戊己丸不同配伍组方体内对CYP1A2酶活性的影响研究及其临床意义

目的:研究戊己丸不同配比方对大鼠体内CYPIA2酶活性的影响,从药动学角度探讨戊己丸配伍机理,为临床优化给药提供借鉴.方法:以非那西丁为CYP1A2酶活性研究探针药,HPLC测定大鼠体内非那西丁及代谢产物--对乙酰氨基酚的血药浓度变化,间接反映CYPIA2酶活性的大小;以正交法设计戊己丸3因素3水平交互的9个实验点,考察所选取实验点对应的9种戊己九配比方对CYPIA2酶活性的不同影响.结果:9种戊己丸配比复方,组成戊己丸的黄连、吴茱萸、白芍3单味药及对照组动物中,CYPIA2酶活性从高到低依次为:8#方、白芍、9#方、7#方、6#方、1#方、2#方、4#方、对照组、3#方、黄连、吴茱萸,5#方;随着复方中黄连剂量水平的增大,酶活性呈增高趋势,复方中引入小、中剂量水平的吴茱艾或白芍可以增高CYPIA2酶活性,但高剂量吴助于或白芍对CYPIA2酶活性有抑制作用.结论:戊己丸各因素水平变化均可能对CYP1A2酶活性造成影响,此种影响有可能是戊己丸药效学差异的原因之一;根据本实验结果可以优化戊己丸的临床应用.

制何首乌对大鼠肝CYP1A2酶活性及mRNA表达的抑制作用

目的:考察制何首乌水提物对大鼠肝细胞色素P450酶亚型CYP1A2的酶活性及mRNA表达的影响.方法:水回流提取得制何首乌水提物,HPLC确定主要成分并测定其含量.大鼠随机分为空白对照组、制何首乌水提物组(2 g/kg和20g/kg),给药组每天按10 mL/kg量灌胃给予制何首乌水提物,连续7d.取肝分离肝微粒体,HPLC测定肝微粒体对CYP1A2酶的底物非那西丁的代谢消除率,考察肝微粒体CYP1A2酶活性;实时荧光定量PCR技术检测肝组织中CYP1 A2基因mRNA的表达.结果:与空白对照组相比,制何首乌水提物20 g/kg组大鼠肝CYP1A2酶活性和mRNA的表达均明显降低(CYP1A2酶活性,P＜0.01;CYP1A2的mRNA表达,P＜0.05).结论:制何首乌水提物20g/kg对大鼠肝CYP1A2酶活性和mRNA的表达有明显抑制作用.

乳香没药对细胞色素P450活性的影响

目的:考察乳香没药对细胞色素P450活性的影响.方法:56只小鼠分为对照组和乳香+没药3.15,2.10,1.05 g·kg-1剂量组,连续ig给药7 d；48只小鼠分为对照组和乳香、没药、乳香+没药组,ig给药3.15 g·kg-11次.所有小鼠末次药后30 min ip给予戊巴比妥钠,观察乳香没药对P450的影响.40只大鼠分为对照组、乳香组、没药组、乳香+没药组,以3.00g·kg-1连续ig给药14d,取肝脏制备各组动物肝微粒体,并用cocktail探针法考察乳香没药对大鼠CYP1 A2,CYP2E1,CYP3 A4的影响.结果:乳香+没药3.15,2.10,1.05 g·kg-1剂量连续给药7d均可使戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠率降低(P ＜0.05,P＜0.01),而单次给药3.15g· kg-1有使戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠率升高的趋势.乳香、没药及乳香+没药混合物组大鼠肝微粒体体外对非那西丁、氯唑沙宗代谢率显著高于对照组,而氨苯砜无明显差异.结论:乳香、没药连续用药均使CYP1A2,CYP2E1活性增强,而对CYP3A4则无显著影响.

清开灵注射液对大鼠CYP1A2和2D6的影响

目的:通过清开灵注射液的大鼠体内、外实验,观察清开灵注射液对大鼠CYP1A2亚型,CYP2D6亚型的影响.方法:通过HPLC法测定全血中咖啡因的代谢率,观测清开灵注射液对大鼠CYP1A2活性的影响;通过HPLC法测定大鼠肝微粒体重组系统非那西丁的代谢比率,确定清开灵注射液对大鼠肝微粒体CYP1A2亚型的作用;测定大鼠肝微粒体重组系统右美沙芬的代谢比率,确定清开灵注射液对大鼠肝微粒体CYP2D6亚型的作用.结果:实验组中给予大鼠不同浓度的清开灵注射液(0.15,0.3,0.6 mL·kg-1),其咖啡因代谢率为(15.9±3.8)%,(14.5±1.8)%,(12.3±1.2)%,对照组为(16.8±5.9)%,各剂量组及对照组间均无显著性差异;肝微粒体体外重组系统中,实验组各浓度清开灵注射液对CYP2D6没有影响;高剂量组清开灵注射液对CYP1A2有抑制作用.结论:清开灵注射液对CYP1A2和CYP2D6的活性没有影响.

注射用益气复脉(冻干)对大鼠肝微粒体CYP1A2,CYP3A4活性的影响研究

目的:研究注射用益气复脉(冻干)对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP1A2,CYP3A4)酶活性的影响效应.方法:实验设空白对照组(生理盐水)、诱导组(苯巴比妥)和益气复脉低、中、高剂量组,连续给药7 d.采用高效液相色谱法检测,以探针药非那西丁和咪达唑仑经大鼠肝微粒体孵育后转化的代谢产物对乙酰氨基酚和1'-羟基咪达唑仑的生成速率来判定CYP1A2,CYP3A4酶的活性.结果:空白对照组、诱导组和益气复脉低、中、高剂量组的对乙酰氨基酚的生成速率分别为(1.304 ±0.205),(8.555±1.193),(2.927±0.576),(3.675±0.444),(3.024±0.552)ng·mg-1·min-1,1-羟基咪达唑仑的生成速率分别为(9.100±2.235),(47.413±4.320),(38.649 ±5.043),(36.282±3.254),(33.764±5.128)ng·mg-1·min-1.结论:注射用益气复脉对大鼠CYP1A2,CYP3A4酶的活性具有诱导作用.

何首乌水提物对大鼠肝脏CYP1A2,CYP2E1酶活性及mRNA表达抑制作用研究

大鼠连续灌胃不同剂量的何首乌水提物(1,10g·kg-1)7 d,取肝脏制备肝微粒体,分别用Cocktail体外孵育法和实时荧光定量PCR技术观察何首乌水提物对大鼠肝脏主要CYP450酶活性及mRNA表达的影响.与空白对照组相比,1,10g·kg-1何首乌水提物组大鼠肝脏CYP2E1酶活性和mRNA的表达均受到明显抑制(CYP2E1酶活性,P＜0.01;CYP2E1的mRNA表达1 g·kg-1组P＜0.05,10 g·kg-1组P＜0.01),CYP3A1酶活性虽显示明显升高(P＜0.01),但mRNA的表达没有显著变化;10 g·kg-1何首乌水提物组大鼠肝脏CYP1A2酶活性和mRNA的表达受到明显抑制(P＜0.01).

丹参酚酸A对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响

目的:研究丹参酚酸A对大鼠肝微粒体细胞色素P450和细胞色素b_5含量以及CYP1A2和CYP2E1活性的影响.方法:将大鼠分成溶剂对照组和丹参酚酸A给药组,每组10只,雌雄各半,丹参酚酸A给药组尾静脉注射给予丹参酚酸A 20 mg·kg~(-1)·d~(-1),连续给药5 d;溶剂对照组给予相同剂量的溶剂,紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素P450和细胞色素b_5含量;探针底物法评价CYP1A2和CYP2E1的活性.结果:丹参酚酸A尾静脉注射连续给药5 d后,大鼠细胞色素P450和细胞色素b_5含量与对照组比较均无显著性差异;CYP1A2和CYP2E1的活性与对照组比较也无显著性差异.结论:丹参酚酸A对CYP1A2和CYP2E1没有诱导或抑制作用,与经过CYP1A2和CYP2E1代谢的药物发生相互作用的可能性较小.

“健脾和胃祛湿方”对大鼠肝组织CYP450酶作用和初步机制

目的 从分子水平探讨“健脾和胃祛湿方”对药物代谢酶CYP450的作用.方法 采用液质联用分析、Western blot及RT-PCR方法测定大鼠肝微粒体及肝脏组织中CYP450酶系6种亚型(CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4)的活性、蛋白及mRNA表达水平的影响.结果 “健脾和胃祛湿方”对CYP450亚型CYP2C19、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4的酶活性,蛋白及mRNA表达水平没有显著性影响;而呈剂量依赖性地降低CYP1 A2酶活性,蛋白及mRNA表达水平.结论 “健脾和胃祛湿方”作用于药物代谢酶CYP450亚型CYP1A2酶活性、蛋白及mRNA表达水平,对CYP450酶其他亚型没有影响.

戊己丸不同配比方对大鼠体CYP1A2酶活性的影响

目的:探讨戊己丸不同配比方对大鼠体外肝微粒体CYP1A2酶活性的影响,从"中药配伍一代谢"关系探讨中药配伍机制.方法:按L9(34)正交表,戊己丸的配比设计为9个受试复方,以非那西丁为探针药,HPLC检测戊己丸对大鼠体外肝微粒体CYP1A2酶活性的影响.结果:黄连、吴茱萸、白芍提取物及戊己丸方1-9抑制CYP1A2的生药IC50分别为:28.07、989.69、6633.28、57.92、 104.38、321.28、32.17、80.09、71.47、76.76、40.41、29.45mg/L;黄连及戊己丸可以显著抑制CYP1A2酶活性,不同配比戊己丸抑制CYP1A2酶活性作用不同,有统计学差异;随着黄连、吴茱萸两药在戊己丸方中剂量水平的增高,戊己丸组方抑制CYP1A2酶活性的能力增强,随着白芍在戊己丸方中剂量水平的增高可以减弱该组方抑制CYPA2酶活性的能力,且戊已丸组方中吴茱萸和白芍配比不同可以影响方中黄连抑制CYP1A2酶活性的程度.结论:戊己丸配比不同,对CYP1A2酶活性的抑制作用不同,这种差异可能是不同配比戊己丸药效学、药动学差异的原因所在.

藏药佐太对CYP1A2和NAT2的活性及蛋白和mRNA表达的影响

银杏内酯B注射液对大鼠体内CYP酶活性的影响

目的:研究银杏内酯B注射液对大鼠细胞色素P450酶(CYP)亚型CYP1A2,CYP3A4和CYP2E1活性的影响,为临床合理用药提供参考.方法:将Wistar大鼠随机分组,给药组静脉推注银杏内酯B注射液10 mg·kg-1,qd,对照组给予相同体积的注射液空白溶媒,均给予7d.d8各组静脉注射茶碱20 mg· kg-1、氨苯砜10 mg·kg-1和氯唑沙宗20 mg· kg-1混合溶液,于给药后5,10,15,30 min及1,1.5,2,4,8,12,24 h采集血浆样品.用HPLC同时测定3种探针药物的血药浓度,用DAS2.0软件计算药动学参数.结果:同对照组相比,给药组茶碱和氯唑沙宗的主要药动学参数均无显著差异,但氨苯砜的表观分布容积(V1)显著增加(P＜0.05),消除半衰期(t1/2β)有明显延长趋势.结论:银杏内酯B注射液对大鼠CYP1A2,CYP2E1活性无显著影响,对大鼠CYP3A4活性可能有抑制作用.

Caspase抑制剂F1013对大鼠肝CYPs含量及其主要亚型mRNA表达的影响

目的:探讨Caspase抑制剂F1013对大鼠肝CYPs含量及其主要亚型CYP1 A2,CYP2D1,CYP2E1,CYP2C11,CYP3A1 mRNA相对表达水平的影响.方法:Wistar大鼠40只,随机分成空白组、诱导剂组、F1013低、中、高剂量组.空白组和诱导剂组分别灌胃给予0.9％氯化钠溶液和地塞米松50 mg· kg-1·d-1,F1013低、中、高组分别肌内注射F1013 1.25,2.5,5.0 mg·kg-1·d-1,每日1次,连续6d.取大鼠肝组织制备肝微粒体,测定微粒体蛋白浓度及CYP总酶含量.并采用实时定量荧光RT-PCR法分析大鼠CYP各主要亚型mRNA的相对表达水平.结果:F1013低、中、高组肝微粒体CYP总酶含量与空白组比有显著增高(P＜0.05),提示该药对CYP总酶有诱导作用.低剂量组CYP2D1酶活性显著升高(为空白组2.54倍,P＜0.05)；中剂量组CYP1 A2及CYP2E1酶活性显著升高,分别为空白组4.24和2.46倍(P＜0.05)；3个剂量的F1013对CYP2C11均无显著诱导作用.结论:F1013在1.25,2.5,5.0 mg· kg-1剂量范围内,可显著诱导CYP总酶活性.F1013 1.25 mg·kg-1可诱导CYP 2D1 mRNA表达,2.5 mg· kg-1剂量可诱导CYP1 A2及CYP2E1 mRNA的表达,其诱导机制可能与升高各主要亚酶mRNA相对表达水平有关.

Cocktail法评价注射用丹参总酚酸对大鼠肝微粒体CYP1A2和CYP3A的诱导作用

目的:考察注射用丹参总酚酸(TSAI)对大鼠肝微粒体CYP1A2和CYP3A的诱导作用.方法:健康Wistar大鼠随机分为空白对照组、苯巴比妥钠诱导组和给药组,每组6只,雌雄各半,连续给药7d,处死,制备肝微粒体；将特异性探针底物非那西丁、睾酮与肝微粒体共孵育,高效液相色谱测定孵育所得代谢产物对乙酰氨基酚和6β-羟基睾酮的生成速率,评价TSAI对CYP1A2和CYP3A的诱导作用.结果:空白对照组、诱导组和给药组的对乙酰氨基酚的生成速率分别为(18.04±1.00),(43.07±2.90)和(16.03±2.41)ng· mg ·min-,6β-羟基睾酮的生成速率分别为(15.79±1.43),(40.86±3.32)和(17.12±2.65) ng·mg-1·min-1.结论:TSAI对大鼠肝微粒体CYP1A2和CYP3A无诱导作用.

UPLC-MS用于体外大鼠肝微粒体CYP1A2和CYP2D1酶代谢活性表征及动力学研究

目的 建立大鼠肝微粒体CYP1A2和CYP2D1酶活性的快速测定方法并考察两种CYP酶反应动力学.方法 利用CYP1A2和CYP2D1选择性探针底物即非那西丁与右美沙芬进行温孵实验,采用超高压液相色谱与质谱联用(UPLC-MS)的方法建立相应代谢产物的含量测定方法.结果 非那西丁代谢产物对乙酰氨基酚的线性范围为0.409 ～ 10.227μmol·L-1(r2 =0.999 1),LOD和LOQ值分别为0.067和0.267 μmol·L-1;右美沙芬代谢产物去甲右美沙芬为0.020～5.051 μmol·L-1(R2=0.998 0),LOD和LOQ值分别为0.002和0.007μmol·L-1.方法回收率分别为95.9％～104.0％和102.1％～107.1％,精密度以RSD值表示均低于5％.CYP酶活性测试及反应动力学表明,CYPl A2和CYP2D1的米氏常数(Km值)分别为(28.4±2.7)和(13.9±1.3) μmol·L-1;其代谢活性(底物浓度为10 μmol·L-1时)分别为(1.47±0.12)和(3.98±0.09)nmol·mg-1.结论 本实验建立的UPLC-MS分析方法快速、灵敏、准确、可靠,适用于药物代谢研究中CYP1A2和CYP2D1体外活性测定及其反应动力学分析.

齐墩果酸对健康人体CYP1A2,CYP2E1及CYP3A4抑制作用的研究

目的 在人体内研究齐墩果酸对CYP1A2,CYP2E1及CYP3A4酶活性的影响,以预测齐墩果酸与常用临床药物的相互作用.方法 分别以咖啡因、氯唑沙宗和咪哒唑仑作为CYP1A2,CYP2E1及CYP3A4的探药,采用随机、开放、双周期交叉设计,12名健康男性受试者在服用7d齐墩果酸前后均服用100mg咖啡因、400mg氯唑沙宗和7.5mg咪哒唑仑,服探药后采血测定探药及相应代谢产物的浓度,并计算相关参数.探药和代谢物的浓度分别用RP-HPLC和HPLC-MS测定.结果 服用齐墩果酸7d后,咖啡因的代谢受到显著的抑制,其达峰时间、消除半衰期及药-时曲线下面积显著增加;氯唑沙宗的代谢受到轻微抑制,达峰浓度、达峰时间、消除半衰期及药-时曲线下面积均有升高趋势,但无显著性差异;咪哒唑仑的代谢未受影响.结论 服用7d齐墩果酸对CYP1A2体内活性有显著抑制作用,对CYP2E1体内活性有轻微抑制作用,而对CYF3A4酶活性无影响.

华北地区CYP1A2基因常见SNP位点的分布

目的:建立CYP1 A2基因-3860G＞A、-3113G＞A、-2467delT、-739T＞G、-163C＞A、2321G＞C、5347C＞T等7个SNP位点的检测方法,探讨7个SNP位点在华北地区人群中的分布.方法:选取健康受试者,提取全血样本DNA,以Primer Premier 5软件自设计引物及探针,采用扩增阻滞突变系统(ARMS)结合TaqMan探针技术(ARMS-TaqMan法)建立CYP1 A2基因7个SNP位点基因分型方法.结果:-3860G＞A、-3113G＞A、-2467 delT、-739T＞G、-163C＞A、2321G＞C、5347C＞ T7个SNP位点的突变等位基因频率分别为0.292、0.078、0.524、0.078、0.657、0.148、0.127.结论:成功建立7个SNP位点的ARMS-TaqMan基因分型方法,该方法具有准确、操作简单、高通量等优势.

从CYP1A2探讨泌尿科常用药物联合用药的合理性

目的:探讨泌尿科常用药物联合用药的合理性.方法:从氟喹诺酮类抗生素可影响经CYP1A2代谢底物药物的体内代谢过程,探讨泌尿科常用药物联合用药的合理性.结果:氟喹诺酮类抗生素经细胞色素P450渠道可直接或间接地影响与其联合用药的相应P450亚型酶底物药物的代谢,潜藏着不合理用药的风险.结论:泌尿科临床医师应重视临床常用药物联合用药的合理性.

茵栀黄注射液及其主要有效成分对大鼠CYP1A2的影响

目的：观察茵栀黄注射液及其有效成分对大鼠C Y P1A2的影响。方法以非那西丁为探针，通过研究其体外转化率的变化评价茵栀黄注射液对大鼠CYP1A2的影响。结果茵栀黄注射液使非那西丁的体外转化率为(626.27±8.60) pmol尅min-1尅mg-1，显著低于对照组(885.16±66.64) pmol尅min-1尅mg-1( P<0.05)。黄芩苷和栀子苷合用组的转化率与茵栀黄注射液组无显著差别。结论茵栀黄注射液体外对大鼠C Y P1A2酶有抑制作用，且其抑制作用可能主要是由其有效成分黄芩苷引起的。

壮骨关节丸对大鼠肝微粒体P450的影响

[目的]考察壮骨关节丸对大鼠肝微粒体细胞色素P450的影响.[方法]壮骨关节丸及其两个新工艺按含生药2.1 g/kg连续给大鼠灌胃7d,末次药后24h断头处死大鼠并取肝脏,用钙沉降法制备肝微粒体.在体外用含氨苯砜、非那西丁、奥美拉唑、氯唑沙宗的cocktail探针代谢来考察肝微粒体CYP3A、CYP1A2、CYP2C19、CYP2E1的活性.[结果]cocktail探针在体外肝微粒体系统中代谢1h后,包括壮骨关节丸及其两个新工艺的给药组剩余氯唑沙宗浓度显著高于对照组,而奥美拉唑、非那西丁、氨苯砜浓度与对照组之间差异无统计学意义.[结论]壮骨关节丸可以抑制大鼠肝脏CYP2E1活性,但对CYP1A2、CYP3A及CYP2C19无显著影响.

何首乌水提物及其主要成分对人肝细胞L02中CYP1A2、CYP2C9和CYP2E1mRNA表达的影响

目的 分析何首乌水提物中主要化学成分及其量,阐明何首乌水提物及其主要成分对人正常肝实质细胞L02中CYP1A2、CYP2C9和CYP2E1 mRNA表达的影响.方法 HPLC测定何首乌水提物中主要化学成分及其质量分数;MTT法确定何首乌水提物及其主要成分对L02细胞活力的影响;实时荧光定量PCR测定L02细胞中CYP1A2、CYP2C9和CYP2E1mRNA表达量.结果 何首乌水提物主要含有二苯乙烯苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素和大黄素甲醚,各成分在何首乌水提物中的质量分数分别为(1.14±0.03)％、(0.1069±0.001 6)％、(0.010 8±0.000 9)％、(0.003 55±0.000 19)％:何首乌水提物及其主要成分作用L02细胞24 h,何首乌水提物和大黄素对细胞活力的影响随着药物浓度的增加抑制作用增强,IC50值分别为7.290 mg/mL和0.082 mmol/L,二苯乙烯苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素甲醚在实验浓度范围内对细胞活力的抑制作用不明显;何首乌水提物、大黄素均可明显抑制L02细胞中CYP1A2、CYP2C9、CYP2E1 mRNA的表达;大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷抑制CYP1A2和CYP2C9的mRNA表达;二苯乙烯苷抑制CYP1A2 mRNA表达,但激活CYP2C9mRNA表达;大黄素甲醚浓度依赖性抑制CYP1A2、CYP2C9 mRNA表达,却表现低浓度抑制、高浓度激活CYP2E1 mRNA表达.结论 何首乌水提物抑制L02细胞中CYP1A2、CYP2C9和CYP2E1 mRNA表达是其所含各种成分综合作用的结果,何首乌4种主要成分均可抑制CYP1A2 mRNA表达,蒽醌成分是抑制CYP2C9 mRNA表达的主要成分,游离葸醌是抑制CYP2E1 mRNA表达的主要成分.