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Purmorphamine 对 BV2细胞帕金森病相关基因 Nurr1表达的影响
目的：探讨Purmorphamine（PM）激活小胶质细胞瘤BV2细胞中Sonic hedgehog（SHH）信号通路对帕金森病（PD）相关基因Nurr1表达的影响。方法体外培养BV2小胶质细胞并分为对照组、脂多糖（LPS）处理组、PM＋LPS处理组以及PM处理组，运用荧光定量 PCR（Q‐PCR）检测经LPS处理后BV2细胞中SHH信号通路Smoothened（Smo）、Gli1及Nurr1基因mRNA 表达情况；PM 激活SHH信号通路后，Q‐PCR检测Nurr1 mRNA含量以及炎性反应因子白细胞介素‐1β（IL‐1β）、肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）的mRNA 表达情况。结果（1）与对照组相比，LPS处理后4 h和24 h时Smo和Gli1 mRNA表达均升高（P＜0.01，P＜0.05）；（2）与对照组相比，PM处理组细胞Smo和Gli1 mRNA表达升高（P＜0.01），LPS组Nurr1、IL‐1β、TNF‐αmRNA表达亦均升高（均 P＜0.01）；而PM＋LPS组Nurr1、IL‐1β、TNF‐αmRNA表达均较LPS处理组下降（均 P＜0.01）。结论PM激活SHH信号通路能够抑制BV2细胞中Nurr1的表达，并能发挥抑制炎性反应作用。
关键词： Purmorphamine BV2细胞 帕金森病 Nurr1 炎症 -
Purmorphamine对神经干细胞分化的影响及其机制
背景:神经干细胞的增殖及分化一直是研究的难点和热点,有效提高神经干细胞向神经细胞的分化效率具有重要的意义.据近文献报道,小分子化合物purmorphamine在各类细胞增殖及分化实验中的应用越来越广泛.目的:探讨小分子化合物purmorphamine通过上调Shh信号通路对神经干细胞分化为各类神经细胞的促进作用.方法:从小鼠胚胎海马区分离培养得到原代神经干细胞,取第2-4代生长良好的细胞分为对照组及实验组.对照组用不添加purmorphamine的分化培养基培养,实验组用添加1 μmol/L purmorphamine的分化培养基培养.培养7,14 d后,通过免疫细胞化学、RT-qPCR方法检测神经细胞标志物的表达量.结果与结论:①体外培养的神经干细胞生长良好,神经球中的大部分细胞表达特异性标志物 nestin;②对照组及实验组均可见到TUJ1、GFAP、MAP2、MBP染色阳性;③RT-qPCR显示第7天实验组的TUJ1、GFAP、MAP2、MBP表达量均比对照组显著增高(P < 0.05);第14天实验组的Smo、Ptc1、Gli-1表达量比对照组显著增高(P < 0.05);GFAP、MAP2、MBP 的表达量也比对照组显著增高(P < 0.05);④以上数据表明purmorphmine能通过上调Shh信号通路来促进神经干细胞的分化.
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特异性激活SHH通路对急性脑缺血大鼠血管再生影响
目的 探讨应用purmorphamine特异性激活SHH信号通路对大鼠脑缺血区血管再生的影响.方法 采用线栓法制备大鼠急性大脑中动脉脑缺血模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、给药组,其中给药组给予purmorphamine腹腔注射.于术后6h、12h、24h、48h通过免疫组化测定脑缺血后不同时相各组CD105和VEGF表达,PCR测定不同时相各组PTCH-1表达.结果 模型组VEGF、CD105、PTCH-1表达明显高于假手术组(P＜0.05)；给药组与模型组相比较各时间点VEGF、CD105和PTCH-1表达明显增多,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 激活SHH通路可增加脑缺血组织的VEGF和CD105表达,促进急性脑缺血大鼠的血管再生.
关键词： Shh信号通路 血管再生 Purmorphamine -
SHH的激活对永久性脑缺血大鼠细胞骨架蛋白α-tubulin、MAP-2表达的影响
目的 探讨应用purmorphamine激活SHH信号通路后对大鼠脑缺血区细胞骨架蛋白α-tubulin、MAP-2的影响.方法 采用线栓法制备大鼠急性大脑中动脉脑缺血模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组和给药组,其中给药组给予purmorphamine腹腔注射.于术后1d、3d、7d、14d用免疫组化法测定脑缺血后不同时相α-tubulin、MAP-2的表达,用RT-PCR测定Gli-1的表达.结果 假手术组各时间点α-tubulin、MAP-2、Gli-1的表达差异无统计学意义；与之相比,模型组α-tubulin、MAP-2各时间点含量明显低于假手术组(P＜0.05)；给药组与模型组比较在1d、3d、7d各时间点α-tubulin、MAP-2的表达明显增多,差异有统计学意义(P＜0.05),第14天时趋于稳定；而给药组Gli-1各时间点的表达明显高于假手术组和模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 激活SHH信号通路可促进缺血区α-tubulin、MAP-2表达增加,这可能是其减轻脑缺血后神经损伤的机制之一.
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特异激活SHH信号通路对急性脑缺血大鼠NGF、BDNF表达的影响
目的 研究特异激活SHH信号通路对急性脑缺后大鼠NGF、BDNF表达的影响.方法 将大鼠随机分为假手术组(只分离血管不插线栓)、模型组、药物组,药物组于术后给予purmorphamine腹腔注射.术后6h、24h、48h、72h、7d,通过免疫组化法检测大鼠脑组织NGF、BDNF和通过Real-time PCR检测大鼠脑组织GLI-1 mRNA的表达.结果 模型组NGF、BDNF、GLI-1 mRNA表达明显高于假手术组(P＜0.05),药物组与模型组在各个时间点NGF、BDNF、GLI-1 mRNA表达明显增多,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 激活SHH信号通路后可增加NGF、BDNF的表达,促进急性脑缺血后神经元修复.
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purmorphamine促进人牙周膜干细胞应力成骨
目的 研究purmorphamine在动态张应力促人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,PDLSCs)向成骨细胞分化过程中的作用.方法 分离培养鉴定PDLSCs,在矿化诱导环境中加入purmorphamine,采用Flexcell FX4000T应力加载系统对细胞加力24 h,以Red-time PCR检测成骨相关指标Runx2、alkaline phosphatase(ALP)以及Hedgehog(Hh)通路的标志物GLI1、Pathed1( PTCH1)、Smoothend(SMO).结果 动态张应力作用24 h后,成骨相关指标Runx2、ALP,Hh通路的标志物GHI1、PTCH1、SMO的表达水平明显升高(P＜0.05)；加入purmorphamine后,成骨相关指标Runx2、ALP,Hh通路的标志物GLI1、PTCH1、SMO的表达水平较加力组均有增强,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 purmorphamine可能通过激活Hh通路,进而增强人PDLSCs应力条件下向成骨细胞分化.
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SHH信号通路的激活对帕金森病模型小鼠的保护及其机制
目的:为探讨Sonic Hedgehog (Shh)信号通路激活剂,2,6,9-三取代嘌呤化合物(purmorphamine,PM)对帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型动物中小鼠身体的协调能力、多巴胺能神经元及小胶质细胞细胞活性的影响及可能机制.方法:将47只C57BL/6J雄性8周小鼠随机分为control组、PM组、MPTP组、PM+ MPTP组,使用腹腔注射l-methyl-4-phenyl 1,2,3,6-tet-rahydropyridine (MPTP)制作小鼠的帕金森病模型.应用悬杆实验、免疫组织化学和实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR,Q-PCR)技术分别检测小鼠的运动协调能力,酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性的多巴胺(DA)能神经元的形态、数目,Ionized calcium binding adapter molecule 1(Iba1)阳性的小胶质细胞的形态以及炎症因子TNF-α的表达情况.结果:(1)悬杆实验显示:在预处理PM24 h后MPTP诱导的PD模型小鼠中,与MPTP组相比,PM+ MPTP组小鼠后爪抓到横杆的时间明显缩短(P＜0.01);而与control组相比,MPTP组中小鼠后爪抓到横杆的时间显著延长(P＜0.01).(2)TH免疫组织化学结果显示:control组TH+DA能神经元染色很深,胞体密集,突起明显;与control组相比,MPTP组TH+DA能神经元的数量明显减少,细胞质着色变浅,突起变短或者消失(P＜0.01);与MPTP组相比,PM+ MPTP组TH+DA能神经元不仅使损失细胞的数目明显减少,而且细胞质染色变深,突起有所增多(P＜0.01).(3) Iba1免疫组织化学染色显示:与control相比,MPTP组小胶质细胞变大、形态不规则、突起变粗;与MPTP组相比,PM+ MPTP组小胶质细的胞体形态较小,突起呈现细长较多.(4) Q-PCR检测结果显示:与control组相比,MPTP组TNF-α和Iba1mRNA表达明显增加(P＜0.01);与MPTP组对比,PM+ MPTP组表达的TNF-α和Iba1 mRNA水平明显降低(P＜0.01).结论:PM可改善PD模型小鼠的运动协调能力,保护多巴胺能神经元,其机制可能与降低小胶质细胞的炎症水平有关.
关键词： Purmorphamine 帕金森病 炎症 小胶质细胞 小鼠 -
Purmorphamine对帕金森病炎症细胞模型的影响及其作用机制
为探讨Shh信号通路激活剂,2,6,9-三取代嘌呤化合物(Purmorphamine,PM)对帕金森病炎症细胞模型中炎症因子TNF-α,IL-1β和Peli1等的表达,以及对PC12细胞的影响及其作用机制,本研究应用MTT法和实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,Q-PCR)技术分别检测了细胞活性和相关基因的表达.结果显示:(1)MTT法检测结果显示:与对照组细胞相比,脂多糖(LPS)组、PM组和二甲基亚砜(DMSO)组BV2细胞的存活率无明显差异(P＞0.05);而与LPS组相比,PM+ LPS组PC12细胞的存活率显著升高(P＜0.01).2)Q-PCR实验结果显示:与对照组相比,LPS-24 h组TN F-α、IL-1β、Peli1的表达显著升高,LPS-4 h组Smo和Gli1的表达显著升高,而LPS-24 h组TRAF3表达显著下降(P＜0.01);与对照组相比,PM-24 h组的Smo、Gli1表达显著升高(P＜0.01);与LPS组相比,PM +LPS组BV2细胞TRAF3的表达显著升高,而炎症因子TNF-α,IL-1β,Peli1的表达显著下降(P＜0.01).由此我们推测:PM可提高炎症因子作用下PC12细胞的存活率,其作用机制可能与增加TRAF3的表达有关.
关键词： Purmorphamine 帕金森病 BV2细胞 PC12细胞 炎性因子 -
维甲酸联合Purmorphamine诱导人脐带间充质干细胞向运动神经元分化的研究
目的:探讨单独和联合应用维甲酸( retinoic acid,RA)与purmorphamine(2,6,9-三取代嘌呤化合物,PM)对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)向运动神经元分化的影响,为其进一步临床应用提供实验依据.方法:用双酶消化法提取纯化hUCMSCs,取传至第3代的hUCMSCs,流式细胞仪检测表面抗原CD29、CD31、CD34、CD44的表达情况.根据加入不同诱导剂分4组:空白对照组;RA组(加入0.5 μg/ml RA);PM组(加入1μg/ml PM);RA+ PM组(加入0.5 μg/ml RA和1μg/ml PM).细胞诱导后第20d,观察细胞形态的变化;采用免疫细胞化学方法检测Nestin、β-tubulin-Ⅲ、Hb9、ChAT的表达情况,比较各组细胞阳性表达的比例.RA+ PM组细胞诱导5、10、15、20、25 d后收集细胞,检测细胞内Ach的含量.结果:流式细胞仪检测结果显示,CD29、CD44高表达,CD31阴性,CD34不表达.空白对照组和PM组细胞诱导后形态变化不明显,Nestin和β-tubulin-Ⅲ阳性表达率均很低,两者之间无差别.RA组和RA+ PM组的诱导后细胞具有典型的神经元样形态;且Nestin和β-tubulin-Ⅲ阳性表达率比其他两组高,有显著性差异(P＜0.01).4组中只有RA+ PM组细胞诱导后出现Hb9表达阳性,其他各组均无Hb9表达.RA+ PM组ChAT高表达,RA组仅少量表达.从第15 d起,RA+ PM组细胞可检测到Ach,其含量随着诱导时间的延长逐渐增加.结论:RA能促进hUCMSCs向神经元分化,单独使用PM并没有明显效果,而RA联合PM能显著促进hUCMSCs向运动神经元分化.
关键词： 人脐带间充质干细胞 运动神经元 维甲酸 Purmorphamine 诱导
