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氟对小鼠成釉细胞DNA损伤、细胞凋亡和增殖周期的影响
目的 探讨氟对小鼠成釉细胞DNA损伤、细胞凋亡和增殖周期的影响.方法 取小鼠成釉细胞,分为0.25、0.50、1.00、2.00和4.00 mmol/L剂量组,经氟化钠染毒24 h后,收集细胞,检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、脂质过氧化物丙二醛(MDA)和8-OHdG含量、DNA单链断裂情况、细胞凋亡、细胞增殖周期以及细胞增殖活性.结果 小鼠成釉细胞在氟浓度为2.00和4.00 mmol/L下作用24 h后,细胞SOD、GSH-Px的活性降低(P＜0.05),MDA含量升高(P＜0.05).1.00和4.00 mmol/L剂量组的小鼠成釉细胞DNA尾长、Olive尾距、尾DNA％、尾/头长比均明显高于对照组(P＜0.05),且在此剂量条件下,小鼠成釉细胞8-OHdG的含量明显升高(P＜0.05),而在2.00 mmol/L剂量条件下,小鼠成釉细胞DNA损伤各指标的变化不明显.在2.00 mmol/L剂量条件下,G0/G1和G2/M期细胞均显著增多,S期细胞较对照组明显减少(P＜0.05).在4.00mmol/L浓度下,成釉细胞凋亡率明显升高,而细胞增殖活性则在0.25 mmol/L浓度就开始出现了明显的下降(P＜0.05).结论 在一定剂量条件下,氟可引起小鼠成釉细胞氧化应激,DNA损伤,细胞凋亡,细胞增殖周期改变和细胞增殖活性的降低.氟在2.00 mmol/L剂量条件下可诱导小鼠成釉细胞抗氧化应激反应,但相关机制需结合Nrf2信号通路深入研究.
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内质网应激分子在慢性氟中毒大鼠成釉细胞中的表达
目的 研究不同浓度的氟化物对大鼠成釉细胞内质网应激分子表达的作用,探讨氟牙症形成的机制.方法 选择30只Wistar大鼠,随机分成A、B、C3组,并分别饮用氟浓度为0、75、150mg/L的自来水,8周后处死动物,并制备下颌切牙切片,通过HE染色、免疫组化、透射电镜、TUNEL检测等实验方法,观察3组大鼠成釉细胞内质网应激分子的表达及细胞凋亡情况.结果 随着氟浓度的升高,内质网应激分子GRP78 A组为阳性表达,B、C组为强阳性表达(F=27.42,P＜0.05);XBP-1 A组为弱阳性表达,B组为阳性表达,C组为强阳性表达(F=139.7,P＜0.05);Caspase-12 A组为弱阳性表达,B组为阳性表达,C组为强阳性表达(F=43.91,P＜0.05);CHOP A组为阴性表达,B组为阳性表达,C组为强阳性表达(F=19.61,P＜0.05);TUNEL检测显示氟浓度为150mg/L组成釉细胞凋亡数量显著高于75mg/L组和自来水组(F=124.02,P＜0.05).利用MetaMorph显微图像分析软件对结果进行分析,用spss13.0软件包进行统计处理.结论 大鼠饮用高浓度的氟化水可激活内质网应激分子,导致成釉细胞产生内质网应激,并终诱导细胞发生凋亡.
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成釉细胞纤维瘤的临床特点和病理分析
成釉细胞纤维瘤由类似牙板和成釉器的牙源性上皮条索和类似牙乳头的牙源性外胚间充质组成,但没有成牙本质细胞,不含牙釉质和牙本质等牙齿硬组织,是一种真性、混合性牙源性良性肿瘤.
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过量氟对大鼠切牙成釉细胞增殖与凋亡的影响
目的研究氟牙症的发生机制.方法选择20只Wistar大鼠,随机分为2组:Ⅰ组(对照组)和Ⅱ组(50 mg/L F-).8周后处死动物,利用磨片、HE染色、核仁形成区嗜银染色(AgNORs)和原位细胞凋亡检测(TUNEL)技术观察过量氟对大鼠切牙形态及机能的影响.结果Ⅱ组大鼠切牙釉质生长线明显,分泌期成釉细胞嗜伊红颗粒蓄积,分泌前期成釉细胞AgNORs颗粒数低于Ⅰ组,差异有显著性(P＜0.001),成釉细胞凋亡增多,并伴有凋亡现象向分泌期迁移.结论过量氟可抑制成釉细胞增生,促进成釉细胞凋亡,为氟牙症发生的一种机制.
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牵张成骨术修复单侧上颌骨缺损一例
上颌骨解剖结构特殊,缺损后修复难度大,现将运用多方向联合牵张成骨术修复单侧上颌骨缺损一例报告如下.患者,男性,53岁.因左上颌骨成釉细胞纤维瘤手术切除后,左上颌骨缺如(图1).于缺损腔外侧颧骨上制备长约15 mm骨移动盘并固定自制内置弧形骨牵张器[1].
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RhoA对小鼠成釉细胞黏附连接的影响
目的:引进在成釉细胞中表达RhoA显性抑制基因的EGFP-RhoADominant Negative(EGFP-RhoADN)转基因鼠模型,研究RhoA通路对成釉细胞黏附连接复合体的影响,探索EGFP-RhoADN转基因鼠牙釉质发育缺陷的机制,为牙胚发育及牙齿再生的研究提供实验依据.方法:所有实验均以EGFP-RhoADN转基因鼠为实验组,以同时期野生型小鼠为对照组.使用扫描电子显微镜观察1月龄的两组小鼠下颌第一磨牙牙釉质外形,每组样本量为20,记录牙釉质厚度.采用RT-PCR、Western blot方法检测并比较出生后4 d(postnatal-4-day,P4)的两组小鼠下颌第一磨牙上皮层细胞间黏附连接复合体成分基因和蛋白表达的改变.结果:1月龄的EGFP-RhoADN转基因鼠下颌第一磨牙牙釉质厚度比同时期野生型小鼠牙釉质厚度下降[(84.60±0.20)μm vs.(106.24±0.24) μm,P＜0.05],出生后4d的EGFP-RhoADN转基因鼠成釉细胞层上皮钙黏附蛋白(epithelium-cadherin,E-cadherin)、d-上皮连环蛋白(α-E-catenin)、pan-钙黏附蛋白(pan-cadherin)表达水平较同时期野生型小鼠下调,β-连环蛋白(β-catenin)表达水平较同时期野生型小鼠上调,E-cadherin基因表达量较同时期野生型小鼠下调(0.93±0.01 vs.1.00±0.02,P＜0.05),β-catenin基因表达量较同时期野生型小鼠上调(1.23 ±0.03 vs.1.00±0.05,P＜0.05).结论:EGFP-RhoADN转基因鼠的下颌第一磨牙牙釉质发育出现缺陷,牙釉质厚度下降,这一现象可能是由于RhoA通路抑制引起成釉细胞黏附连接的改变,从而影响了牙釉质正常发育.
关键词： RhoA EGFP-RhoADN转基因鼠 牙釉质 成釉细胞 黏附连接 -
成釉细胞的培养及其在釉质形成中的作用
成釉细胞在牙齿形成过程中起主要作用,能够合成、分泌、重吸收和降解牙釉质基质.釉原蛋白和非成釉蛋白在牙釉质形成中起关键性作用.国内外已成功分离培养出成釉细胞,成釉细胞的培养、增殖及分化受培养液和基质的影响较大.现以国内外发表的文章做基础,就成釉细胞的培养及其分泌釉原蛋白、在牙齿形成中作用做一综述.
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中间层在成釉细胞分泌期的矿化相关因子表达研究
目的 探讨牙胚中间层细胞在釉质分泌与矿化过程中的矿化相关因子的表达.方法 取出生后1、3、5、7、9、11、13、15 d的BALB/c小鼠,HE染色法进行中间层发育情况的组织学观察,选择出生后7 d和13 d标本免疫组化检测TNSALP、E-cad、OC、BSP、OPN、FM、BGN、DCN在中间层和成釉细胞的表达.结果 在釉质形成的阶段,TNSALP、E-cad、OC、BSP、OPN、DMP1和FM在中间层和成釉细胞中有阳性表达,TNSALP、E-cad在中间层的阳性表达先于成釉细胞,随分泌过程阳性表达由中间层转移到成釉细胞;BSP、OPN、DMP1和FM在中间层和成釉细胞阳性表达仅见于成釉细胞分泌的后期,分泌早期未见阳性表达.结论 中间层对成釉细胞的分泌功能发挥起支持或诱导作用,中间层细胞与成釉细胞的上皮间矿化相关分子的表达对成釉细胞的分泌具有重要的调控作用.
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短期高浓度氟对小鼠磨牙成釉细胞内BMP-2表达的影响
目的 通过研究短期高浓度氟对小鼠磨牙成釉细胞形态及骨形成蛋白-2 表达的影响,探讨氟对牙釉质发育的作 用机制.方法 选择4 日龄的ICR 小鼠共32 只,随机分为两组,两组中均等分配实验动物和对照动物,将20 mg/kg(体重) 和10 mg/kg(体重)的NaF 分别单次注入实验动物腹腔内,将等剂量的NaCl 分别单次注入对照动物腹腔内,注射量均为 10μL/g,所有动物24 h 后被处死.HE 染色、免疫组化染色被采用以观察两种浓度氟对小鼠磨牙不同分化阶段成釉细胞 形态及骨形成蛋白-2 的表达.结果 实验组分泌期和过渡期的成釉细胞形态紊乱,对照组动物中BMP-2 的表达明显高 于实验组动物,差异有统计学意义(P ＜ 0.01),而成熟期成釉细胞未见明显变化.结论 短期高浓度氟使骨形成蛋白-2 在分泌期和过渡期成釉细胞中的表达被抑制,使釉质形成受阻.
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硒和锌对氟致小鼠成釉细胞DNA损伤的作用
目的 探讨硒、锌联合作用对氟致小鼠成釉细胞DNA损伤的影响.方法 取体外培养的处于对数生长期的小鼠成釉细胞,随机设立对照组(10％DMEM培养基)、(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mmol/L氟化钠)氟单独作用组和低剂量硒+锌联合组(2.50μmol/L亚硒酸钠+10.00 μmol/L硫酸锌)、高剂量硒+锌联合组(5.00 μmol/L亚硒酸钠+20.00 μmol/L硫酸锌)及低剂量硒+锌+氟联合组(2.50 μmol/L亚硒酸钠+10.00 μmol/L硫酸锌+0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mmol/L氟化钠)、高剂量硒+锌+氟联合组(5.00μmol/L亚硒酸钠+20.00 μmol/L硫酸锌+0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mmol/L氟化钠),硒+锌+氟联合组先经亚硒酸钠和硫酸锌预处理24 h后,再分别给予氟化钠染毒.培养24 h后,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测DNA损伤情况.结果 与对照组比较,氟单独作用组小鼠成釉细胞的尾长、Olive尾矩、尾DNA％和尾长/头长值均升高(P＜0.05).与相同剂量氟单独作用组比较,低、高剂量硒+锌+各剂量氟联合组小鼠成釉细胞的尾长、Olive尾矩和尾长/头长值降低(P＜0.05).与低剂量硒+锌+氟联合组比较,高剂量硒+锌+各氟联合组小鼠成釉细胞的Olive尾矩总体升高(P＜0.05).结论 过量摄入氟化钠可致小鼠成釉细胞DNA损伤,而硒、锌联合作用对氟致小鼠成釉细胞DNA损伤有一定的拮抗作用,且低剂量硒、锌联合作用的拮抗效果更为明显.
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氟抑制小鼠切牙成釉细胞内骨形成蛋白-2表达
目的观察慢性氟中毒对小鼠切牙成釉细胞骨形成蛋白-2(BMP-2)表达的影响,探讨氟斑牙的致病机制.方法建立小鼠慢性氟中毒氟斑牙模型,SABC免疫组化法检测下切牙成釉器细胞内BMP-2的表达分布.结果BMP-2在分泌期成釉细胞、成牙本质细胞表达强,在中间层细胞,星网状细胞中均有表达,并且随着氟浓度的升高,表达减弱.结论氟抑制BMP-2在成釉细胞中的表达,影响釉基质分泌.
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成釉细胞纤维牙肉瘤1例
患者男性,20岁.因左下后牙疼痛伴牙龈及左颊肿胀2月而入院.体检:左右面部不对称,左面部膨隆,开口度2.5cm.双合诊发现左颊下颌骨升支有一中等硬度不活动、边界清楚的肿块,大小5cm×3cm×3cm,口内触诊有压痛,下颌升支骨板已消失,|7松动Ⅲ°.冠周可见白色肉芽组织.双侧腮腺、颌下腺导管口无红肿、无异常分泌物,双颌下未触及肿大淋巴结.X线片见左下颌升支颌骨有不规则边界不清的透射区,其中并见阻射区.临床诊断:左下颌骨肉瘤.患者行左侧下颌骨及肿瘤切除术.
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氟对原代培养大鼠成釉细胞TNF-α、TNFR1表达的影响
目的 研究氟干预下肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor 1,TNFR1)在体外培养原代大鼠成釉细胞中的表达及生物学作用. 方法 分离SD大鼠上下颌磨牙牙胚中的成釉细胞进行原代培养.待细胞生长稳定后,3.2 mmol/L NaF分别干预体外培养原代成釉细胞12h,24 h,倒置显微镜观察细胞形态及增殖情况.同浓度NaF作用不同时间,免疫细胞化学法分别检测细胞内TNF-α和TNFR1的表达,采用Image-Pro Plus专业图像软件系统,用积分光密度值(integrated optical density,IOD)对成釉细胞内TNF-α和TNFR1蛋白表达进行定量分析.对照组为无氟干预成釉细胞. 结果 倒置显微镜观察,3.2 mmoL/L NaF作用于成釉细胞12 h,细胞增长减缓,体积缩小,突触变短;作用时长至24 h,细胞体积进一步缩小,形态变圆,细胞或聚集成团或相互离散,细胞间失去通联,其间可见凋亡小体.3.2 mmol/L NaF作用于成釉细胞12 h和24 h,免疫细胞化学染色细胞内TNF-α和TNFR1的表达均呈阳性,IOD值均显著高于对照组(P＜0.01).与12 h相较,24h细胞内TNF-α和TNFR1表达IOD值均显著升高(P＜0.01). 结论 氟会损伤成釉细胞,引起成釉细胞凋亡,TNF-α/TNFR1是调节成釉细胞凋亡的重要细胞因子和信号转导途径之一.
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基质金属蛋白酶-20的研究进展
作为基质金属蛋白酶家族成员之一,牙釉质基质金属蛋白酶-20(matrix metalloproteinases,MMP-20)是近几年来被发现并证实的MMP家族的新成员,又称为釉质溶解蛋白(enamelysin),主要在成釉细胞的分泌期降解牙釉质蛋白,是一种牙齿特异表达的基质金属蛋白酶,与牙釉质发育和疾病有密切关系.在牙体组织的生理与病理过程中发挥作用.
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锌缺乏小鼠切牙硬组织发育缺陷的初步研究
目的 研究锌缺乏致小鼠牙硬组织发育的异常与成釉细胞凋亡的关系.方法 采用HE染色和免疫组化技术,观察纯系CD-1小鼠缺锌后,牙体组织的形态学改变以及成釉细胞中凋亡酶caspase-9的表达情况.结果 实验组(A组)与对照组(B组)相比,小鼠体质量明显偏轻,且毛发枯黄、缺乏光泽,牙体呈淡黄色、磨耗较严重;实验组小鼠牙髓腔内前期牙本质宽于对照组,并出现较多的空泡,细胞数量明显减少,成牙本质细胞排列紊乱,无极性;实验组小鼠成釉细胞中观察到caspase-9呈明显的阳性表达.结论 锌缺乏可以促使成釉细胞中casbase-9表达增高,从而介导小鼠切牙成釉细胞凋亡,并可引起包括牙本质在内的牙硬组织发育缺陷.
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小鼠钟状期牙胚中Frizzled蛋白的表达
目的 观察牙胚发育钟状期时Frizzled蛋白的表达情况,探讨Wnt/Frizzled信号分子的作用及机制.方法 取胚胎17 d和19 d的胎鼠,另取生后2 d的幼鼠,分别制作下颌第1磨牙的切片,运用免疫荧光技术显示Frizzled蛋白的阳性分布部位,并在荧光显微镜下观察.结果 胚胎17 d时Frizzled蛋白在成釉器的内、外釉上皮有弱阳性分布,胚胎19 d时在前成釉细胞和前成牙本质细胞的顶端有Frizzled蛋白的阳性表达,生后2 d的标本上成釉细胞和成牙本质细胞的顶端Frizzled蛋白呈强阳性表达.结论 Wnt/Frizzled信号分子参与了成釉细胞和成牙本质细胞的分化过程的调节.
关键词： 牙胚 钟状期 Frizzled蛋白 成釉细胞 成牙本质细胞 -
过量氟对大鼠成釉细胞KLK4蛋白表达的影响
目的 研究燃煤型过量氟对大鼠切牙成釉细胞激肽释放酶-4 (KLK4)表达的影响.方法 30只SD大鼠按体重均等雌雄各半原则随机分为五组:即高氟空气饲养房间内食物氟2.1 mg/kg (A)、10 mg/kg(L)、25 mg/kg(M)、40 mg/kg(H)组,阴性对照(C)组,饲养16周后处死大鼠,免疫组化染色观察切牙成釉细胞KLK4的表达情况,采用Image-proplus6.0测量阳性区域积分光密度值和SPSS17.0软件包统计分析数据.结果 KLK4在切牙成熟期成釉细胞中大量表达,除A组外其余各组表达明显弱于C组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 燃煤型的过量氟可能抑制KLK4在大鼠切牙成釉细胞中表达.
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氟对成釉细胞钙稳态的影响及其机制的研究进展
成釉细胞钙离子的转运是釉质形成不可或缺的条件,而细胞内钙离子的稳定和矿化前沿钙离子的供应离不开调节钙稳态的跨膜转运蛋白.参与调节钙稳态的跨膜转运蛋白主要有L型钙离子通道、质膜钙离子ATP酶和钠钙交换体.本文结合参与调节成釉细胞钙稳态的蛋白特征,就过量氟对成釉细胞钙稳态的影响及其机制做一综述.
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细胞极性相关蛋白CDC42和PAR3在小鼠牙胚发育过程中的表达
目的:研究细胞极性相关蛋白CDC42和PAR3在小鼠牙胚发育过程中的表达,探讨其在牙胚发育中的可能作用.方法:取13.5、14.5、16.5和18.5 d(E13.5、E14.5、E16.5和E18.5)的小鼠胚胎以及出生后1和5d(PN1和PN5)的小鼠,分离头部,固定、脱钙、脱水、石蜡包埋、切片,HE染色观察牙胚的组织形态表现,采用免疫组织化学染色方法观察CDC42及PAR3在牙胚发育过程中的表达.结果:HE染色观察,E13.5～E18.5分别为小鼠牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状早期和钟状晚期,PN1小鼠的牙胚中可见分化成熟的成牙本质细胞和成釉细胞,PN5小鼠牙胚可见牙冠部发育完成.免疫组织化学染色,CDC42在E13.5、E14.5和E16.5小鼠牙胚中有广泛表达,在E18.5小鼠牙胚中表达较E13.5、E14.5和E16.5减少,在PN1和PN5小鼠牙胚中主要表达于成牙本质细胞和成釉细胞的分泌端;PAR3弱表达于E13.5和E14.5小鼠牙胚,在E16.5和E18.5小鼠牙胚上皮处表达明显增强,在PN1和PN5小鼠牙胚中表达较E18.5减弱.结论:CDC42和PAR3参与小鼠牙发育的过程,在牙胚发育早期可能参与小鼠牙胚的增殖及迁移,在牙胚发育晚期可能参与了成牙本质细胞和成釉细胞的分化,尤其在成牙本质细胞和成釉细胞极性的形成与维持中可能具有重要作用.
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细胞凋亡在大鼠切牙釉质形成中的意义
目的:研究细胞凋亡大鼠切牙釉质形成中的作用.方法:采用 HE 染色、免疫组织化学技术和原位末端细胞凋亡(TUNEL),观察纯系 Wistar 大鼠切牙釉质形成过程中的细胞凋亡.结果:大鼠切牙可再现釉质形成的全过程.细胞凋亡在转换期、尤其在成熟期成釉细胞和中间层细胞明显,凋亡相关基因 Bax 蛋白的表达与TUNEL 阳性细胞相关.结论:细胞凋亡及 Bax 基因参与了釉质形成的调控.
