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刀豆蛋白A联合淋巴细胞对卵巢癌细胞SKOV3影响观察
目的:体外研究刀豆蛋白A(Concanavalin A,Con A)联合淋巴细胞对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞形态、活力、凋亡以及顺铂敏感性的影响.方法:应用密度梯度离心法分离健康成人新鲜血中的单个核细胞,培养3～5 d待单核细胞完全贴壁后分离出悬浮的淋巴细胞,与SKOV3细胞混合培养,并设对照组(未处理的SKOV3)、实验组1(SKOV3培养体系中仅加入5μg/mL Con A)、实验组2(SKOV3和淋巴细胞混合培养)和实验组3(SKOV3和淋巴细胞混合培养体系中加入5 μg/mL Con A).培养7d后将SKOV3分离出继续培养,并进行以下实验,在光学显微镜下观察细胞形态变化;CCK8检测24和48 h细胞活性;流式细胞术检测24和48 h细胞凋亡情况;用浓度0和60 umol/L顺铂处理SKOV3细胞24和48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率以判断细胞对顺铂的敏感性.结果:与对照组比较,实验组1和实验组2中细胞无明显改变,而实验组3中SKOV3与淋巴细胞混合培养后发生明显改变,如细胞突起减少,细胞变圆.与对照组比较,实验组1中24和48 h细胞存活率分别为(105.68±7.12)％(z=-1.256,P=0.30)和(111.90±8.28)％(z=-1.766,P=0.13),实验组2分别为(101.05±5.92)％(z=-0.215,P=0.79)和(109.72±6.54)％(z=-1.766,P=0.13),差异均无统计学意义;而实验组3分别为(25.08±7.71)％(z=-2.087,P=0.004)和(14.6±4.41)％(z=-3.431,P=0.001),差异有统计学意义.与对照组比较,实验组1中24和48 h细胞凋亡率分别为(4.43±1.49)％(z=-2.78,P=0.61)和(10.95±1.09)％(z=-1.982,P=0.08),实验组2分别为(4.79±0.83)％(z=-1.349,P=0.28)和(10.59±1.03)％(z=-1.349,P=0.28),差异均无统计学意义;实验组3分别为(13.88±1.00)％(z=-2.247,P=0.003)和(21.37±2.35)％(z=-2.137,P=0.006),差异有统计学意义.顺铂处理各组SKOV3细胞后,与对照组比较,实验组1中24和48 h细胞凋亡率分别为(11.25±1.86)％(z=-0.361,P=0.59)和(33.66±4.96)％(z=-0.536,P=0.54),实验组2分别为(10.32±0.14)％(z=-0.225,P=0.65)和(31.56±6.21)％(z=-0.163,P=0.83),差异均无统计学意义;实验组3分别为(41.99±6.66)％(z=-2.14,P=0.03)和(66.5±2.55)％(z=-1.909,P=0.04),差异有统计学意义.结论:Con A联合淋巴细胞可显著改变SKOV3细胞形态,降低细胞活力,促进细胞凋亡,并增加细胞对顺铂的敏感性,而Con A或淋巴细胞单独处理并无此效应.
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壳聚糖温敏水凝胶对PDLCs增殖的影响
目的 探讨壳聚糖/β-甘油磷酸钠(CS/β-GP)温敏水凝胶对牙周膜细胞(HPDLCs)的增殖的影响.方法 用CS与β-GP制成温敏凝胶,将体外分离培养的HPDLCs与CS/β-GP温敏水凝胶共培养,HE染色观察细胞在凝胶内的生长情况,并通过CCK8测试法研究浸提液对HPDLCs的增殖的影响.结果 扫描电镜及HE染色观察显示,CS/β-GP温敏水凝胶适宜细胞生长.不同浓度的CS/α,β-GP浸提液在不同时间段内均能促进HPDLCs的增殖.结论 CS/β-GP温敏水凝胶具有温敏性并能促进PDLCs的增殖可以作为牙周组织工程的良好载体.
关键词： CS/β-GP)温敏水凝胶 PDLCs CCK8 -
复尔康注射液对肝癌HepG2细胞凋亡和VEGF表达的影响
目的 研究复尔康注射液对肝癌HepG2细胞凋亡和VEGF表达的影响.方法 复尔康注射液干预HepG2细胞48 h后,CCK8试剂盒检测细胞的增殖活性,Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡率,免疫组化SABC法检测细胞VEGF的表达.结果 复尔康注射液可抑制HepG2细胞的增殖,IC50值为(29.63±1.22)mg/L.复尔康注射液5、10 mg/L干预HepG2细胞48h后,Hoechst 33258荧光染色可见核浓缩、核碎裂等凋亡形态学改变,Annexin V/PI双染法检测显示细胞凋亡率明显升高,免疫组化SABC法检测显示VEGF的表达明显减弱,且呈现出一定的量效关系.结论 复尔康注射液可诱导HepG2细胞凋亡,减弱VEGF的表达.
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“肺肠合病”模型大鼠肺、肠CGRP与CCK8表达的实验研究
目的:通过观察模型大鼠肺、结肠组织中降钙素基因相关肽(CGRP)与八肽胆囊收缩素(CCK8)表达量的变化,从而探讨“肺与大肠相表里”的机制.方法:实验设空白对照组、肺肠合病组(过敏性哮喘合便秘)共两组.用免疫组化方法测定CGRP与CCK8的表达.结果:在肺肠合病状态下,与空白对照组比较,大鼠肺、结肠组织中CGRP与CCK8的表达呈显著性差异(P＜0.01).结论:在肺肠合病状态下,肺、结肠组织中CGRP与CCK8的表达均发生了变化,提示在上述病理模型情况下,说明在上述病理模型情况下肺与大肠之间存在一定的联系,提供了部分支持“肺与大肠相表里”的实验依据.
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CCK8和PGE2对CVB体外攻击人外周血pDC的调控
目的:了解八肽胆囊收缩素(CCK8)是否参与柯萨奇病毒B(CVB)体外攻击人外周血浆细胞样树突状细胞(pDC)的调控.方法:RT-PCR和IF检测CCK受体的表达;FCM分析协同刺激分子的变化,用ELISA和RT-PCR检测IFN-α的分泌.结果:CVB体外攻击pDC,CCK1R和CCK2R 的表达增加;CCK8 可以抑制CD80、CD86 和HLA-DR表达的增高,而PGE2可以进一步促进CD80、CD86和HLA-DR的表达;同时,CCK8抑制CVB攻击后IFN-α的分泌,而PGE2进一步促进IFN-α的分泌.结论:CCK8和PGE2可双向调控CVB体外攻击人外周血pDC的免疫应答.
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胆囊收缩素对实验性神经细胞老化过程中脂褐素的影响
目的观察CCK8对实验性神经细胞老化过程中脂褐素的影响.方法采用NBA2细胞无血清培养建立神经细胞老化实验模型,以显微荧光分光光度仪测定单个细胞内脂褐素自发荧光值作为细胞老化指标,观察CCK8对细胞老化过程的影响.结果在无血清培养条件下,细胞内脂褐素荧光值随培养时间的延长而累积性增加(P＜0.01).将CCK8加入无血清培养液,CCK8作用10 d和15 d都可显著降低细胞内脂褐素荧光值(P＜0.01).结论在无血清培养条件下,NBA2细胞由分裂增殖变为分化成熟老化,反映了神经细胞的老化过程.而CCK8可以延缓细胞的老化进程.
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胆囊收缩素对实验性神经细胞老化过程中微突起影响的超微结构研究
目的探讨胆囊收缩素(CCK8)对实验性神经细胞老化过程中细胞微突起超微结构的影响.方法采用NBA2细胞无血清培养建立神经细胞老化实验模型.以扫描电子显微镜观察的细胞表面结节状物的大小以及微突起数目作为细胞老化指标,观察CCK8对细胞老化过程的影响.结果①使细胞表面结节状物变小.②增加细胞突起终末的微突起数量.结论CCKa可以延缓实验性神经细胞的老化进程值得进-步研究.
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从肺肠病理模型CCK8、CGRP、SP、VIP表达探讨“肺与大肠相表里”
目的 通过肠病(便秘)、肺肠合病(过敏性哮喘合并便秘)模型大鼠五脏即心、肝、脾、肺、肾组织中CCK8、CGRP、SP、VIP表达探讨“肺与大肠相表里”理论.方法 制备肠病和肺肠合病大鼠模型,免疫组织化学法观察五脏组织中CCK8、CGRP、SP、VIP的表达.结果 虽然CCK8、CGRP、SP、VIP染色在五脏中均有一定程度的改变,但经统计发现,与空白对照组比较,肠病组大鼠肺组织中CCK8、VIP有差异(P＜0.01),CGRP、SP有差异(P＜0.05)；与空白对照组比较,肺肠合病组大鼠肺组织中CCK8、CGRP、SP、VIP均有差异(P＜0.01)；与肠病组比较,肺肠合病组大鼠肺组织CCK8、CGRP、VIP均有差异(P＜0.01),SP有差异(P＜0.05)；而心、肝、脾、肾各组之间比较CCK8、CGRP、SP、VIP表达无差异(P＞0.05).结论 提示在肠病和肺肠合病情况下五脏中大肠与肺之间存在一定的联系,但与其它四脏并无直接联系,说明肺与大肠之间存在互相影响的特异性.
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白藜芦醇对大鼠CBRH-7919肝癌细胞凋亡的影响
目的:观察白藜芦醇对大鼠CBRH-7919肝癌细胞的影响.方法:不同浓度的白藜芦醇处理大鼠CBRH-7919肝癌细胞24、48 h和72h,倒置显微镜和电镜观察细胞变化,CCK8法观测其存活率,免疫印迹检测细胞中Bcl-2、Erk蛋白变化.结果:细胞存活率,具有药物浓度和时间依赖性;随药物浓度的增加,细胞数量减少,悬浮死亡细胞增多;Bcl-2、Erk蛋白随药物浓度的增加,蛋白表达量降低.结论:白黎芦醇对大鼠CBRH-7919肝癌细胞增殖具有明显的抑制作用,可能与其抑制Bcl-2和Erk的表达而诱导细胞凋亡有关.
关键词： 白藜芦醇 CCK8 B细胞淋巴瘤/白血病-2 细胞外调节蛋白激酶 -
氟对体外培养大鼠成釉细胞活性和细胞凋亡的影响
目的:观察氟对体外培养的大鼠成釉细胞活性的影响,为探讨氟斑牙的形成机制提供依据.方法:取对数生长期的大鼠成釉细胞,在培养液中加入浓度为0、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mmol/L的NaF溶液,培养24、48、72 h后,采用CCK-8检测各组细胞的活性.荧光显微镜下观察成釉细胞核形态的变化,流式细胞术分析氟对细胞凋亡的影响.采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:①NaF浓度为0.4、0.8 mmol/L时,对成釉细胞有促增殖作用;NaF浓度为1.6、3.2、6.4 mmol/L时,对成釉细胞的活性有抑制作用,随着NaF浓度的增加,对细胞的抑制作用也逐渐增强,并且这种双向调节作用呈时间依赖性.②NaF浓度为0.4、0.8 mmol/L时,鲜见核破碎;NaF浓度为1.6、3.2 mmol/L时,存在核破碎,并且随着浓度的提高,核破碎的数量随之增加,即1.6 mmol/L浓度的NaF可引起成釉细胞凋亡,随着浓度的增加,细胞凋亡的数量随之增加.结论:①氟对体外培养成釉细胞的增殖具有双向调节作用,即低浓度促进,高浓度抑制.②浓度超过1.6 mmol/L时,NaF诱导成釉细胞凋亡.
关键词： 氟 成釉细胞 CCK8 流式细胞术 Hoechst 33258荧光染色 -
臭牡丹地上部分抗肿瘤活性的筛选
目的:对臭牡丹地上部分所含的化合物进行抗肿瘤活性的筛选.方法:采用70％乙醇加热回流提取臭牡丹的地上部分,通过石油醚、二氯甲烷、正丁醇依次萃取和大孔吸附树脂、硅胶柱色谱进行分离纯化;采用液质联用技术对臭牡丹地上部分的粗分化合物进行了分析;采用MTT法对臭牡丹地上部分的不同萃取物质进行体外抗肿瘤活性的筛选;采用CCK8法检测毛蕊花糖苷和粗分物对A549细胞增殖的影响.结果:通过液质分析结果和文献比较,确定粗分物中是以毛蕊花糖苷为主的苯乙醇苷类化合物;95％乙醇洗脱部分的IC50为0.019mg/mL,二氯甲烷部分、25％乙醇及50％乙醇的IC50分别为0.039、0.180和0.181mg/mL,水部分的IC50不存在;毛蕊花糖苷的CC50值约为0.22mg/mL,粗分物A的CC50值约为1.3mg/mL.结论:MTT结果显示,95％乙醇部分抗肿瘤活性好,其次为二氯甲烷,25％乙醇与50％乙醇第三,水部分基本没作用;CCK8结果显示,毛蕊花糖苷对A549细胞增殖有明显抑制作用,且具有浓度依赖性;粗分物A对A549细胞有低浓度促进、高浓度抑制的作用.
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复尔康注射液诱导肝癌HepG2细胞凋亡的研究
目的:研究青蒿油制剂复尔康注射液对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响.方法: CCK8试剂盒(cell counting kit-8)检测复尔康注射液对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用;Hoechst33258荧光染色观察HepG2细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测HepG2细胞的凋亡率.结果:复尔康注射液可抑制HepG2细胞的增殖,IC50值为29.63 ± 1.22μg/ml;复尔康注射液0.3125～10μg/ml作用48h后,Hoechst33258荧光染色均可见HepG2细胞出现核浓缩、核碎裂等细胞凋亡形态学改变,且呈现出一定的剂量依赖性;AnnexinV/PI双染法检测显示,不同浓度的复尔康注射液均可诱导HepG2细胞凋亡,凋亡率分别为4.71% ± 0.71%、10.05% ± 0.67%、15.08% ± 1.16%、23.59% ± 1.65%、32.30% ± 1.87%、42.09% ±1.43%.结论:复尔康注射液可抑制HepG2细胞的增殖,诱导其凋亡.
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大鼠大脑皮质胆囊收缩素受体的体外结合分析法研究
用Bolton-Hunter试剂联结法标记胆囊收缩素(CCK8),得125I-BH-CCK8,其比放射性为3.4TBq/mmol,放射化学纯度大于96%.取其与自制的大鼠大脑皮质细胞膜进行受体放射分析,发现标记配体与大鼠大脑皮质CCK受体的结合具有温度和时间依赖性,可饱和性,可逆性及特异性.经Scatchard分析获大鼠大脑皮质细胞膜CCK受体Kd值为1.098nmol/L,Bmax为197.5fmol/mg蛋白.
关键词： CCK8 CCK受体 Bolton-Hunter试剂 受体放射分析 -
胆囊切除术后兔血清CCK8的变化及意义
Oddi括约肌(SO)生理运动在维持正常胆道动力学中起着重要作用,其主要受神经、体液因素调节.CCK作为胃肠肽类激素之一对SO的调节具有重要作用[1].在CCK家族中,缩胆囊素八肽(CCK8)生理作用大.CCK可直接作用SO内的缩胆囊素A受体(CCKAR)发挥作用.胆囊切除术后综合症(PCS)概念的提出使得SO的病理生理受到高度重视,部分病因为SO功能障碍(SOD)[2],本实验通过观察胆囊切除术后兔血清CCK8浓度的变化,探讨CCK8与SO生理活动的关系.
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WP1130对宫颈鳞癌细胞顺铂化疗增敏性的分析
目的:探索X染色体连锁的泛素特异肽酶9(ubiquitin-specific peptidase 9 X-linked,USP9X)抑制剂WP1130在宫颈鳞癌细胞中对顺铂(diaminodichloroplatin,DDP)化疗敏感性的影响.方法:CCK8筛选DDP及WP1130作用于SiHa细胞的佳浓度剂量,并研究DDP与WP1130联用对SiHa细胞抑制率的影响;免疫细胞化学(immunocytochemistry,ICC)方法检测WP1130对SiHa细胞USP9X表达的影响;Western blot方法检测药物作用前后USP9X蛋白的表达水平,并探讨WP1130对SiHa细胞顺铂化疗敏感性的影响.结果:CCK8筛选的3 μg/ml DDP及1.5 μmol/L WP1130作用于SiHa细胞72 h为佳剂量,WP1130联合DDP组SiHa细胞的存活率较单用DDP组显著降低(P ＜0.05);ICC显示WP1130可抑制USP9X蛋白的表达;Western blot 发现SiHa细胞中USP9X蛋白的表达水平在DDP及WP1130作用后降低(P＜0.05),且在DDP联用WP1130组中低(P＜0.05).结论:WP1130能增强宫颈鳞癌细胞对DDP的敏感性,可为宫颈鳞癌综合治疗提供有力依据.
