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中药天癸方对雄激素致不孕大鼠下丘脑Leptin 受体及神经肽Y mRNA的影响
目的:从基因转录水平探讨中药天癸方对雄激素致不孕大鼠(ASR)肥胖及无排卵的影响.方法:采用α-32 P标记瘦素(leptin)受体(OB-R)及神经肽Y(NPY)寡核苷酸探针原位杂交、放射自显影技术结合图像分析,观察中药治疗前后下丘脑弓状核(ARC)两种物质mRNA的表达变化.结果:ASR中ARC的NPY基因表达水平明显增加(P＜0.01),OB-R基因表达水平明显降低(P＜0.01),ASR呈肥胖、无排卵状态.用中药天癸方治疗后,NPY基因表达下降,OB-R基因表达上升至正常大鼠水平.结论:ASR肥胖及无排卵可能与NPY mRNA过度表达、OB-R mRNA数目异常有关,中药可调节NPY和OB-R mRNA表达而发挥减肥及促排卵作用.
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瘦素受体在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌相关基因的相关性分析
目的 探讨瘦素受体(LEPR)在乳腺癌细胞系以及正常乳腺和乳腺癌标本中的表达情况,并分析LEPR的表达与雌激素受体(ER)、E-钙黏附分子(E-Cad)、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达的相关性.方法 采用RT-PCR和Western blotting方法检测不同的乳腺癌细胞系中LEPR的表达情况.提取45例乳腺癌以及15例正常乳腺组织标本的RNA(其中5例为配对的乳腺标本),在5例配对的乳腺癌及其正常对照中用RT-PCR的方法检测了LEPR的表达,并同时在以上所有的乳腺癌以及正常乳腺组织标本中通过实时定量RT-PCR检测LEPR、ER、E-Cad,c-Myc和 cyclin D1的表达情况.利用SPSS 10.0统计学软件,分析LEPR与ER、E-Cad、c-Myc、cyclin D1表达的相关性.结果 在7种乳腺癌细胞系中均检测到了LEPR的RNA和蛋白.通过配对的乳腺癌标本,发现LEPR在乳腺癌标本中的表达高于远端正常组织.通过统计学分析发现,在正常乳腺和乳腺癌组织中LEPR的表达与ER表达呈正相关,在乳腺癌组织中与E-Cad、c-Myc有统计学相关性,与cyclin D1无统计学相关性.结论 LEPR在乳腺癌细胞系中表达增高,且LEPR的表达在乳腺癌中与一些乳腺癌发生发展密切相关的基因的表达存在相关性.
关键词： leptin受体 乳腺癌 反转录-聚合酶链式反应 免疫印迹法 人 -
Leptin及其受体在急性髓系白血病中的研究
Leptin是一种由肥胖基因编码的分泌型蛋白质,与其受体结合后具有广泛的生物学效应.leptin的基本功能是调节能量代谢和摄食,主要由脂肪细胞产生,而脂肪细胞大量存在于骨髓,是造血微环境的基质细胞成分.Leptin及其受体不仅促进正常造血干细胞的增殖和分化,而且能够促进白血病细胞的增殖和活性.Leptin受体(leptin receptor,LEPR,又称OB-R)在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)、急性淋巴细胞白血病和慢性髓系白血病的细胞上均有表达.此外,leptin在体内能够通过促进微血管的形成而促进白血病细胞的增殖.所有这些研究发现提示leptin及其受体在白血病的发生发展中起了一定的作用,阻断leptin与leptin受体的作用可能成为某些白血病治疗的靶点.本文就leptin及其受体的生物学特性、leptin及其受体与正常造血、leptin及其受体与AML的研究进展做一综述.
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终末期肾病患者外周血单个核细胞瘦素受体mRNA的表达及其与细胞因子水平的关系
目的探讨终末期肾病(ESRD)患者外周血单个核细胞(PBMC)表面2种瘦素(leptin)受体(Ob-R)信使核糖核苷酸(mRNA)的表达及其与循环中leptin和肿瘤坏死因子-α水平(TNF-α)的关系,以及血液透析患者高细胞因子血症的可能发生机制.方法选择同济大学附属东方医院肾内科ESRD患者20例(其中维持性血液透析亚组12例,非透析亚组8例)和正常人10例,检测其血浆leptin和TNF-α水平;用RT-PCR方法检测PBMC表面两种leptin受体:长型受体(Ob-Rb)和短型受体(Ob-Ra)的相对表达水平.结果ESRD患者血浆leptin、TNF水平明显高于正常人群(P＜0.01;P＜0.05),但血液透析亚组和非透析亚组两者之间差异无显著性.ESRD患者血液透析亚组和非透析亚组血浆leptin水平均与TNF-α呈正相关(r=0.688,P＜0.05;r=.801,P＜0.001).所有研究对象PBMC均有Ob-Ra和Ob-Rb mRNA的表达,而Ob Ra的平均表达水平约为Ob-Rb的7倍(P＜0.001).ESRD患者Ob-Ra和Ob-RbmRNA的表达均高于正常对照组(P＜0.001).ESRD患者血浆leptin、TNF-α水平与Ob-Ra mRNA、Ob-Rb mRNA的相对表达量呈显著的正相关(P＜0.05).结论 ESRD患者外周血PBMC表面两种leptin受体表达水平均增高,其中Ob-Ra占优势;leptin水平与促炎症因子的关系值得进一步研究.
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Leptin受体在人胚胎皮肤附件发育过程中的表达特征
目的:探讨Leptin受体在人胚胎皮肤形成和附件发育过程中的表达特点及可能的生物学意义.方法:取8～38周龄人胚胎的背部全层皮肤,制成石蜡切片,进行常规组织学观察和免疫组织化学染色(SP法),动态观察皮肤形成过程和附件发育过程中Leptin受体的表达特点.结果:胚胎8周开始,胎儿周皮已有Leptin受体表达,随后逐渐增强.至胚胎11～16周表达强,尤其在附件原基中呈局灶性表达;胚胎22周后,Leptin受体的表达逐渐减弱,至胚胎31周后仅在皮脂腺中表达.结论:Leptin可能通过其受体参与皮肤附件的发育过程.
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游离脂肪酸对大鼠胰岛细胞Leptin受体的影响
目的探讨游离脂肪酸是否会影响胰岛细胞Leptin受体的基因和蛋白表达及酪氨酸磷酸化,进而导致胰岛素抵抗及葡萄糖代谢的异常.方法分离、培养新生SD大鼠胰岛细胞,分别与软脂酸(0.25mmol/L)或油酸(0.125mmol/L)孵育12、24、36h,提取蛋白后用Western印迹法检测Leptin受体(OB-R)的蛋白水平,用RT-PCR检测胰岛细胞内OB-R RNA含量的变化,用免疫沉淀法检测OB-R的酪氨酸磷酸化程度.结果软脂酸和油酸孵育后大鼠胰岛细胞OB-R的蛋白表达水平在孵育24、36h后均下调(P＜0.05);Leptin受体的RNA水平和酪氨酸磷酸化程度在各个时间点均下调(P＜0.05).结论游离脂肪酸可对OB-R的基因和蛋白表达水平及磷酸化程度产生一定的抑制作用,这种抑制作用可能是游离脂肪酸导致胰岛素抵抗的因素之一.
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Leptin及其受体在非酒精性脂肪性肝炎患者肝组织中的表达
目的 探讨细胞因子Leptin及其受体在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者肝组织中的表达状况及其在NASH发病机制中的意义.方法 应用免疫组织化学及原位分子杂交方法 ,对59例不同病变程度的NASH穿刺肝组织中Leptin及其受体Ob-R、Ob-Rb和Ob-Ra的表达进行检测,观察表达部位和表达量的变化,分析其与NASH病变程度之间的关系.结果 NASH肝组织内,Leptin主要表达于肝腺泡3带脂变区域及纤维化明显的汇管区及其周围的库普费细胞(KC)、单个核细胞(MNC)、肝星状细胞(HSC)内;Leptin mRNA多表达于肝腺泡3带肝细胞内;Leptin受体的定位和分布与Leptin大体一致,其中Ob-Rb表达量较Ob-Ra多;Leptin及其受体在NASH纤维化分期(S)组和脂变分级(F)组组间的表达差异性明显(均P＜0.05).结论 Leptin及其受体与NASH肝细胞脂变发生及程度密切相关,并可能作为重要的调节因子参与NASH肝纤维化过程.
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Leptin及其受体与肝病
Leptin为肥胖基因(ob)编码产物,是脂肪细胞分泌的蛋白质类激素,在调节能量平衡、摄食行为起重要作用.Leptin 受体广泛分布在许多组织.Leptin和肝纤维化发生的关系引起关注.更多的证据表明在肝病中包括慢性肝炎、酒精性肝病和非酒精性肝病,Leptin是一促进因子.尽管一些机制仍未阐明,研究证明Leptin在肝病中起了重要作用.
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食源性肥胖对大鼠免疫功能的影响
目的:利用食源性肥胖(DIO)大鼠模型研究肥胖对脾脏CD4+和CD8+T淋巴细胞含量的影响.并探讨其是否与脾细胞内JAK/STAT通路相关联.方法:(1)通过高能饲料喂养建立DIO大鼠模型.(2)利用流式细胞术检测大鼠脾脏CD4+和CD8T淋巴细胞含量.(3)利用Western blot检测大鼠淋巴细胞长型的leptin受体(Ob-Rb)以及活化的STAT3蛋白的表达.结果:(1)高能饲料喂养的大鼠体重高于普通饲料喂养大鼠,发育为DIO大鼠.(2)DIO大鼠脾脏CD8+T 淋巴细胞含量高于肥胖抵抗(DR)组以及对照组的大鼠,CD4+/CD8+细胞比值低于DR组以及对照组的大鼠.(3)各组大鼠脾脏淋巴细胞Ob-Rb以及活化的STAT3蛋白的表达没有统计学差异.结论:DIO大鼠脾脏CD8+T淋巴细胞含量高于非肥胖大鼠,CD4+/CD8+细胞比值低于非肥胖大鼠,其处于免疫抑制状态;这一变化与DIO大鼠脾脏淋巴细胞的Ob-Rb-STAT3信号转导通路并没有直接的关系.
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Leptin促进乳腺癌发生的机制研究
据世界卫生组织和国际癌症研究中心近的统计表明,每年全球新发女性乳腺癌病例达1 15万,占全球女性恶性肿瘤发病的22.7％;死亡41万,占所有女性恶性肿瘤死亡的14.1％,占所有女性死亡的1.6％[1-2].在我国,乳腺癌同样位居女性恶性肿瘤之首,其发病率逐年上升,仅次于子宫颈癌,并呈年轻化趋势.乳腺癌的发病机制目前还不是十分的清楚,一直以来,肥胖症被认为是乳腺癌发生的一个重要危险因素[3].Leptin作为肥胖基因的产物,近年来的研究表明它和乳腺癌的发生有着千丝万缕的联系,它可作为一种独立危险因素参与乳腺癌的形成过程[4-5].
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实验性肝硬化中Leptin及其受体的检测与表达意义
目的观察Leptin在实验性肝硬化大鼠血清水平及其受体在肝脏免疫组化表达和定位情况,探讨Leptin及其受体在实验性肝硬化发生病理机制中的作用.方法采用硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)腹腔注射诱导肝硬化动物模型,同时设立正常对照组;测量大鼠体长、体重、Lee'指数,分别测定血清血脂水平;采用酶联免疫分析法(enzyme linked immunosorbant assay,ELISA)检测血清Leptin含量;免疫组化与计算机图像分析技术观察Leptin受体在肝硬化组、正常对照组的表达和定位特点;各组间进行统计学分析.结果肝硬化动物模型复制成功.肝硬化组血清Leptin增高,与对照组比较差异有非常显著性(t=4.338,P＜0.01);肝硬化组Leptin受体表达增高,与正常组比较差异有非常显著性(t=8.104,P＜0.01);肝硬化组血清Leptin水平与胆固醇(TC)正相关(r=0.918,P＜0.05).肝硬化组血清Leptin水平与Leptin受体灰度值呈负相关(r=0.-0.80,P＜0.01).结论Leptin受体在肝硬化的肝脏中表达异常升高,尤其见于再生的肝细胞及窦内皮细胞等,提示Leptin参与肝纤维化的发生.
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Leptin受体在实验性脂肪肝及肝硬化中的基因表达情况
目的 观察Leptin受体(OB-R)在实验性脂肪肝与肝硬化大鼠中肝脏mRNA的表达情况,探讨OB-R在实验性脂肪肝与肝硬化发生和发展中的作用.方法 (1)建立实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ RT-PCR)技术检测OB-R的mRNA表达水平的方法 及标准曲线;(2)采用FQ RT-PC检测非酒精性脂肪肝组、肝硬化组及对照组中OB-R的mRNA表达水平,从定量的角度研究OB-R及OB-R mRNA与非酒精性脂肪肝和肝硬化的关系以及它们二者的关系,以探讨表达与非酒精性脂肪肝、肝硬化的相关性及其在实验性脂肪肝与肝硬化发生和发展中的作用.结果 非酒精性脂肪肝组、肝硬化组和对照组均有OB-R的mRNA表达,三者比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 OB-R的mRNA在非酒精性脂肪肝、肝硬化和对照组中均有表达,但其可能在脂肪肝和肝硬化的发生和发展中并没有起到直接作用,可能还有其他因子的共同参与.提示OB-R可能参与了肝脂肪变性形成,促进肝纤维化的发生.
关键词： leptin受体 脂肪肝 肝硬化 实时荧光定量聚合酶链反应 -
Leptin受体在人牙髓干细胞中表达的实验研究
目的:研究体外培养人牙髓干细胞表型特征及生物学性状,检测Leptin受体在牙髓干细胞表面的表达.方法:采用组织块法和酶消化法分离培养人牙髓十细胞;免疫组化法、免疫荧光法检测细胞表面分子的表达;体外诱导分化实验检测细胞多向分化能力.免疫组化法检测Leptin受体在人牙髓干细胞表面的表达.结果:分离获得的牙髓干细胞波形丝蛋白和CD146表达阳性,具有向脂肪细胞和成骨细胞分化的潜能;Leptin受体在牙髓干细胞表面阳性表达.结论:分离培养的牙髓干细胞具有干细胞的表型特征及生物学性状,Leptin受体可表达于牙髓干细胞.
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Leptin对Leptin受体在GH3细胞中表达的影响
目的:观察Leptin受体(OB-R)在大鼠GH3细胞中的表达,研究Leptin对GH3细胞leptin受体表达的影响. 方法:用RT-PCR方法检测Leptin受体3种亚型在大鼠GH3细胞中的表达,半定量PCR检测其表达的变化. 结果:RT-PCR检测结果显示在大鼠GH3细胞上有Leptin受体3种亚型的表达,包括通用型受体OB-R,短型受体OB-Ra及长型受体OB-Rb,且leptin可上调大鼠GH3细胞Leptin受体mRNA的表达,其受体OB-Ra和OB-Rb mRNA表达分别增加至(154±11)%和(188±9)%. 结论:Leptin可能通过其在GH3细胞上的相应受体直接调控GH3细胞的功能,影响GH3细胞的生长、增殖和生长激素的分泌.
