低于小、中剂量组,差别有统计学意义(P＜0.01).结论:栀子苷具有肝毒性,且可能存在基于药物代谢酶机制方面的药物作用,此尚需进一步结合代谢方面研究,以便综合分析、阐明其作用机制.
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大戟配伍甘草对大鼠肝功能及肝脏微粒体中CYP3A2的影响
目的 研究中药"十八反"中大戟与甘草配伍对大鼠肝功能和肝脏微粒体中CYP3A2在mRNA水平、蛋白表达及酶活性方面的影响.方法 采用RT-PCR技术检测大鼠肝脏CYP3A2 mRNA表达水平;利用Western-blot技术检测大鼠肝脏CYP3A2蛋白的表达;采用红霉素N-去甲基反应评价CYP3A2酶活性.结果 大戟和甘草合用对大鼠肝功能损害为严重;在mRNA水平、蛋白表达、酶活性方面,大戟组均高于空白组及其他各单用组.结论 大戟、甘草可能存在基于药物代谢酶机理的相反作用,但需进一步结合代谢研究加以综合分析,阐明相反作用的机理.
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慢性间断性低氧对大鼠肝脏CYP3A2和CYP2E1的影响研究
目的:研究慢性间断性低氧对大鼠肝脏CYP3A2和CYP2E1的影响.方法:将大鼠随机分为对照组、低氧3d组、低氧7d组、低氧14d组、低氧28d组,低氧处理结束24h后,常规腹腔注射麻醉,摘取眼球血液2ml制备血清,并测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST)、红霉素N-脱甲基酶(ERD)、苯胺羟化酶(ANH)活性;取新鲜肝组织以制备微粒体和提取核糖核酸(RNA),并以RT-PCR进行基因片段扩增以检测大鼠肝脏细胞色素CYP3A2、CYP2E1的mRNA表达水平.结果:慢性间断性低氧对血清ALT、AST活性无明显影响;低氧7d后,大鼠肝脏ERD、ANH活性明显升高,28d时诱导率分别为155.5%、42.2%;同时,CYP3A2、CYP2E1mRNA的表达水平也分别增加了220.5%、102.8%.结论:慢性间断性低氧能显著增加大鼠肝脏ERD、ANH活性,其机制可能与其在转录水平上提高肝脏CYP3A2和CYP2E1的基因表达水平有关.
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甘遂配伍甘草对大鼠肝脏CYP3A2影响
目的: 研究中药"十八反"中甘遂与甘草配伍对大鼠肝脏CYP3A2在mRNA 水平、蛋白表达及酶活性方面的调控作用.方法: RT-PCR 检测大鼠肝脏CYP3A2 mRNA水平;Western Blotting 检测大鼠肝脏CYP3A2蛋白表达;通过红霉素N-去甲基反应评价CYP3A2酶活性.结果: 在mRNA水平、蛋白表达、酶活性方面,甘遂单用组均高于其他组.结论: 甘遂、甘草可能存在基于药物代谢酶机制的药物间相互作用.
