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乳香没药对细胞色素P450活性的影响
目的:考察乳香没药对细胞色素P450活性的影响.方法:56只小鼠分为对照组和乳香+没药3.15,2.10,1.05 g·kg-1剂量组,连续ig给药7 d；48只小鼠分为对照组和乳香、没药、乳香+没药组,ig给药3.15 g·kg-11次.所有小鼠末次药后30 min ip给予戊巴比妥钠,观察乳香没药对P450的影响.40只大鼠分为对照组、乳香组、没药组、乳香+没药组,以3.00g·kg-1连续ig给药14d,取肝脏制备各组动物肝微粒体,并用cocktail探针法考察乳香没药对大鼠CYP1 A2,CYP2E1,CYP3 A4的影响.结果:乳香+没药3.15,2.10,1.05 g·kg-1剂量连续给药7d均可使戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠率降低(P ＜0.05,P＜0.01),而单次给药3.15g· kg-1有使戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠率升高的趋势.乳香、没药及乳香+没药混合物组大鼠肝微粒体体外对非那西丁、氯唑沙宗代谢率显著高于对照组,而氨苯砜无明显差异.结论:乳香、没药连续用药均使CYP1A2,CYP2E1活性增强,而对CYP3A4则无显著影响.
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CYP3 A4*1 G依赖的 CYP3 A4内含子10启动的真核表达载体的构建
目的：构建CYP3A4*1G依赖的CYP3A4内含子10启动的真核表达载体，研究CYP3A4*1G依赖的CYP3A4内含子10的启动子功能。方法：以质粒pGEM-CYP3A4为模板扩增出CYP3A4 cDNA，PCR产物经EcoRV、XbaⅠ双酶切后插入到pcDNA3．1／Hygro（＋）的EcoRV、XbaⅠ双酶切位点之间，构建pcDNA3．1-3A4。分别以人基因组DNA和pGEM-CYP3A4质粒DNA为模板，扩增出CYP3A4启动子和CYP3A4内含子10全长（野生型和突变型）序列，插入到pcDNA3．1-3A4的MluⅠ、NheⅠ双酶切位点之间，取代原有的CMV启动子，构建pcDNA3．1-P3A4、pcDNA3．1-W3A4（野生型）和pcDNA3．1-M3A4（突变型）。将质粒转染入HepG2细胞，检测CYP3A4 mRNA表达水平。结果：构建的重组质粒经酶切验证与测序鉴定，插入片段的序列和方向与预期完全一致。与转染pcDNA3．1／Hygro（＋）的HepG2细胞比较，pcDNA3．1-P3A4、pcDNA3．1-W3A4、pcDNA3．1-M3A4转染组细胞CYP3A4 mRNA表达水平均提高（P＜0．05），但 pcDNA3．1-M3A4组表达水平低于 pcDNA3．1-P3A4和 pcDNA3．1-W3A4组（P ＜0．05）。结论：成功构建了CYP3A4*1G依赖的CYP3A4内含子10启动的真核表达载体；CYP3A4内含子10能够启动CYP3A4基因的表达，且存在CYP3A4*1G等位基因依赖性。
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CYP3A4和CYP3A5基因多态性对汉族肾移植患者他克莫司血药浓度的影响
目的:研究CYP3A4* 18B (rs2242480)、CYP3 A5 6989 A/G(rs776746)两个位点的基因多态性对肾移植术后他克莫司血药浓度/校正剂量比值(C/D)的影响,对肾移植患者基因导向的他克莫司个体化给药提供有意义的信息和数据.方法:101名健康志愿者和56例亲体肾移植且随访超过6个月的患者参加本研究,应用基因芯片法检测2个位点的基因型.用均相酶扩大免疫分析法(EMIT)测定术后7d、14 d、1个月、3个月和6个月时血药浓度.比较不同基因型间他克莫司C/D值之间的差异.结果:在101例汉族人群中,CYP3A4、CYP3A5的等位基因频率分别为:23.75％、73.80％.移植术后6个月内,CYP3A5 GG型(*3/*3)的C/D值显著高于AA型(*1/*1)和AG型(*1/*3)(P＜0.05).CYP3A5 AA型与AG型相比较,差异无统计学意义(P＞0.05).CYP3A4 CC型(*1/*1)的C/D值显著高于CT型(*1/*18B)和TT型(*18B/* 18B)(P＜0.05),其中CT型与TT型比较,C/D值差异无统计学意义(P＞0.05) 结论:肾移植患者术后服用他克莫司C/D值与CYP3A4、CYP3A5基因多态性具有显著相关性.
