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釉质龋牙髓损伤反应的观察
目的 观察釉质龋阶段牙髓的组织病理学改变,并探讨牙髓损伤与龋损活动性的关系.方法 选用拔出的患釉质龋的第三磨牙22颗(其中急性龋12颗,慢性龋10颗),无龋第三磨牙10颗作为对照,脱钙、切片、常规染色.光镜下观察釉质龋损下牙髓的组织病理改变.用多功能图象分析仪测量此区内成牙本质细胞的浆核面积之比(简称浆核比)、数目及前期牙本质的面积,血管数目与横截面积,炎症细胞数目.结果 慢性的釉质龋未见明显的病理改变.急性釉质龋牙髓的病理变化有:前期牙本质变窄,成牙本质细胞排列紊乱,细胞体积缩小,胞核向前期牙本质区移位;少细胞层见少量成纤维细胞与炎症细胞侵入;多细胞层可见血管轻度扩张,成纤维细胞增殖.少量炎症细胞主要为淋巴细胞和单核细胞.结论 釉质龋时牙髓可以出现成牙本质细胞的损伤性变化,而这种变化与龋损活动性相关.
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成釉细胞纤维瘤的临床特点和病理分析
成釉细胞纤维瘤由类似牙板和成釉器的牙源性上皮条索和类似牙乳头的牙源性外胚间充质组成,但没有成牙本质细胞,不含牙釉质和牙本质等牙齿硬组织,是一种真性、混合性牙源性良性肿瘤.
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核因子C (Nfic)在人类牙根和骨组织发育中调控作用研究进展
人体牙齿与骨组织的发育和形成均取决于间充质干细胞的分化,在众多信号通路的调控下形成终的牙及骨.虽然二者的复杂程度不一,但牙齿和骨在组织结构和物理特性上都具有相似性,同时在发育基础上亦具有共通性.目前已证实,存在于牙乳头间充质细胞内的核因子I(nuclear factorI,NFI)家族成员C(Nfic),对牙根部牙本质形成起到关键的作用.而近些年的研究亦表明Nfic在骨组织发育的过程中同样起到非常重要的调控作用,尤其是在骨形成通路中发挥着不可替代的功能,但其具体机制仍不明确.本文就Nfic对牙根和骨发育调控作用的研究情况作一综述.
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骨连接蛋白在正常牙髓和修复性牙本质形成中的基因表达
骨连结蛋白（osteonectin，ON）是一种重要的非胶原糖蛋白，可能参与了牙本质的生物矿化过程［1］。我们利用原位杂交技术，观察ON在正常牙髓和牙髓修复过程中的基因表达特征，探讨ON在修复性牙本质形成中的作用。 1．材料与方法：分别在Wistar大白鼠（体重150～250 g）的上下颌第一磨牙近中面制备单面洞，术后第3及15天处死动物。迅速分离上下颌骨，4％多聚甲醛4℃下固定，10％EDTA脱钙，系列乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，5 μm连续切片，4℃下保存备用。实验中所有试剂均由含DEPC水配制以消除RNA酶的作用。利用T7 RNA多聚酶（Boehringer Mannheim公司）体外转录体系合成ON单链RNA探针，地高辛标记RNA检测试剂盒（Promega公司）标记。根据Holland等［2］的方法将标本与已标记探针进行原位杂交。DAB显色，苏木素淡复染。光镜下检查呈棕色的阳性杂交信号。 2．结果：正常对照的大鼠第二磨牙，杂交信号主要表达于成牙本质细胞层内，成牙本质细胞层下方的牙髓细胞也呈阳性表达，但信号强度低于成牙本质细胞。固有牙髓内的牙髓细胞信号较微弱或不表达。术后3 d组标本可见窝洞下方的成牙本质细胞表达呈强阳性，成牙本质细胞层下方的牙髓细胞也呈阳性表达。固有牙髓内的牙髓细胞也呈阳性表达。前期牙本质和牙本质内表达阴性。15 d组标本，可见修复性牙本质形成。修复性牙本质下方的细胞无极化，缺乏典型的成牙本质细胞表型，为成牙本质细胞样细胞。在成牙本质细胞样细胞内，ON表达阳性，染色均匀。可见扩张的牙髓毛细血管内皮细胞也表达阳性。
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成牙本质细胞中上游刺激因子1的表达、细胞内定位及转位研究
目的 检测成牙本质细胞中上游刺激因子1(upstream stimulatory factor-1,USF1)蛋白的表达及细胞内定位,并探讨其能否发生核转位.方法 培养成牙本质细胞MDPC-23,一组作为对照组不给刺激,另一组作为实验组经不同浓度尼古丁硫酸盐(25、50、75及100 mg/L)刺激1 h后分别制备细胞爬片,用抗USF1抗体,常规SABC法检测,以Hela细胞为阳性对照.结果 对照组(?)成牙本质细胞质中有较强的黄褐色颗粒,但100 mg/L尼古丁作用组胞核中有较强的黄褐色着色,胞质着色减弱,其他刺激组仅表现为胞质黄褐色,而阳性对照Hela细胞核中有较强的黄褐色着色.结论 体外培养的成牙本质细胞中有USF1蛋白表达,定位于细胞质、在尼古丁的刺激下可发生核转位.
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成牙本质细胞中上游刺激因子1对骨桥素表达调控的研究
目的 检测成牙本质细胞中上游刺激因子1(upstream stimulatory factor 1,USF1)对骨桥素表达的影响.方法 培养成牙本质细胞MDPC-23,稳定转染PCMV-USF1和酸性-USF(A-USF)质粒,提取总RNA,半定量反转录聚合酶链反应检测骨桥素的表达水平,并对结果进行统计学分析.结果 筛选出稳定转染USF1和A-USF的抗性克隆,USF1、A-USF转染组和对照组骨桥素相对灰度比值分别为:60.33%±4.51%、229.33%±7.09%、110.00%±15.62%,转染组与对照组差异有统计学意义(P＜0.01).结论 USF1可调控成牙本质细胞骨桥素mRNA转录,该作用被A-USF部分阻断.
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人牙髓成牙本质细胞和神经组织中钠钙交换体1型通道蛋白的免疫组化研究
目的 通过免疫组化法观察钠钙交换体1型(Na+/Ca2+exchanger 1,NCX1)通道蛋白在人牙髓成牙本质细胞(odontoblasts,OD)和神经纤维组织中的表达,为解释牙髓组织的修复和感觉传导功能奠定基础.方法 选取就诊于天津医科大学口腔医院口腔颌面外科18～ 25岁患者因阻生或正畸拔除的健康完整的第三磨牙20颗,通过牙本质涎磷蛋白抗体染色与改良Bielschowsky嗜银染色分别定位OD层和神经组织,通过特异性抗体染色分析NCX1通道蛋白在人牙髓组织OD细胞层和神经组织中的表达情况,并用Image Pro Plus软件半定量比较20例离体牙样本冠部和根部上1/3两个部位牙髓OD中NCX1通道蛋白的表达情况.结果 免疫组化结果显示人牙髓OD胞体和神经组织的NCX1通道蛋白均为阳性表达.Image Pro Plus分析显示,NCX1通道蛋白在牙冠部与根部上段OD中的表达(A值分别为0.146±0.021、0.120±0.034)差异无统计学意义(P＞0.05).结论 人牙髓组织OD层和神经组织均明显表达NCX1通道蛋白;NCX1在牙冠部和根部上段OD中的表达无明显差异.
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瞬时感受器电位香草酸受体3离子通道蛋白在人成牙本质细胞中的表达
目的 通过免疫组织化学法研究瞬时感受器电位香草酸受体3(transient receptor potential vanilloid 3,TRPV3)离子通道蛋白在人成牙本质细胞(odontoblasts,OD)中的表达,以进一步丰富人OD离子通道的研究.方法 选取18 ～25岁患者因正畸拔除的健康完整的第三磨牙20颗,HE染色确定组织切片质量,牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoproteins,DSPP)抗体染色定位OD层,通过TRPV3通道蛋白特异性抗体染色分析TRPV3通道蛋白在人牙髓组织中的分布情况,重点观察TRPV3通道蛋白在OD层的分布特点,并用Image Pro Plus软件半定量比较冠根不同部位OD TRPV3通道蛋白的表达情况.结果 免疫组化结果显示冠根部牙髓OD胞体TRPV3通道蛋白表达阳性,冠部明显强于根部.OD细胞突起亦有TRPV3通道蛋白阳性表达,Image Pro Plus分析显示,TRPV3通道蛋白在冠部OD细胞突起的表达(积分吸光度值为2516±162)与根髓外侧(积分吸光度值为2224±150)、根髓内侧(积分吸光度值为2121±92)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05)；根髓外侧与内侧相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 人OD明显表达TRPV3通道蛋白,且在不同部位牙髓OD中存在表达差异.
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Toll 样受体4在人成牙本质细胞和牙髓组织中的表达
目的 探讨人牙髓组织和成牙本质细胞中Toll样受体4(TLR4)的表达与分布特点,及其在牙髓组织天然免疫防御中的可能作用.方法 从新鲜拔除的人第三磨牙获取牙髓组织和成牙本质细胞,扫描电镜观察牙髓摘除后髓腔壁成牙本质细胞形态和附着情况;RT-PCR检测人牙髓组织以及成牙本质细胞中TLR4mRNA的表达情况;采用免疫印迹技术和免疫组织化学方法检测TLR4蛋白的表达与定位.结果 扫描电镜观察牙髓摘除后成牙本质细胞大部存留在髓室壁上,细胞形态良好;RT-PCR结果发现健康牙髓、成牙本质细胞均可表达TLR4mRNA,产物大小为278 bp;免疫印迹法检测正常牙髓、成牙本质细胞在相对分子质量89 000附近出现蛋白条带;免疫组化显示牙髓组织中的成牙本质细胞、血管内皮细胞TLR4免疫反应阳性.正常牙髓中牙髓成纤维细胞不表达TLR4.结论 成牙本质细胞通过表达TLR4参与牙髓牙本质复合体的先天免疫反应,TLR4在牙髓抵御外来病原微生物入侵的宿主免疫防御中起重要作用.
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成牙本质细胞在牙髓免疫防御中的作用研究进展
成牙本质细胞是牙髓牙本质复合体中的特征性细胞,主要功能是合成、沉积和矿化胶原基质从而形成牙本质.成牙本质细胞的功能不仅局限于牙本质的形成,作为牙髓的第一道细胞防线,可通过模式识别受体(PRR)识别多种病原相关分子模式(PAMP),启动免疫防御反应.本文就成牙本质细胞的组织生理学特点及其在牙髓炎症免疫防御中的作用作一综述.
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成牙本质细胞离子通道的研究进展
成牙本质细胞位于牙髓组织的外层，是接受外界刺激的前沿，在分泌基质形成牙本质的同时，又能感受外界刺激。作为感觉受体细胞，对其细胞上具有的多种离子通道蛋白的种类、结构、作用机制的深入研究，有助于深入探讨牙痛的分子生物学机制，期望为牙本质敏感症的药物治疗提供一种新思路。
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成牙本质细胞在牙感觉传导中作用的研究进展
成牙本质细胞(OD)在牙髓组织中位置特殊,具有独特的细胞形态学特征,处于牙髓组织感受外界对牙齿刺激的前沿.但目前OD在牙感觉传导中的作用及机制尚不清楚.初步研究发现,OD细胞膜上表达机械/温度敏感的瞬时感受器电位(TRP)、Na+、K+、Ca2+通道,具有初级纤毛等感觉相关细胞器.这些离子通道以及初级纤毛可能共同参与了OD的感觉传导过程,因此本文现将近相关研究做一综述.
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锌指E盒结合同源框2在人牙髓组织和细胞的表达
目的：检测锌指E盒结合同源框2(ZEB2)在人牙髓组织和细胞中的表达，并初步探讨其意义。方法：制作牙髓组织石蜡切片，荧光原位杂交技术(FISH)检测 ZEB2的表达；实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测正常及TGF-β1刺激下人牙髓细胞(hDPCs)中ZEB2 mRNA表达水平；制作hDPCs细胞爬片， FISH检测ZEB2的表达。结果： FISH结果显示ZEB2在牙髓组织中主要表达于成牙本质细胞层，在牙髓细胞呈弱阳性表达。 RT-qPCR结果显示TGF-β1的作用促进ZEB2的表达，且具有浓度和时间依赖性，5ng/ml TGF-β1刺激ZEB2表达达大(P<0.05)；5ng/ml TGF-β1刺激后， ZEB2 mRNA在24h内表达逐渐上调，24h达峰值(P<0.05)。 FISH结果示ZEB2在正常hDPCs胞质和胞核均呈弱阳性表达， TGF-β1刺激24h后ZEB2表达增强，胞核表达明显。结论： ZEB2在牙髓组织中主要表达于成牙本质细胞层，正常hDPCs中弱阳性表达，而TGF-β1可促进hDPCs中ZEB2表达，提示ZEB2可能通过参与TGF-β1信号通路调控hDPCs的成牙本质向分化过程。
关键词： 锌指E盒结合同源框2 TGF-β1 牙髓细胞 成牙本质细胞 -
咬合创伤后牙本质形成相关细胞的形态学变化
目的:探讨大鼠咬合创伤牙齿牙本质形成相关细胞以及牙本质的变化.方法:制备大鼠下颌第一磨牙咬合创伤,观察7d、15d、30d、90d时间点牙本质的形成与吸收,牙髓组织中与牙本质形成相关的细胞的形态和数日变化.结果:实验性咬合创伤的早期,牙髓组织中成牙本质细胞和多细胞层细胞增生活跃,牙本质形成增多现象,增生区域的牙体硬组织表面为坚硬组织破坏和牙本质暴露.后期可以出现细胞萎缩现象,牙本质吸收明显.结论:咬合创伤影响牙本质的形成功能,这种影响可能与相应区域牙本质足否暴露无关.
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SD大鼠牙髓增龄变化对Nd:YAG激光照射的应激反应观察
目的: 观察增龄牙髓对Nd:YAG激光照射的应激反应变化.方法:观察幼年组(6周龄)、成年组(12周龄)、老年组(72周龄)雄性SD大鼠切牙经不同能量密度脉冲式Nd:YAG激光照射后6h牙髓的组织形态学变化,利用图像分析系统对不同年龄大鼠成牙本质细胞中诱导型热休克蛋白(HSP70)表达的平均光密度值进行分析比较.结果 :激光能量密度为1433mJ/mm2和1910mJ/mm2时,老年组成牙本质细胞中诱导型HSP70的表达强度显著高于幼年和成年组(P＜0.05);能量密度为2388mJ/mm2时,老年组成牙本质细胞中诱导型HSP70的表达强度显著低于幼年和成年组(P＜0.05),且老年组部分成牙本质细胞变性坏死.结论 :老年大鼠牙髓对激光刺激的耐受性下降.
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关键词：
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人重组转化生长因子β1促进牙髓干细胞的增殖和矿化
目的:研究人重组转化生长因子β1(recombinant human transforming growth factor β1, rhTGF-β1)对牙髓干细胞生物学性能的影响,包括确定促进牙髓干细胞增殖的佳作用浓度和该浓度下对牙髓干细胞分化的作用.方法: 分离培养人健康第三磨牙牙髓干细胞,分别加入1 μg/L、6 μg/L、10 μg/L的rhTGF-β1,CCK-8(cell counting kit-8)法检测对牙髓干细胞增殖的影响,选择出佳浓度在成骨/成牙本质诱导条件下连续培养,酶标仪检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)光密度值,二喹啉甲酸(bicinchoninic acid, BCA)蛋白质定量试剂盒计算总蛋白含量,两者比值作为ALP相对活性的指标.茜素红染色观察矿化结节形成能力,染色液洗脱后检测光密度值,比较rhTGF-β1对牙髓干细胞增殖和分化的作用.结果:牙髓干细胞具有体外形成矿化结节的能力,6 μg/L rhTGF-β1可促进牙髓干细胞增殖;连续培养7 d后,6 μg/L rhTGF-β1组细胞ALP的光密度值为0.31±0.03,显著高于对照组0.02±0.01(P<0.05);6 μg/L rhTGF-β1组总蛋白含量为(2 775.46±83.54) mg/L,对照组为(1 432.20±110.83) mg/L (P<0.05);ALP相对光密度值,6 μg/L rhTGF-β1组较对照组提高了6倍.茜素红染色下显示矿化结节形成增加,洗脱液光密度值6 μg/L rhTGF-β1组和对照组分别为0.83±0.02和0.55±0.05, P<0.05.结论: 6 μg/L rhTGF-β1具有促进牙髓干细胞增殖和促进体外成牙本质分化的作用.
关键词： 牙髓干细胞 人重组转化生长因子β1 成牙本质细胞 分化 -
热休克蛋白70在第三磨牙成牙本质细胞中表达的增龄变化
目的 观察热休克蛋白70(heat shock protein70 HSP70)在第三磨牙成牙本质细胞中表达的增龄变化.方法 共选取33例21～30岁、31～40岁、41～50岁和51～60岁四个年龄组健康第三磨牙的组织标本进行免疫组化染色,并通过计算机图像分析对比四组牙髓组织成牙本质细胞中HSP70表达量的不同.结果 41～50岁和51～60岁年龄组平均光密度值明显低于21～30岁年龄组和31～40岁年龄组(P＜0.05),其余各组间无显著性差异.结论 以41～50岁年龄组为转折点,HSP70在第三磨牙成牙本质细胞中的表达强度显著下降.
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永生化人成牙本质细胞样细胞系的生物学特征
目的明确永生化人成牙本质细胞样细胞系hTERT-hOd-l的生物学特征.方法在连续体外培养过程中,观察细胞的形态学特征和生长增殖特征并与人成牙本质细胞样细胞比较.结果细胞形态为成纤维细胞样,细胞器发达,生长增殖活跃,具有克隆形成能力.结论 hTERT-hOd-l保持了人成牙本质细胞样细胞的生物学特征.
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c-jun原癌基因在鼠牙胚中的表达
目的通过观察c-jun原癌基因在鼠牙胚中的表达,探讨成牙本质细胞分化的转录调节.方法利用免疫组化方法检测c-jun原癌基因在鼠牙胚中的表达.结果 c-jun原癌基因在小鼠牙胚的蕾状期、帽状期呈阴性表达,在钟状期牙胚的成牙本质细胞中呈阳性表达.结论 c-jun可能参与了成牙本质细胞分化的转录调节,并且可能成为成牙本质细胞的标志分子之一.
