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胃癌中HMGA2与HDAC6表达的临床意义及其相关性
目的 检测胃癌中高迁移率族蛋白2 (HMGA2)和组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)在胃癌中的表达情况及相关关系,分析其与临床病理特征的关系.方法 分别用免疫组织化学法、Western blot和real-time PCR检测82例配对人胃癌、癌旁及正常组织中HMGA2和HDAC6的蛋白及mRNA表达,并分析其与临床病理参数的关系及两者表达的相关性.结果 胃癌组织中HMGA2和HDAC6蛋白阳性表达率分别为69.51％ (57/82)和65.85％(54/82),明显高于癌旁组织14.63％(12/82)、12.20％(10/82)和正常组织9.76％(8/82)、7.32％ (6/82) (P ＜0.05);胃癌组织HMGA2、HDAC6蛋白和mRNA表达较癌旁组织及正常组织高(P＜0.05),且两者表达水平与肿瘤的临床分期和淋巴结转移相关(P＜0.05);HMGA2和HDAC6在胃癌组织中的表达呈明显正相关(r=0.56,P＜0.05).结论 HMGA2和HDAC6基因在胃癌组织中存在高表达且共存现象,可能与胃癌恶性程度有关.
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HDAC2和HDAC6在新疆哈萨克族食管鳞癌中的表达及意义
目的：探讨组蛋白去乙酰化酶2和6（ HDAC2和HDAC6）在新疆哈萨克族食管鳞癌组织中的表达及临床意义。方法：采用免疫组化方法检测74例食管鳞癌患者癌组织和30例正常食管粘膜组织中HDAC2和HDAC6的表达情况，并分析二者表达的相关性及其与临床病理特征的关系。结果：HDAC2和HDAC6在新疆哈萨克族食管鳞癌患者癌组织中的阳性表达率显著高于正常食管粘膜组织（p＜0．01）。 HDAC2和HDAC6的表达强度均与TNM分期和淋巴结转移相关（p＜0．05），HDAC6的表达还与癌的浸润深度相关（p＜0．05），二者均与癌的分化程度无关（P＞0．05）。二者的表达呈正相关。结论：新疆哈萨克族食管鳞癌的发生可能与HDAC2和HDAC6的表达有关。
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HDAC6小分子RNA对子宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制
宫颈癌的发生位居女性肿瘤的第3位,每年全球范围大约有371 200例新病例被诊断,由于其高达51％的病死率而成为公众关注的健康问题[1].然而,目前对于宫颈癌的治疗主要是基于铂类药物为基础的化疗以及手术和放疗,这些治疗的效果十分有限[2].组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)6属于Ⅱ型HDAC家族,在所有的18个HDAC家族成员中,HDAC6具有独特的结构和生物学特性,即具有两个功能性的去乙酰化结构域和一个锌指基序,这两个功能性的去乙酯化结构域是HDAC6发挥生物学活性所必需的[3-4].目前,越来越多的研究显示,HDAC6与肿瘤的发生、发展关系密切,包括卵巢癌[5]、小儿急性髓细胞样白血病[6]、神经母细胞瘤[7]、胃癌和结肠癌[8]等.本研究利用RNA干扰技术探讨HDAC6表达下调对宫颈癌细胞系HeLa细胞增殖和细胞凋亡的影响,并初步探讨其相应的分子机制.
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HDAC6表达下调对食管鳞癌细胞周期影响的研究
目的:研究HDAC6 siRNA对食管鳞癌EC9706细胞中HDAC6的干扰效果,以及HDAC6表达下调对食管鳞癌细胞增殖能力、细胞周期的影响.方法:将食管鳞癌EC9706细胞分为未处理组、对照siRNA组和HDAC6 siRNA组3组,后2组分别转染对照siRNA和HDAC6 siRNA.采用半定量反转录—聚合酶链反应、蛋白质印迹及免疫细胞化学检测各组食管鳞癌EC9706细胞中HDAC6 siRNA对HDAC6的干扰效果；采用CCK-8试剂盒检测各组细胞增殖能力的变化；运用流式细胞术检测各组细胞的细胞周期的变化.结果:HDAC6 siRNA组的HDAC6 mRNA表达的相对水平为0.044,HDAC6蛋白表达相对水平为0.114,与未处理组(0.951、0.924)和对照组(0.947、0.905)相比,HDAC6 mR-NA和蛋白的表达均显著下调,t值分别为2.24和2.52,P＜0.05；细胞增殖明显受抑制,且G0/G1期的比率为(68.55±2.01)％,显著高于未处理组(45.64±1.26)％和对照siRNA组(46.23±1.39)％,S期的比率(25.93±0.73)％显著低于未处理组(33.13±1.02)％和对照siRNA组(32.98±0.91)％,差异均有统计学意义,P＜0.05.结论:HDAC6 siRNA能有效下调食管鳞癌EC9706细胞中HDAC6 mRNA和蛋白的表达；HDAC6表达下调能明显抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖并能诱导细胞周期静止在G0/G1期.
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HDAC6与P21WAF1在胃癌组织中表达及意义
目的:探讨HDAC6与P21WAF1在胃癌发生、发展中的作用及其相关性,为胃癌的早期诊断、治疗和判断预后提供依据.方法:应用SP免疫组化法分别检测40例胃癌、30例癌前病变组及32例正常胃黏膜组中HDAC6及P21WAF1蛋白的阳性表达情况.结果:HDAC6组织表达阳性率在胃癌,癌前病变及正常对照组依次降低,分别为65.0%,43.3%,15.6%(P<0.01),P21WAF1组织表达阳性率在胃癌,癌前病变及正常对照组依次升高,分别为45.0%,63.3%和81.3%(P<0.01).HDAC6的表达在分化程度越低、分期越高和淋巴结转移胃癌组织中显著升高(P<0.05);P21WAF1蛋白阳性表达则相反,在分化程度越低、分期越高和淋巴结转移胃癌组织中显著降低(P<0.05).胃癌组织中HDAC6与P21WAF1 的表达呈负相关(r=-0.495,P<0.01);癌前病变黏膜组织中HDAC6与P21WAF1的表达呈负相关(r=-0.451,P<0.05).结论:HDAC6与P21WAF1的异常表达可能与促进胃癌的发生、发展和浸润转移有关.HDAC6可能通过下调P21WAF1的表达,导致并促进胃癌的发生发展.HDAC6和P21WAF1可能作为胃癌诊断和预后判断的指标及胃癌治疗的新靶点.
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HDAC6在ER阳性乳腺癌中的表达及与内分泌治疗疗效关系
目的:探讨雌激素调节基因组蛋白脱乙酰基酶6(HDAC6)的表达与乳腺癌临床病理学参数、预后及辅助三苯氧胺(TAM)内分泌治疗疗效的关系,明确HDAC6对辅助内分泌治疗的指导地位.方法:采用免疫组化方法检测93例雌激素受体(ER)阳性原发乳腺癌HDAC6的表达,统计学分析其与临床病理学参数及预后的关系.结果:①原发ER(+)乳腺癌HDAC6的阳性表达为27.96%②HDAC6表达与临床分期、肿瘤大小密切相关,在肿瘤比较大、临床分期晚的患者中高表达(P＜0.05).与患者年龄、月经状态、腋淋巴结转移数目、PR状态、CerbB-2状态无相关性.③HDAC6与ER(+)乳腺癌的生存期呈负相关.生存期大于10年组中HDAC6阳性率明显低于生存期小于10年组(P＜0.05);Kaplan-Meiler分析表明HDAC6是预测DFS的预后因素.结论:在ER(+)乳腺癌HDAC6与生存期呈负相关,是预后差的指标,而且是预测ER阳性乳腺癌患者辅助内分泌治疗疗效的敏感指标.
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靶向沉默HDAC6对乳鼠心房肌成纤维细胞活化增殖的作用
目的 探究组蛋白去乙酰化酶(HDAC6)对乳鼠心房肌成纤维细胞活化增殖的影响作用.方法 将50只乳鼠(雄性)分别提取心房肌成纤维细胞,应用Western blot法测定HDAC6和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况;运用qRT-PCR技术检测HDAC6和α-SMA mRNA的表达情况;MTT法检测心房肌成纤维细胞的细胞增殖活性;使用LipofectamineTM 2000 Reagent向心房肌成纤维细胞中转染小干扰RNA HDAC6(siRNA-HDAC6)后观察对心房肌成纤维细胞增殖的影响.结果 转染心房肌成纤维细胞siRNA-HDAC6组HDAC6和α-SMA的蛋白表达明显下降;qRT-PCR技术检测siRNA-HDAC6组中HDAC6和α-SMA的mRNA表达明显下降;转染siRNA-HDAC6明显抑制心房肌成纤维细胞的增殖活性.结论 靶向沉默HDAC6可抑制心房肌成纤维细胞活化增殖,提示其在心房纤维化中可能发挥调控作用.
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siRNA沉默HDAC6对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响
目的 探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响.方法 选取宫颈癌细胞Hela,分别转染Control siRNA和HDAC6 siRNA,转染后的细胞中分别加入不同浓度的顺铂.采用RT-PCR法检测HDAC6 mRNA表达,Western blot检测HDAC6、Bcl-2、Bax蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡,MTT法检测细胞在顺铂作用下的体外存活率.结果 HDAC6 siRNA组HDAC6 mRNA表达(82.3±24.5)低于空白对照组(352.7±89.2)及Control siRNA组(361.7±77.6)(均P<0.05);HDAC6 siRNA组HDAC6、Bcl-2蛋白表达[(118.7±20.9)、(179.5±44.6)]低于空白对照组[(558.4±105.5)、(494.1±65.3)]及Control siRNA组[(564.9±98.5)、(487.2±74.1)](均P<0.05),Bax蛋白表达(448.6±70.8)显著高于空白对照组(189.7±60.3)及Control siRNA组(194.2±68.4)(均P<0.05).HDAC6 siRNA组细胞凋亡率(37.6±8.7)％,高于空白对照组的(5.8±1.1)％及Control siRNA组的(6.4±1.3)％.不同浓度顺铂作用后,HDAC6 siRNA组IC50值较空白对照组及Control siRNA组显著降低(均P<0.05).结论 沉默HDAC6表达可提高宫颈癌Hela细胞对顺铂的敏感性,而促细胞凋亡可能是其主要作用机制.
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HDAC6在肿瘤细胞侵袭与凋亡自噬中的作用
0 引言近年来研究发现,组蛋白脱乙酰化酶H DAC6在肿瘤的发生和转化中具有重要的作用[1].HDAC6是第Ⅱ类组蛋白脱乙酰化酶的一个特殊成员,具有两个同源的催化结构域,每一个催化结构域都具有完整的生物功能,可以使HDAC6蛋白完全激活[2].HDAC6在羧基端含有一个泛素结合的锌指结构(称为ZnF-UBP结构域)和动力蛋白结合结构域.HDAC6的泛素结合结构有利于形成压力颗粒( stress granules,SG),干扰微管的排列或者损伤动力蛋白都会阻止SG的形成;HDAC6的锌脂结构域(ZnF-UBP)在清除错误折叠的蛋白质所造成的细胞毒性方面起关键作用.
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Ac-SDKP通过调节HDAC6和HSP90抑制矽肺纤维化的机制研究
目的 探讨Ac-SDKP通过对组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)、热休克蛋白90(HSP90)的调节,抑制大鼠矽肺纤维化的作用机制.方法 非暴露式支气管内灌注法复制大鼠矽肺模型,分为对照4周组、矽肺模型4周组、对照8周组、矽肺模型8周组、Ac-SDKP抗纤维化治疗组和Ac-SDKP预防治疗组.采用转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导原代培养新生大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化,并予以Ac-SDKP和HDAC6特异性抑制剂TCS HDAC620b预处理.采用苏木精-伊红染色法观察病理形态变化,免疫组织化学法、Western blot检测Ⅰ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、HDAC6及HSP90的表达.结果 免疫组织化学法结果显示,HDAC6和HSP90阳性表达主要位于矽结节内,给予Ac-SDKP抗纤维化治疗或预防治疗均能抑制Ⅰ型胶原、α-SMA、HDAC6及HSP90蛋白表达的上调.而TGF-β1能诱导大鼠成纤维细胞 α-SMA阳性表达,同时伴随HDAC6和HSP90蛋白表达上调,而予以TCS HDAC620b或Ac-SDKP预处理均能抑制该变化.结论 Ac-SDKP能够通过对HDAC6和HSP90信号的调节,在体内外抑制矽肺大鼠肌成纤维细胞分化和胶原沉积,从而发挥抗矽肺纤维化的作用.
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HDAC6的抑制效应在减轻七氟烷所致神经元损伤作用的研究
目的:探讨对HDAC6(histone deacetylase 6)的抑制效应是否可以作为拮抗七氟烷所致神经元损伤的重要靶点.方法:取新生1-3 d的C57BL/6乳鼠的皮层神经元作原代体外培养,将第5 d的原代神经元用4％的七氟烷处理6 h.通过免疫荧光染色来确定原代神经元的生长状况,在荧光显微镜观察神经元的微管结构损伤情况,Hoechst/PI染色检测神经元的凋亡坏死率.结果:4％的七氟烷处理6 h可以导致神经元的微管结构出现明显损伤,进而导致神经元凋亡,而HDAC6的抑制剂TSA可以通过稳定微管结构明显地改善神经元的存活情况.结论:HDAC6有可能是拮抗七氟烷所致神经元损伤的新靶点.
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下调HDAC6表达对食管鳞癌细胞周期、细胞迁移的影响及其分子机制探讨
目的:探讨组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)表达的下调对食管鳞癌细胞周期、细胞迁移的影响及其分子机制.方法:将食管鳞癌EC9706细胞分为三组,即未处理组、对照siRNA组和HDAC6 siRNA组,后两组分别转染对照siRNA和HDAC6 siRNA.采用半定量反转录-聚合酶链反应、蛋白印迹方法检测各组细胞中细胞增殖和周期相关因子p21 mRNA和蛋白以及细胞迁移相关因子E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平的变化.结果:HDAC6 siRNA组中p21及E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平分别是0.440±0.120、0.840±0.070和0.580 ±0.090、0.450±0.080,且均明显高于未处理组(0.165±0.090、0.090±0.020;0.088±0.009、0.054±0.011)和对照siRNA组(0.163±0.021、0.070 ±0.040;0.820±0.070、0.066±0.007)中p21及E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平,其表达差异均具有统计学意义(P均＜0.05),而未处理组和对照siRNA组之间p21及E-cadherin mRNA和蛋白的表达无差异(P＞0.05).结论:HDAC6表达下调对食管鳞癌细胞周期的影响可能与p21表达的升高相关;对细胞迁移的影响可能与E-cadherin表达的上调有关.
关键词： 食管鳞癌 HDAC6 p21 E-cadherin -
应用组织芯片技术研究HDAC6在胶质瘤组织中的表达及预后意义
目的:探讨胶质瘤组织中HDAC6的表达及其与临床病理资料之间的关系.方法:采用免疫组化法检测胶质瘤组织芯片(正常脑组织20例、癌旁组织27例、胶质瘤组织206例)中HDAC6的表达量及其与临床病理资料之间的关系,应用SPSS 16.0软件分析胶质瘤组织中HDAC6表达水平与胶质瘤临床病理之间的相关性及其对胶质瘤患者预后的影响.结果:HDAC6在胶质瘤中的表达量明显高于正常脑组织和癌旁组织(P<0.05),并且在高级别胶质瘤(III-IV)中的蛋白表达量明显高于低级别胶质瘤(I-II)中的蛋白表达量.依据生存分析,发现HDAC6蛋白在低表达组中与高表达组相比有生存优势,PFS(无进展生存期)及OS(总生存期)均延长,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:HDAC6在胶质瘤中的表达量明显升高,促进了肿瘤的发生和发展,通过HDAC6表达水平可预测胶质瘤患者的预后.
