首页 > 文献资料
-
大鼠坐骨神经损伤后所致的TRPV1过度表达干预轴突的再生修复
目的 探讨局部阻断瞬时受体电位阳离子通道亚家族成员V1(TRPV1)表达或功能对大鼠坐骨神经离断伤后轴突再生修复的影响.方法 成年雄性SD大鼠24只,分为4组:正常对照组,单纯损伤组,损伤+AMG-517150μg/kg组及损伤+AMG-517300μg/kg组.在坐骨神经离断损伤的同时,行背根神经节周围注射,用药组注射不同浓度AMG-517,单纯损伤组仅注射等体积溶剂.2周后分别采用酶联免疫吸附测定、Western blot、环氧树脂-半薄切片(1μm)-甲苯胺蓝染色对脊髓后角钙调素基因相关多肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)释放、背根神经节局部TRPV1表达及坐骨神经轴突再生数量和局部微环境变化进行检测.结果 (1)背根神经节周围注射AMG-517可有效阻断脊髓背角CGRP的释放、阻断TRPV1的功能,对照组CGRP为0.15ng/g,单纯损伤组为0.17ng/g,AMG-517150μg/kg组为0.09ng/g,AMG-517300μg/kg组为0.11ng/g(P<0.01);(2)局部阻断TRPV1表达或功能可促进坐骨神经损伤后近端神经轴突的再生(P<0.01);(3)AMG-517可使背根神经节TRPV1的表达下调(P<0.01).结论 (1)周围神经损伤后所引起的TRPV1过度表达或激活可影响周围神经损伤后再生;(2)降低或阻断神经损伤后TRPV1的过度表达或激活有助于周围神经损伤后的修复.
-
瞬时感受器电位香草酸受体1通道蛋白表达与老年慢性阻塞性肺疾病气道重构的关系
目的 探讨瞬时感受器电位香草酸受体1 (TRPV1)通道蛋白的表达与老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者气道重构的严重程度是否存在相关性. 方法 将100例老年COPD患者按气流阻塞严重程度,分为慢性阻塞性肺疾病全球倡议(GOLD)1级23例、GOLD2级24例、GOLD3级27例、GOLD4级26例,分别统计每一级的诱导痰上清液和血清TRPV1浓度,同时统计50例健康老年人的诱导痰上清液和血清TRPV1浓度;后分别在COPD各级患者之间和COPD患者与健康老年人之间进行统计学分析. 结果 老年COPD组血清和诱导痰TRPV1浓度较健康老年人群组明显升高[(9.94±2.91)μg/L比(3.68±0.46) μg/L,(3.29±1.32) μg/L比(0.70±0.30) μg/L],差异有统计学意义(P＜0.01);老年COPD各级患者的血清和诱导痰TRPV1浓度相互两两比较均差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 TRPV1通道蛋白的表达水平随着老年COPD患者气道重构的严重程度加重而升高.
-
TRPV6基因沉默对滋养细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨瞬时受体电位通道V亚家族6(TRPV6)基因沉默对人早孕期胎盘绒毛膜外滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞增殖及凋亡的影响.方法 构建TRPV6小分子干扰RNA(siRNA)序列；体外培养HTR-8/SVneo细胞,进行转染,随机分为空白对照组(只加转染试剂)、阴性对照组(转染非特异的siRNA序列)及实验组(转染TRPV6-siRNA)；收集转染后24、48及72 h的各组细胞,应用逆转录(RT) PCR技术检测转染后不同时间点各组细胞中TRPV6 mRNA的表达水平；四甲基偶氮唑蓝比色法和流式细胞技术检测转染后不同时间点各组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率.结果 siRNA序列有效地阻断了HTR-8/SVneo细胞中TRPV6基因的表达,转染24、48、72 h后,实验组TRPV6 mRNA的相对表达水平分别为0.72 ±0.02、0.54±0.02、0.29±0.01,同一时间点实验组与空白对照组及阴性对照组TRPV6 mRNA的相对表达水平比较,差异均有统计学意义(P＜0.01)；细胞转染24、48、72 h后,实验组细胞增殖抑制率分别为(19.29 ±1.23)％、(32.12±1.35)％、(46.51 ±1.42)％,空白对照组分别为(2.12±0.03)％、(2.42±0.02)％、(3.13±0.04)％,阴性对照组分别为(2.37±0.01)％、(2.61±0.05)％、(2.93±0.03)％,各组不同时间点细胞增殖抑制率分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01)；实验组转染48 h时的细胞凋亡率为16.21％,与空白对照组(3.27％)和阴性对照组(5.34％)比较,差异也均有统计学意义(P＜0.05).结论 TRPV6基因沉默可以显著抑制人早孕胎盘绒毛膜外滋养细胞的增殖活性,并促进细胞凋亡.
-
内异症疼痛与骶韧带病灶中瞬时受体电位辣椒素亚型1表达的关系
目的 探讨内异症患者骶韧带病灶巾瞬时受体电位辣椒素亚型1(TRPV1)蛋白和mRNA的表达变化及其与疼痛程度的关系.方法 选择经腹腔镜手术并经病理检查证实的内异症患者54例,行骶韧带内异症病灶切除术.以痛经视觉模拟评分(VAS)5分为界分为:A组27例(VAS为5～10分),B组27例(VAS为0～4分)；选取同期非内异症但有痛经(VAS为0～4分)者20例为对照(C组).采用免疫组化Envision二步法检测各组患者骶韧带TRPV1蛋白的表达,并根据阳性细胞百分比及显色程度进行半定量评分；实时定量PCR技术检测各组患者骶韧带中TRPV1 mRNA的表达；蛋白印迹法检测各组患者骶韧带内异症病灶中TRPV1蛋白的表达水平.结果 (1)3组患者TRPV1蛋白的阳性表达情况比较:A、B组骶韧带内异症病灶及C组骶韧带组织内均存在TRPV1蛋白阳性染色区域,免疫组化半定量评分A、B、C组分别为3、1、1分；A组与B组比较,差异有统计学意义(P =0.005)；B组与C组比较,差异也有统计学意义(P=0.027).(2)3组患者TRPV1 mRNA的表达水平:A、B、C组TRPV1 mRNA的表达水平分别为1.84、0.80和0.24,随VAS评分的增加,TRPV1mRNA的表达量明显增加,A组与B组比较,差异有统计学意义(P=0.022)；B组与C组比较,差异也有统计学意义(P=0.031).(3)3组患者TRPV1蛋白表达水平的比较:A、B、C组TRPV1蛋白的表达水平分别为0.63、0.19和0.02,A组与B组比较,差异有统计学意义(P=0.022)；B组与C组比较,差异也有统计学意义(P＜0.01).结论 内异症患者TRPV1蛋白和mRNA表达水平和疼痛程度密切相关.
-
瞬时感受器电位香草酸受体3离子通道蛋白在人成牙本质细胞中的表达
目的 通过免疫组织化学法研究瞬时感受器电位香草酸受体3(transient receptor potential vanilloid 3,TRPV3)离子通道蛋白在人成牙本质细胞(odontoblasts,OD)中的表达,以进一步丰富人OD离子通道的研究.方法 选取18 ～25岁患者因正畸拔除的健康完整的第三磨牙20颗,HE染色确定组织切片质量,牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoproteins,DSPP)抗体染色定位OD层,通过TRPV3通道蛋白特异性抗体染色分析TRPV3通道蛋白在人牙髓组织中的分布情况,重点观察TRPV3通道蛋白在OD层的分布特点,并用Image Pro Plus软件半定量比较冠根不同部位OD TRPV3通道蛋白的表达情况.结果 免疫组化结果显示冠根部牙髓OD胞体TRPV3通道蛋白表达阳性,冠部明显强于根部.OD细胞突起亦有TRPV3通道蛋白阳性表达,Image Pro Plus分析显示,TRPV3通道蛋白在冠部OD细胞突起的表达(积分吸光度值为2516±162)与根髓外侧(积分吸光度值为2224±150)、根髓内侧(积分吸光度值为2121±92)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05)；根髓外侧与内侧相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 人OD明显表达TRPV3通道蛋白,且在不同部位牙髓OD中存在表达差异.
-
感染和应激对肥大细胞缺陷大鼠脊髓瞬时感受器电位香草酸受体1和胞外信号调节蛋白激酶的影响
目的:研究感染和应激所致的内脏高敏感性大鼠中肥大细胞的作用以及与信号通路瞬时感受器电位香草酸受体1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)和胞外信号调节蛋白激酶(extracellular-regulated kinase,ERK)的关系.方法:以肥大细胞缺陷大鼠(WsRC Ws/Ws,Ws/Ws)和野生对照大鼠(WsRC+/+,+/+)为基础构建一过性旋毛虫感染( post-infection,PI)和急性冷束缚应激(acute cold restraint stress,ACRS)内脏高敏感模型,腹部回撤反射评分评估大鼠内脏敏感性.通过Western blotting方法检测大鼠第6腰椎和第1骶椎(lumbar 6 sacral 1,L6S1)段脊髓TRPV1和磷酸化的ERK1/2 (pERK1/2)蛋白的表达水平.结果:与对照组(3.7±0.09)相比,PI(2.52±0.13)、ACRS(2.28 ±0.17)和PI+ ACRS(2.25±0.12)组+/+大鼠内脏敏感性均增高,P＜ 0.05,差异有统计学意义.在Ws/Ws大鼠中,与对照组(3.25±0.20)相比,PI(2.87±0.14)和PI+ ACRS( 2.50±0.27)组内脏敏感性增高,P＜ 0.05,差异有统计学意义,但是,ACRS组(2.97±0.22)内脏敏感性与对照组相比差异无统计学意义.Western blotting结果提示,与对照组(0.090±0.009)相比,PI(0.121±0.012)、ACRS(0.122±0.008)和PI+ACRS(0.129±0.008)组+/+大鼠脊髓TRPV1蛋白水平均明显增加,P＜ 0.05,差异有统计学意义；但是,在Ws/Ws大鼠中,与对照组相比(0.106±0.012),ACRS(0.132±0.014)组脊髓TRPV1差异无统计学意义,而PI(0.140±0.008,P＜ 0.05)以及PI+ ACRS(0.156±0.010,P＜ 0.01)组脊髓TRPV1蛋白水平表达显著增加,差异有统计学意义.同样,在+/+大鼠中,与对照组(0.58±0.03)相比,PI(0.72±0.04)、ACRS(0.75±0.04)以及PI+ ACRS(0.78±0.01)组脊髓pERK1/2蛋白水平明显增加,P＜ 0.01,差异有统计学意义；但是,在Ws/Ws大鼠中,与对照组相比(0.59±0.04),ACRS组(0.69 ±0.04)脊髓pERK1/2差异无统计学意义,而PI(0.72±0.04)以及PI+ ACRS(0.74 +0.04)均可导致脊髓pERK1/2蛋白水平表达显著增强,P＜ 0.05,差异有统计学意义.结论:一过性旋毛虫感染和ACRS均可引起大鼠内脏高敏感,但是ACRS引起的内脏高敏感具有肥大细胞依赖性.旋毛虫感染和ACRS均可以引起脊髓通路TRPV1和pERK1/2蛋白水平表达增加,ACRS引起的TRPV1和pERK1/2表达上调也具有肥大细胞依赖性.
-
瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏时背根神经节TRPV1表达的变化
目的 评价瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏时背根神经节瞬时受体电位香草醛亚家族1(TRPV1)表达的变化.方法 取尾静脉置管成功的SPF级健康雄性SD大鼠32只,体重240～260 g,2～3月龄,采用随机数字表法分为4组(n=8):对照组(C组)、切口痛组(Ⅰ组)、瑞芬太尼组(R组)和切口痛+瑞芬太尼组(I+R组).R组静脉输注瑞芬太尼1.2 μg·kg-1·min-160 min;I组制备大鼠切口痛模型,同时静脉输注等容量生理盐水60 min;I+R组制备大鼠切口痛模型,同时静脉输注瑞芬太尼1.2 μg·kg-1·min-160 min;C组静脉输注等容量生理盐水60 min.分别于输注生理盐水或瑞芬太尼前24 h(T0)、输注停止后2、6、24和48 h(T1～4)时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).后一次痛阈测定结束后取L4-6背根神经节,采用Western blot法和实时定量PCR法检测背根神经节TRPV1及其mRNA的表达水平.结果 与C组比较,R组、I组和I+R组T1～4时MWT降低,TWL缩短,背根神经节TRPV1及其mRNA表达上调(P＜0.05);与R组或I组比较,I+R组T1～4时MWT降低,TWL缩短,背根神经节TRPV1及其mRNA表达上调(P＜0.05).结论 瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏形成的机制可能与背根神经节TRPV1表达上调有关.
-
CX3C趋化因子受体1对骨癌痛大鼠吗啡耐受时脊髓背角μ受体和辣椒素受体表达的影响
目的 评价CX3C趋化因子受体1(CX3 CR1)对骨癌痛大鼠吗啡耐受时脊髓背角μ受体和辣椒素受体(TRPVl)表达的影响.方法 清洁级成年雌性SD大鼠,体重180-200 g,月龄3月,经L3.4棘突间隙行鞘内置管,取鞘内置管成功的大鼠48只,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=12):对照组(A组)、鞘内注射生理盐水组(AM组)、鞘内注射IgG组(GM组)和鞘内注射CX3CR1中和抗体组(BM组).A组仪手术暴露右侧胫骨七段；其余3组右侧胫骨上段骨髓腔注入Walker256 乳腺癌细胞10μl(400个/ μl)建立骨癌痛模型,术后第10天开始鞘内注射吗啡20tg/kg,2次/d,连续7d,建立骨癌痛-吗啡耐受模型,注射吗啡第8天分别经鞘内注射相应溶液10μl,1次/d,连续3d.分别于接种Walker 256乳腺癌细胞前(T0)、接种后第3、6、9天、注射吗啡第3、7天、鞘内注射抗体第3天(T1-T6)时测定机械缩足阈值(MWT)和机械缩足持续时间(MWD),于T6时测定痛阈后处死大鼠,取脊髓L4-6节段组织,采用Western blot法检测脊髓背角小胶质细胞CX3 CR1蛋白的表达,采用免疫组化法检测神经元μ受体和TRPV1的表达.结果 与A组比较,BM组T2.3.5时、AM组和GM组T2,3,5,6时MWT下降,MWD升高,T6时CX3CR1蛋白和TRPV1表达上调,μ受体表达下调(P＜0.01)；与AM组和GM组比较,BM组T6时MWT上升,MWD降低,CX3CR1蛋白和TRPV1表达下调,μ受体表达上调(P＜0.01).AM组和GM组上述指标差异无统计学意义(p＞0.05).结论 CX3CR1可通过下调大鼠脊髓背角μ受体和上调TRPVI参与骨癌痛大鼠吗啡耐受的形成.
-
小剂量辣椒素对大鼠内脏机械及化学刺激敏感性的影响
目的 研究小剂量辣椒素(Cap)在不同时期对大鼠内脏机械及化学刺激敏感性的影响.方法 SD大鼠160只,随机分为对照组(普通饲料)和观察组(Cap 1 mg· kg-1·d-1),每组80只,再各随机均分为5组,雌雄各半,分别在干预1d、3d、1周、2周和4周后,采用直肠气囊扩张法观察大鼠内脏机械刺激敏感性,腹腔注射新斯的明法观察内脏化学刺激敏感性,采用免疫组化法检测胃、十二指肠黏膜辣椒素受体(TRPV1)的表达情况.结果 在机械刺激敏感性实验中,与对照组相比较,喂食Cap 1周,观察组大鼠气囊扩张体积显著减少(P=0.002),且雌性较雄性更敏感(P=0.001);喂食Cap 4周,观察组大鼠气囊扩张体积显著增加(P=0.007).在化学刺激敏感性实验中,与对照组相比较,喂食Cap 1周,观察组大鼠腹痛相关行为的持续时间显著延长(P=0.001);而喂食Cap 4周,观察组大鼠腹痛相关行为的开始时间显著延长(P=0.02);其余各组之间差异无显著意义(P＞0.05).观察组在给予Cap1 d、3d、1周后胃黏膜TRPV1的表达显著高于对照组(P＜0.05),给予Cap1d、3d后十二指肠黏膜TRPV1表达显著高于对照组(P＜0.05),随后观察组和对照组TRPV1的表达均无显著差异(P＞0.05).结论 连续摄入小剂量Cap 1周后,大鼠对内脏机械及化学刺激的敏感性显著增加,2周后恢复正常,4周后显著降低,其中雌性对内脏机械刺激较雄性更为敏感.小剂量Cap可以调节胃、十二指肠组织TRPV1的表达.
-
TRPV5与钙调节及其影响因素研究进展
TRPV5(transient receptor potential cation channel,subfamily V,member 5)作为瞬时性受体电位通道(TRP) vanilloid受体亚类成员之一,是介导远曲小管和集合管对钙主动重吸收的主要蛋白.钙离子、PH和激素等因素参与其表达水平或活性的调控.鉴于TRPV5在调节尿钙水平中的重要作用,我们对TRPV5与钙调节及其影响因素的相关研究作一综述.
-
TRPV1受体对M2型巨噬细胞功能亚型的调控作用
目的 探讨瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)受体对M2型巨噬细胞功能亚型的影响作用及调控机制.方法 2016年3月在人单核细胞白血病细胞培养模型上利用白细胞介素4诱导其分化为M2型巨噬细胞,并分别给予特异性TRPV1受体激动剂、特异性TRPV1受体阻断剂,观察TRPV1受体对M2型巨噬细胞表型相关指标的影响.分别采用酶联免疫吸附试验检测转化生长因子β的分泌,逆转录聚合酶链反应检测ARG1、mannoser mRNA的表达.结果 白细胞介素4诱导的M2型巨噬细胞表型相关指标的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);激活TRPV1后能明显降低表型相关指标的表达,阻断TRPV1后此作用受到抑制.结论 TRPV1受体通过对M2型巨噬细胞功能亚型的调控,进而实现其抑制炎症、保护机体的作用.
