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寒证大鼠细胞色素P450亚酶的表征及肉桂的调控
目的:考察寒证大鼠肝脏细胞色素P450(CYP450)亚酶的表征特点及热性中药的调控效果.方法:选取知母-石膏-黄柏-龙胆草制备寒性造模药,对SD大鼠诱导21 d后复制寒证模型;另取肉桂提取物对寒性大鼠进行干预,制备观察组;用生理盐水处理为对照组.钙盐沉淀法制备肝脏微粒体,与混合探针药物温孵,用高效液相色谱(HPLC)法测定探针药物的代谢消除百分率,评价CYP450亚酶活性变化.提取肝脏总RNA,实时荧光定量PCR法测定CYP450亚酶的mRNA表达.结果:寒性中药对大鼠CYP3A1酶的活性和mRNA具有显著的抑制作用,热性肉桂具有一定的调控作用,并且这种调控发生在mRNA水平.结论:本研究从多角度系统评价和验证寒证机体CYP450亚酶的表征特点及热性中药的调控效果.
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利血平诱导的急性抑郁模型大鼠体内CYP450亚酶的活性变化
目的:运用Cocktail探针法测定利血平诱导的急性抑郁模型大鼠体内6种细胞色素P450(CYP450)亚酶活性变化,从药物代谢相互作用的角度探寻抑郁症的发病机制.方法:建立利血平诱导的急性抑郁模型,大鼠随机分为空白组(记为A组),模型组(记为C组)和西药文拉法辛组(记为H组),适应1星期后,H组连续给药2周,A组和C组给予清水2周,第21天C组和H组按4 mg·kg-1腹腔注射利血平注射剂,A组注射等体积生理盐水,第22天禁食不禁水12 h,第23天各组大鼠按10 mL·kg-1灌胃给予混合探针药物.选取茶碱、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲、右美沙芬、奥美拉唑以及咪达唑仑作为大鼠CYP1 A2,CYP2C6,CYP2D1,CYP2D2,CYP2E1和CYP3 A2的探针底物,采用LC-MS/MS测定大鼠体内6种混合探针的血药浓度,计算药动学参数.结果:造模后甲苯磺丁脲在大鼠体内浓度显著升高、代谢减慢;咪达唑仑在大鼠体内浓度显著降低、代谢加快.给予抗抑郁文拉法辛后,茶碱、氯唑沙宗和咪达唑仑在大鼠体内浓度显著升高、代谢减慢.结论:利血平诱导的急性抑郁模型状态对大鼠CYP2D1和CYP2D2有中强抑制作用,对CYP3A2有中强诱导作用;给予文拉法辛后对模型大鼠CYP1A2,CYP2C6,CYP2E1,CYP3A2为中强抑制作用.
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何首乌水提物对大鼠肝脏CYP1A2,CYP2E1酶活性及mRNA表达抑制作用研究
大鼠连续灌胃不同剂量的何首乌水提物(1,10g·kg-1)7 d,取肝脏制备肝微粒体,分别用Cocktail体外孵育法和实时荧光定量PCR技术观察何首乌水提物对大鼠肝脏主要CYP450酶活性及mRNA表达的影响.与空白对照组相比,1,10g·kg-1何首乌水提物组大鼠肝脏CYP2E1酶活性和mRNA的表达均受到明显抑制(CYP2E1酶活性,P＜0.01;CYP2E1的mRNA表达1 g·kg-1组P＜0.05,10 g·kg-1组P＜0.01),CYP3A1酶活性虽显示明显升高(P＜0.01),但mRNA的表达没有显著变化;10 g·kg-1何首乌水提物组大鼠肝脏CYP1A2酶活性和mRNA的表达受到明显抑制(P＜0.01).
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决明子水提液对大鼠肝脏CYP450酶的影响
该文研究决明子水提液对大鼠肝脏CYP450酶酶活性、mRNA及蛋白表达水平的影响.取SD大鼠,口服灌胃受试药物后,处死,用冰冷生理盐水灌流肝脏,提取大鼠肝脏微粒体、肝脏总RNA和总蛋白,采用Cocktail体外孵育法结合液质联用(LC-MS)技术对大鼠肝脏中CYP1 A2,2B1,2C11,2D2,2E1,3A1各亚酶的酶活性进行测定,并应用荧光定量PCR技术和Western blot对上述亚型的mRNA和蛋白表达水平进行检测.结果表明,酶活性方面,决明子水提液组与空白组比较可明显诱导CYP1 A2,2B1,2C11,2D2,2E1,3A1的酶活性,其中决明子低剂量组对CYP2D2有明显的抑制作用,中、高剂量组对CYP2D2有明显的诱导作用,且都呈剂量依赖性增加,但对CYP3A1的诱导不呈剂量依赖性;mRNA表达方面,决明子水提液对CYP1 A2,2C11,2D2,2E1mRNA的表达具有显著诱导作用,其中对CYP1 A2,2D2,2E1诱导作用呈剂量依赖性,与酶活性水平具有一致性,对CYP2B1,3A1没有明显作用;蛋白表达方面,决明子水提液对CYP2C11,2E1的表达也具有诱导作用,但没有统计学差异.决明子水提液对CYP450同工酶不同程度诱导或抑制作用,特别是对于CYP2C11,2E1亚型酶,酶活性与mRNA,蛋白表达水平具有一致性,提示当与这些酶底物合并用药时,尤其是与CYP2C11,2E1代谢有关的药物合用时,应充分考虑到潜在的有益和不利的药物相互作用.
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黄连黄芩及配伍诱导对大鼠肝微粒体5种CYP450亚酶活性的影响
探讨黄连和黄芩配伍代谢性相互作用的机制.大鼠连续ig黄连、黄芩及药对提取物7d诱导肝药酶后,采用cocktail探针底物与肝微粒体体外温孵法,通过HPLC同时检测肝微粒体中5种探针底物代谢消除率,评价各给药组对大鼠肝微粒体CYP450酶活性的影响.与空白组相比,黄连对CYP2D6,CYP1A2呈显著抑制作用；黄芩对CYP1 A2,CYP2E1,CYP2C9具有显著抑制作用.黄连、黄芩按1∶1配伍后仅对CYP1 A2显示抑制作用,对CYP2D6,CYP3A4则呈显著的激活作用；而黄连、黄芩按2∶1配伍后对代谢酶的激活作用消失,表现为对CYP1A2,CYP2C9的显著抑制.结果表明黄连与黄芩对P450酶主要表现为抑制作用,二者按一定比例配伍后作用特点发生改变,呈现出激活和抑制的双重性,且与配伍比例相关.推测黄连与黄芩配伍对代谢酶的抑制和诱导作用是其发挥减毒增效作用的原因之一.
关键词： 黄连 黄芩 配伍 细胞色素P450亚酶 Cocktail探针法 鼠肝微粒体 -
热毒宁注射液对大鼠肝脏CYP450酶的影响
研究热毒宁注射液对大鼠肝脏CYP450酶酶活性及其mRNA表达水平的影响.将SD大鼠腹腔注射7d后,处死,制备大鼠的肝微粒体,与探针药物共孵育,利用LC/MS法测定各同工酶特异性底物在大鼠肝微粒的代谢产物的生成量,间接反映各同工酶的活性.应用荧光定量PCR技术考察热毒宁注射液对大鼠肝脏CYP450酶mRNA表达水平的影响.结果显示,酶活性方面,热毒宁注射液与空白组比较可抑制CYP2B1,2C12,2C13,2D2的酶活性,诱导CYP3A1的酶活性,对CYP1A2酶活性无明显影响.mRNA表达方面,热毒宁注射液对CYP2B1,3A1,1A2,2C11,2D1,2E1 mRNA的表达具有诱导作用.通过对上述结果分析,可以看出热毒宁注射液在酶活性和mRNA水平均对CYP3A1具有显著的诱导作用,与大环内酯类抗生素合用时可能会出现不良反应;对CYP2B1,2C12,2C13,2D2的酶活性均具有抑制作用,与其他药物联合用药时要充分考虑可能出现的药物相互作用或潜在风险.
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环黄芪醇连续灌胃对大鼠肝脏P450酶活性的影响
目的:评价环黄芪醇连续灌胃诱导后对大鼠肝脏CYP450亚酶活性的影响.方法:大鼠连续7d灌胃环黄芪醇溶液(40 mg·kg-1 ·d-1)诱导肝药酶后,采用cocktail探针底物与大鼠肝微粒体体外温孵法,通过HPLC同时测定5种探针药物美托洛尔、氨苯砜、非那西丁、氯唑沙宗和甲苯磺丁脲的代谢消除率,评价环黄芪醇对CYP2D6,CYP3A4,CPY2A1,CPY2E1和CPY2C9亚酶活性的影响.结果:环黄芪醇对CYP2E1亚酶显示出显著的诱导作用;对CYP3 A4则呈显著的抑制作用,但对CYP2D6,CYPl A2和CYP2C9亚酶未表现出明显的影响;进一步测得其对CYP3 A4的半数抑制浓度IC50为12.13 μmol·L-1,抑制类型为竞争性抑制.结论:环黄芪醇对C YP3 A4亚酶具有明显的抑制作用,对CYP2E1亚酶显示出显著的诱导作用.
关键词： 环黄芪醇 肝脏CYP450亚酶 Cocktail探针法 抑制类型 大鼠 -
毛冬青胶囊对大鼠体内细胞色素P450代谢活性的影响
目的：采用Cocktail探针药物法研究毛冬青胶囊对大鼠CYP1A2、CYP3A2、CYP2C6、CYP2D1、CYP2D2和CYP2E1体内代谢活性的影响。方法：分别以茶碱、咪达唑仑、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、右美沙芬和氯唑沙宗作为探针底物，将大鼠随机分为3组：空白对照组、毛冬青的低剂量组和高剂量组。低、高剂量组每日分别灌胃给予毛冬青胶囊1.8、3.6 g·kg-1，空白对照组每日给予与低剂量组等体积的生理盐水，各组均为1次/天，连续14 d。各组分别于第15天给予Cocktail探针药物，于给药前、后不同时间点取血，用LC-MS/MS检测各探针药物的血药浓度，计算药代动力学参数。结果：茶碱低剂量组cmax、AUC0-t有极显著差异（P≤0.01）；甲苯磺丁脲高剂量组和氯唑沙宗低剂量组AUC0-t有显著差异（P≤0.05）；其他无统计学差异。结论：毛冬青胶囊对大鼠体内CYP2C6和CYP1A2有强诱导作用，对CYP2E1有中强诱导作用，其他亚型基本无影响。
