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白细胞介素1β诱导肾小管上皮细胞转分化及其对细胞骨架的影响
目的:观察白细胞介素1β(IL-1β)诱导肾小管上皮细胞转分化及其对细胞骨架的调节作用.方法:选择永生化的大鼠肾小管上皮细胞株NRK52E,经体外培养后以IL-1β(30 μg/L)分别诱导3天及6天,观察细胞形态;RT-PCR半定量检测细胞α-平滑肌动蛋白(α-SMA)和细胞骨架成分β-actin、α-tubulin的 mRNA表达;免疫荧光染色观察α-SMA蛋白表达及骨架蛋白β-actin、α-tubulin在细胞内的分布及排列.结果:培养的NRK52E细胞经IL-1β体外诱导3天及6天后,细胞中α-SMA mRNA及蛋白表达水平与相应的对照组细胞比较明显增多(P＜0.001),提示NRK52E上皮细胞出现了表型转化,此时培养细胞的形态也发生了改变,由典型的多边铺路石样变为成纤维细胞样,并有多个突起,细胞骨架蛋白β-actin mRNA的表达也稍有增多(P＜0.05);其蛋白的分布排列也发生了改变,由胞膜转移至核周及胞浆,形成束状纤维样结构.但IL-1β诱导组细胞的另一个骨架蛋白α-tubulin mRNA表达和分布与对照组比较无明显不同.结论:IL-1β能够诱导体外培养的NRK52E细胞转分化,此过程中细胞形态变为成纤维细胞样,多突起;骨架蛋白β-actin也表达增加,并出现了骨架重建;而α-tubulin在此过程中则没有明显变化.
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SHH的激活对永久性脑缺血大鼠细胞骨架蛋白α-tubulin、MAP-2表达的影响
目的 探讨应用purmorphamine激活SHH信号通路后对大鼠脑缺血区细胞骨架蛋白α-tubulin、MAP-2的影响.方法 采用线栓法制备大鼠急性大脑中动脉脑缺血模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组和给药组,其中给药组给予purmorphamine腹腔注射.于术后1d、3d、7d、14d用免疫组化法测定脑缺血后不同时相α-tubulin、MAP-2的表达,用RT-PCR测定Gli-1的表达.结果 假手术组各时间点α-tubulin、MAP-2、Gli-1的表达差异无统计学意义；与之相比,模型组α-tubulin、MAP-2各时间点含量明显低于假手术组(P＜0.05)；给药组与模型组比较在1d、3d、7d各时间点α-tubulin、MAP-2的表达明显增多,差异有统计学意义(P＜0.05),第14天时趋于稳定；而给药组Gli-1各时间点的表达明显高于假手术组和模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 激活SHH信号通路可促进缺血区α-tubulin、MAP-2表达增加,这可能是其减轻脑缺血后神经损伤的机制之一.
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As2O3诱导胃癌细胞凋亡及细胞骨架改变病理学观察
目的观察As2O3对胃腺癌细胞株SGC-7901凋亡的诱导作用及凋亡细胞骨架的改变.方法选用不同剂量As2O3处理SGC-7901细胞,分不同时问组,应用MTT法、光镜、透射电镜、TUNEL法和FCM法检测As2O3对细胞生长影响及对凋亡的诱导作用,应用荧光染色在激光共聚焦显微镜下观察凋亡细胞F-actin和α-tubulin的结构.结果As2O3抑制该细胞株的生长,MTT法显示抑制程度具有时间和剂量效应关系.光镜及透射电镜观察发现2μmol/LAs2O3作用96 h后细胞数明显减少,并出现典型的凋亡形态.TUNEL法显示2 μmol/L As2O3作用后,凋亡细胞阳性率随时间延长而增加(P＜0.05),作用96h的阳性率为(7.33±1.83)%.FCA法显示2 μmol/LAs2O3作用96 h后细胞的凋亡率为8.48%,并出现凋亡峰.激光共聚焦显微镜观察显示在细胞凋亡过程中,F-actin和α-tubulin均发生解聚和重排.结论As2O3对胃癌细胞株SGC-7901具有抑制生长及诱导凋亡的作用.微丝和微管的改变在凋亡形态变化中起着重要的作用.
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HDAC6在肿瘤细胞侵袭与凋亡自噬中的作用
0 引言近年来研究发现,组蛋白脱乙酰化酶H DAC6在肿瘤的发生和转化中具有重要的作用[1].HDAC6是第Ⅱ类组蛋白脱乙酰化酶的一个特殊成员,具有两个同源的催化结构域,每一个催化结构域都具有完整的生物功能,可以使HDAC6蛋白完全激活[2].HDAC6在羧基端含有一个泛素结合的锌指结构(称为ZnF-UBP结构域)和动力蛋白结合结构域.HDAC6的泛素结合结构有利于形成压力颗粒( stress granules,SG),干扰微管的排列或者损伤动力蛋白都会阻止SG的形成;HDAC6的锌脂结构域(ZnF-UBP)在清除错误折叠的蛋白质所造成的细胞毒性方面起关键作用.
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缺氧海马神经元中KATP对p53下游基因α-tubulin表达的影响
目的 了解缺氧海马神经元中,KATV对p53下游基因α-tubulin表达的影响.方法 原代培养7d后,将神经元随机分为常氧组、常氧+药物(KATP激动剂二氮嗪和抑制剂甲苯磺丁脲)组、单纯缺氧组(5%CO2,和95%N2)、缺氧+药物(KATP激动剂二氮嗪和抑制剂甲苯磺丁脲)组,采用倒置显微镜和NF免疫组织化学法观察细胞生长和形态,MTT法检测细胞凋亡率,RT-PCR检测各下游基因的mRNA表达水平.结果 单纯缺氧组、缺氧+二氮嗪组和缺氧+甲苯磺丁脲组的多级神经元的百分率分别是(20.6±2.0)%、(26.1±1.7)%和(8.7±1.7)%,各加药组与单纯缺氧组比较均有统计学意义(P<0.01);细胞存活率分别是(75.7±2.8)%、(55.7±2.5)%和(81.1±2.4)%,各缺氧+药物组与单纯缺氧组比较差异有统计学意义(P<0.01).缺氧组中α-tubulin的mRNA表达水平与常氧时比较明显下降(P<0.01),缺氧+二氮嗪组和缺氧+甲苯磺丁脲组的mRNA表达水平与单纯缺氧组相比差异无统计学意义(P>0.05).而在常氧时各用药组中多极神经元的百分率、细胞存活率以及α-tubulin的mRNA表达水平与常氧组相比差异没有统计学意义.结论 缺氧时KATP对细胞具有保护作用,KATP对α-tubulin的表达没有显著性影响.
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α-tubulin及P53在结肠癌中的表达及其临床意义
目的研究α-tubulin及P53在结肠癌、癌旁正常组织中的表达。方法应用免疫组化SP法检测72例结肠癌、36癌旁正常组织中的α-tubulin及P53表达，分析两种蛋白在结肠癌发生发展过程中相关性。结果α-tubulin及P53在结肠癌组织的阳性表达率分别为62.5%(45/72)、69.4%(50/72)，明显高于癌旁正常组织中的表达率，分别为5.6%、5.6%,值均<0.05,差异有统计学意义；两者在结肠癌中表达有相关性(r=0.358 P<0.05)，两者在结肠癌中表达均与肿瘤TNM分期、浸润深度密切相关(P<0.05)，与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度无关(>0.05)。结论α-tubulin及P53在结肠癌中呈现高表达，提示STK15、α-tubulin可能共同参与了结肠癌发生发展的过程,可能为结肠癌患者临床诊疗提供依据。
