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复肾功方对慢性肾功能衰竭大鼠肾功能及Shh信号通路的影响
目的 观察复肾功方治疗慢性肾功能衰竭的可能作用机制.方法 将55只SD大鼠随机分为正常组、模型组及复肾功方低、中、高剂量组,每组11只.正常组自由饮食,其余4组大鼠食用含0.5％腺嘌呤饲料制造慢性肾功能衰竭模型.造模后正常组和模型组给予生理盐水20 ml/kg灌胃;复肾功方低、中、高剂量组分别以4、8、16 g/kg灌胃复肾功方,每日1次,连续30天.检测各组大鼠血肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平,HE染色检测肾组织形态学改变,免疫组化检测音猬因子(Shh)、神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白1 (Gli1)的表达. 结果 与正常组比较,模型组大鼠SCr和BUN水平及肾组织Shh、Gli1水平明显升高(P＜0.05),肾间质出现明显纤维化病变.复肾功方各剂量组大鼠SCr和BUN水平及肾组织Shh、Gli1水平较模型组均明显降低,其中复肾功方高剂量组各指标水平低,3组间两两比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 复肾功方能明显改善慢性肾功能衰竭大鼠肾功能,且随剂量增加改善效果更好,其机制可能与抑制Shh信号通路的激活有关.
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SHH-N基因腺相关病毒表达载体的构建及其对神经干细胞增殖相关基因的影响
目的 构建rAAV-SHH-N-EGFP载体并检测其对神经干细胞增殖相关基因影响.方法 分离并培养大鼠脑室下区神经干细胞,提取RNA、反转录、PCR得到SHH-N的cDNA,克隆入pSNAV2.0-CMV-IRES-EGFP,包装得到腺相关病毒rAAV-SHH-N-EGFP,感染神经干细胞48 h后,采用实时定量PCR检测SHH信号通路下游相关基因的mRNA水平变化,并观察rAAV-SHH-N-EGFP载体在神经干细胞内的表达情况.结果 (1)克隆得到SHH-N基因,测序结果与NCBI报道序列一致.(2)成功构建pSNAV2.0-CMV-SHH-N-EGFP表达载体并鉴定,包装得到rAAV-SHH-N-EGFP.(3)实时定量PCR分析rAAV-SHH-N-EGFP感染神经干细胞48 h后,rAAV-SHH-N-EGFP处理组较感染rAAV-EGFP的对照组,Glil和Nmyc的mRNA水平上调.(4)rAAV-SHH-N-EGFP可有效感染神经干细胞,在感染14 d后稳定表达SHH-N.结论 成功构建rAAV-SHH-N-EGFP过表达载体并使其在神经干细胞内稳定表达.过表达SHH-N可使神经干细胞内SHH信号通路相关基因Glil转录水平上调,并使细胞增殖相关基因Nmyc转录水平上调.
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环巴明抑制SHH信号通路缓解大鼠神经病理性疼痛
目的 拟探讨环巴明抑制SHH信号通路对坐骨神经分支选择性损伤(SNI)大鼠的痛敏改变及脊髓水平BDNF、NR2B变化的影响.方法 将大鼠随机分为对照组(control组)、坐骨神经分支选择性损伤组(SNI组)、溶剂对照组(SNI-vehicle组)和环巴明组(SNI-CP组),各组12只.分别于建模前1d、建模后1和7d测定机械缩足反应阈(PMWT).于建模后7d行为学测量后处死大鼠取L4-6脊髓组织,用Western blot法及实时荧光定量PCR法测定脊髓组织SHH、GLI1及BDNF表达,用免疫组化法测定脊髓组织NR2B蛋白表达.结果 与对照组相比,SNI组、SNI-vehicle组和SNI-CP组PMWT均降低,脊髓组织SHH、GLI1及BDNF蛋白及mRNA表达均上调,且脊髓组织NR2B表达亦上调(P＜0.05);但与SNI组相比,SNI-CP组经环巴明处理后PMWT升高,且脊髓组织SHH、GLI1及BDNF表达下调,脊髓组织NR2B表达亦下调(P＜0.05).结论 环巴明抑制SHH信号通路能改善SNI大鼠神经病理性疼痛,其机制可能与其调节脊髓水平BDNF和NR2B蛋白表达有关.
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白藜芦醇对NIH3T3细胞Shh信号通路的影响
目的 探讨白藜芦醇对NIH3T3细胞Shh信号通路的影响.方法 实验分为对照组和白藜芦醇组.白藜芦醇处理NIH3T3细胞24 h.CCK-8法测定细胞活力,免疫荧光法检测初级纤毛蛋白(Ac-tu)、Smo和Gli-1的表达,Western blotting法检测Shh、Ptc、Smo、Gli-1蛋白的表达.结果 1.0.5和1μmol/L白藜芦醇组(0.679±0.047,0.774±0.054)细胞活力分别较对照组(0.585±0.039)明显增强(P＜0.05),其中以1μmol/L白藜芦醇组强.之后随白藜芦醇浓度(10、20、40、80 μmol/L)的增高,细胞活力逐渐降低(0.428±0.043,0.395±0.031,0.373±0.017,0.361±0.016),且均较对照组明显减弱(P＜0.05),而0.1μmol/L(0.602 ±0.065)和5μmol/L组(0.556±0.041)细胞活力与对照组比较差异无显著性(P＞0.05).2.NIH3T3细胞表达Ac-tu、Shh、Ptc-1、Smo、Gli-1从蛋白,有l根初级纤毛,Smo和Gli-1蛋白位于细胞质.白藜芦醇处理24 h时,Gli-1从细胞质进入细胞核,Smo从细胞质进入初级纤毛,且Shh(0.756±0.659比0.441±0.769,P＜0.05)、Ptc-1(0.655±0.347比0.351±0.026,P ＜0.05)、Smo(0.779±0.064比0.451±0.035,P＜0.05)和Gli-1(0.856±0.044比0.560±0.058,P＜0.05)蛋白表达较对照组高.结论 白藜芦醇可能通过激活Shh信号通路增强NIH3T3细胞的活力.
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抑制Shh信号通路增加胰腺癌细胞对紫杉醇敏感性的实验研究
目的 研究抑制音猬因子(Shh)信号通路对胰腺癌细胞紫杉醇敏感性的影响.方法 给予人胰腺癌SW1990细胞0、10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L的紫杉醇刺激,MTT测定细胞增殖情况,计算其半数抑制浓度约为50 nmol/L.用Western blot方法测定0、50 nmol/L紫杉醇处理后细胞中Shh信号通路蛋白Shh、锌指转录因子1(Gli1)、补丁蛋白1(Ptch 1)的表达水平.分别用紫杉醇、Shh信号通路抑制剂cyclopamine处理SW1990细胞,用紫杉醇和cyclopamine共同处理SW1990细胞,MTT测定增殖,克隆实验测定细胞克隆能力,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定细胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Shh、Gli1、Ptch 1蛋白水平.结果 10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L的紫杉醇抑制SW1990细胞的增殖,50 nmol/L的紫杉醇可以抑制细胞中Shh、Gli1、Ptch 1蛋白表达.紫杉醇和cyclopamine单独处理后的细胞增殖能力和克隆形成能力降低,细胞凋亡增多,细胞中Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平升高.与紫杉醇和cy-clopamine单独处理的细胞比较,紫杉醇和cyclopamine共同处理后的细胞增殖和克隆能力下降更多,细胞凋亡率更高,细胞中Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平更高,细胞中Shh、Gli1、Ptch 1蛋白水平更低.结论 抑制Shh信号通路能够增加胰腺癌细胞对紫杉醇的敏感性.
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冬凌草甲素干预SHH信号通路抑制人结肠癌细胞SW1116增殖的实验探讨
目的 研究冬凌草甲素对结肠癌细胞SW1116增殖的影响及机制.方法 用不同浓度的冬凌草甲素处理SW1116细胞,MTT测定细胞增殖情况,计算其半数抑制浓度.SW1116细胞分为对照组、冬凌草甲素组、Cyclopamine组、联合组,对照组细胞培养液中不添加任何药物,冬凌草甲素组细胞培养液中添加70 μmol/L的冬凌草甲素,Cyclo-pamine组细胞培养液中添加10 μmol/L的SHH信号通路抑制剂Cyclopamine,联合组细胞培养液中添加10 μmol/L的SHH信号通路抑制剂Cyclopamine和70 μmol/L的冬凌草甲素,MTT检测细胞增殖,细胞克隆实验检测克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中音猬因子(SHH)、平滑蛋白(Smo)、锌指转录因子1(Gli-1)、剪切的 Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白水平.结果 冬凌草甲素处理后的SW1116细胞增殖能力明显降低,其半数抑制浓度为(69.65 ± 6.32)μmol/L.冬凌草甲素处理后的SW1116细胞增殖、克隆形成能力明显降低,细胞凋亡率明显升高,细胞中SHH、Smo、Gli-1蛋白表达水平降低,Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高, Bcl-2蛋白表达水平降低,与未用冬凌草甲素处理的细胞比较,差异有统计学意义(P ＜0.05).SHH信号通路抑制剂处理也可以抑制SW1116细胞增殖和克隆形成,诱导SW1116细胞凋亡,促进细胞中Cleaved Caspase-3蛋白表达,减少细胞中Bcl-2蛋白表达.联合组的 SW1116细胞增殖能力和克隆形成能力下降更多,细胞凋亡增加更多,细胞中Cleaved Caspase-3蛋白水平更高,Bcl-2蛋白水平更低,与单纯冬凌草甲素处理的SW1116细胞比较,差异有统计学意义(P ＜0.05).结论 冬凌草甲素通过抑制SHH信号通路抑制结肠癌细胞增殖和克隆能力.
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髓母细胞瘤SHH信号通路及靶向抑制剂研究进展
SHH信号通路在小脑的发育形成过程中发挥着重要作用，能够调控小脑细胞正常发育周期及细胞增殖，维持小脑正常的功能和结构。SHH信号通路异常激活会出现小脑细胞异常增殖而导致髓母细胞瘤（MB）发生，是MB形成过程中具有特异性的通路之一。针对SHH信号通路靶向抑制剂治疗将成为治疗MB的新方法，能特异性地阻断特定信号转导途径，靶向于肿瘤细胞的微环境及分子表达从而抑制肿瘤生长和转移。本文就MB发病机制中的SHH信号通路和基于该信号通路靶向抑制剂的研究进展作一综述。
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Shh、Ptch、Glil与CyclinB1-CDK1在肝癌发生发展过程中的改变
目的 观察大鼠诱发肝癌过程中shh信号通路相关蛋白及细胞周期蛋白的表达变化,探讨其在肝癌发生发展过程中的作用.方法 利用二乙基亚硝胺(DEN)制备诱发性大鼠肝癌模型,通过HE染色观察肝组织的形态学变化,应用免疫组织化学方法检测Shh、Ptch、Gli1、CyclinB1、CDk1蛋白在诱发性肝癌发生过程中的表达变化.结果 根据HE染色结果将实验动物分为正常对照组、肝细胞损伤期、肝细胞增生一硬化期和肝细胞癌变期.shh、Ptch、Gli1蛋白阳性表达细胞主要分布在增生结节、癌结节、小叶间胆管上皮细胞和癌周组织中,其阳性表达率均随肝癌发生发展过程逐渐增高的趋势:CyclinB1和CDK1阳性表达的细胞主要分布于门管区、肝小叶的周边及癌结节内,在肝细胞增生一硬化期和肝细胞癌变期大鼠肝组织中表达均高于正常对照组.结论 Shh信号通路被激活后,可通过影响CyclinB1和CDK1蛋白的表达促进细胞G2/M期转变,完成有丝分裂,导致细胞失控性增殖,促进肝癌的发生发展.
关键词： 肝肿瘤 二乙基亚硝胺 细胞周期蛋白B 细胞周期蛋白质依赖激酶类 Shh信号通路 -
核因子C (Nfic)在人类牙根和骨组织发育中调控作用研究进展
人体牙齿与骨组织的发育和形成均取决于间充质干细胞的分化,在众多信号通路的调控下形成终的牙及骨.虽然二者的复杂程度不一,但牙齿和骨在组织结构和物理特性上都具有相似性,同时在发育基础上亦具有共通性.目前已证实,存在于牙乳头间充质细胞内的核因子I(nuclear factorI,NFI)家族成员C(Nfic),对牙根部牙本质形成起到关键的作用.而近些年的研究亦表明Nfic在骨组织发育的过程中同样起到非常重要的调控作用,尤其是在骨形成通路中发挥着不可替代的功能,但其具体机制仍不明确.本文就Nfic对牙根和骨发育调控作用的研究情况作一综述.
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宫颈癌中MTSS1基因与Shh信号通路的关系研究
目的 初步探讨宫颈癌中转移抑制基因1(MTSS1)与Shh信号通路间的关系.方法 取2011年12月至2015年10月期间采集的90例宫颈组织,应用实时荧光定量PCR(q-PCR)检测正常宫颈组(A组)、早期宫颈癌组(B组)及中晚期宫颈癌组(C组)中MTSS1基因及Shh信号通路相关基因的表达水平;Western印迹法及免疫组化检测MTSS1及Gli1蛋白表达情况.结果q-PCR结果显示,随着临床分期的升高,MTSS1、Ptch、Smo及Gli1基因表达水平逐渐升高,其中C组中4个基因mRNA表达量均高(P＜0.01);Western印迹结果显示,C组MTSS1蛋白表达率明显高于B组及A组(P＜0.05);免疫组化检测MTSS1及Gli1蛋白在B和C组较A组中的表达增强,其中C组中两者多为强阳性表达.结论 宫颈癌发生发展中MTSS1的表达与Shh信号调控相一致,均随癌症发展表达增强,可能同为预测宫颈癌发生发展的指标与潜在的治疗靶点.
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Sonic hedgehog信号通路在胃癌中的研究进展
Shh(Sonic hedgehog)作为重要的Hh同源基因产物,它的异常激活与胃癌的发生、发展关系密切成为近年研究热点.经典的Shh信号通路是由Shh配体、Ptch和Smo组成的受体复合物以及下游转录因子Gli蛋白(Gli1、Gli2、Gli3)组成.研究发现相比正常组织,胃癌组织中Shh的表达都有不同程度的升高,且升高程度与胃癌的发展转移呈正相关,本文就Shh信号通路与胃癌的研究进展做一综述.
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Shh基因与消化道肿瘤的关系
Hedgehog(Hh)信号通路是一条非常重要的转导途径,其异常表达将对细胞的生长、发育、增殖及分化产生深远的影响,可导致多种恶性肿瘤的发生.Sonic Hedgehog(Shh)基因是Shh信号通路的核心,该基因可作为某些肿瘤的诊断及预后评价的指标.研究显示Hh信号通路在食管癌、胃癌、髓母细胞瘤、前列腺癌等多种肿瘤中表达,且与肿瘤的发生、发展及转移密切相关.
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Patched基因在恶性肿瘤中的表达及其临床意义
Shh信号通道在胚胎发育过程中对细胞的生长、发育、增殖和分化意义重大,通道的异常会引起肿瘤的发生.Patched基因是Shh信号通道中的一种肿瘤抑制基因.近年来的许多研究发现,Patched基因的异常表达与一些恶性肿瘤的发生发展密切相关,Patched基因可以作为某些恶性肿瘤诊断和评价预后的指标,是某些恶性肿瘤生物治疗的靶标之一.本文就Patched基因在某些恶性肿瘤的表达及其临床意义予以综述.
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SHH在GES-1和其他胃癌细胞中表达差异性的比较
目的 探讨SHH在GES-1、AGS、SGC-7901和BGC-823中的表达差异性.方法 采用real time RT-PCR技术和Western blot方法研究SHH在GES-1、AGS、SGC-7901和BGC-823细胞mRNA和蛋白质水平上的表达.结果 与GES-1相比较,SHHmRNA和SHH蛋白在AGS、SGC-7901和BGC-823中的表达明显减少,差异均具有显著性(P<0.01).结论 SHH信号通路在胃癌的发生中具有重要的作用.
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Purmorphamine对神经干细胞分化的影响及其机制
背景:神经干细胞的增殖及分化一直是研究的难点和热点,有效提高神经干细胞向神经细胞的分化效率具有重要的意义.据近文献报道,小分子化合物purmorphamine在各类细胞增殖及分化实验中的应用越来越广泛.目的:探讨小分子化合物purmorphamine通过上调Shh信号通路对神经干细胞分化为各类神经细胞的促进作用.方法:从小鼠胚胎海马区分离培养得到原代神经干细胞,取第2-4代生长良好的细胞分为对照组及实验组.对照组用不添加purmorphamine的分化培养基培养,实验组用添加1 μmol/L purmorphamine的分化培养基培养.培养7,14 d后,通过免疫细胞化学、RT-qPCR方法检测神经细胞标志物的表达量.结果与结论:①体外培养的神经干细胞生长良好,神经球中的大部分细胞表达特异性标志物 nestin;②对照组及实验组均可见到TUJ1、GFAP、MAP2、MBP染色阳性;③RT-qPCR显示第7天实验组的TUJ1、GFAP、MAP2、MBP表达量均比对照组显著增高(P < 0.05);第14天实验组的Smo、Ptc1、Gli-1表达量比对照组显著增高(P < 0.05);GFAP、MAP2、MBP 的表达量也比对照组显著增高(P < 0.05);④以上数据表明purmorphmine能通过上调Shh信号通路来促进神经干细胞的分化.
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SHH信号通路在血管平滑肌细胞增殖和凋亡中的作用
目的 探讨Sonic Hedgehog(SHH)信号通路在血管平滑肌细胞增殖和凋亡中的作用.方法 在培养液中加入或不加SHH信号通路特异抑制剂Cyclopamine体外培养人血管平滑肌细胞,然后用四唑蓝(MTT)比色试验检测细胞的增殖情况,采用流式细胞术检测细胞周期,分别计算增殖指数(PI)和凋亡指数(AI).结果MTT结果显示,Cyclopamine对血管平滑肌的抑制具有时间及浓度依赖性；流式细胞术检测结果显示,Cyclopamine使血管平滑肌增殖指数降低,凋亡指数升高.结论 SHH信号通路在血管平滑肌细胞增殖和凋亡中发挥重要作用.
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局灶性脑缺血大鼠纹状体区域Shh信号通路成分的表达变化及对髓鞘修复的影响
目的 检测Sonic Hedgehog (Shh)信号通路及其转录因子Gli1在局灶性脑缺血后不同时间点的表达变化,探讨该通路对脑缺血后髓鞘再生的影响.方法 线栓法建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,使用免疫组化和RT-PCR的方法观察脑缺血后1d,3d,7d和14 d Shh,Gli1的表达变化.碱性髓鞘蛋白(myelin basic protein,MBP)是髓鞘的组成成分,用作髓鞘的标志物,观察脑缺血后上述各时间点MBP的表达变化.结果 正常大鼠Shh和Gli1广泛分布于脑白质和灰质,如皮质,胼胝体和纹状体等区域.Shh和Gli1的表达在脑缺血后3d～14d呈逐渐上升趋势.MBP的表达在脑缺血后1 d～28d逐渐下降.结论 脑缺血性损伤可激活Shh信号通路,激活的Shh可能通过调控细胞的增殖参与神经修复,针对Shh的表达量进行干预治疗将为脱髓鞘疾病的治疗提供理论依据.
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特异性激活SHH通路对急性脑缺血大鼠血管再生影响
目的 探讨应用purmorphamine特异性激活SHH信号通路对大鼠脑缺血区血管再生的影响.方法 采用线栓法制备大鼠急性大脑中动脉脑缺血模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、给药组,其中给药组给予purmorphamine腹腔注射.于术后6h、12h、24h、48h通过免疫组化测定脑缺血后不同时相各组CD105和VEGF表达,PCR测定不同时相各组PTCH-1表达.结果 模型组VEGF、CD105、PTCH-1表达明显高于假手术组(P＜0.05)；给药组与模型组相比较各时间点VEGF、CD105和PTCH-1表达明显增多,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 激活SHH通路可增加脑缺血组织的VEGF和CD105表达,促进急性脑缺血大鼠的血管再生.
关键词： Shh信号通路 血管再生 Purmorphamine -
SHH的激活对永久性脑缺血大鼠细胞骨架蛋白α-tubulin、MAP-2表达的影响
目的 探讨应用purmorphamine激活SHH信号通路后对大鼠脑缺血区细胞骨架蛋白α-tubulin、MAP-2的影响.方法 采用线栓法制备大鼠急性大脑中动脉脑缺血模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组和给药组,其中给药组给予purmorphamine腹腔注射.于术后1d、3d、7d、14d用免疫组化法测定脑缺血后不同时相α-tubulin、MAP-2的表达,用RT-PCR测定Gli-1的表达.结果 假手术组各时间点α-tubulin、MAP-2、Gli-1的表达差异无统计学意义；与之相比,模型组α-tubulin、MAP-2各时间点含量明显低于假手术组(P＜0.05)；给药组与模型组比较在1d、3d、7d各时间点α-tubulin、MAP-2的表达明显增多,差异有统计学意义(P＜0.05),第14天时趋于稳定；而给药组Gli-1各时间点的表达明显高于假手术组和模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 激活SHH信号通路可促进缺血区α-tubulin、MAP-2表达增加,这可能是其减轻脑缺血后神经损伤的机制之一.
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特异激活SHH信号通路对急性脑缺血大鼠NGF、BDNF表达的影响
目的 研究特异激活SHH信号通路对急性脑缺后大鼠NGF、BDNF表达的影响.方法 将大鼠随机分为假手术组(只分离血管不插线栓)、模型组、药物组,药物组于术后给予purmorphamine腹腔注射.术后6h、24h、48h、72h、7d,通过免疫组化法检测大鼠脑组织NGF、BDNF和通过Real-time PCR检测大鼠脑组织GLI-1 mRNA的表达.结果 模型组NGF、BDNF、GLI-1 mRNA表达明显高于假手术组(P＜0.05),药物组与模型组在各个时间点NGF、BDNF、GLI-1 mRNA表达明显增多,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 激活SHH信号通路后可增加NGF、BDNF的表达,促进急性脑缺血后神经元修复.
