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铅对小鼠脑细胞外信号调节激酶活力的影响
目的研究不同浓度乙酸铅染毒对发育期不同时段小鼠脑组织细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)活力表达的影响.方法分组饲养小鼠,对照组喂以蒸馏水;实验组于交配后改喂含不同浓度乙酸铅(0.5、2.4、4.8、7.2、9.6和14.4 mmol/L)的水溶液.新生鼠通过母乳摄入铅;断乳后幼鼠自行饮水摄入铅.新生鼠按生后不同日龄(P1,P8,P15,P22,P30)取脑组织.利用ERK磷酸化抗体,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测不同日龄不同染铅浓度小鼠等量脑标本中ERK活力表达.结果 Western blot结果显示,较低浓度的铅可引起某些发育时段ERK1/2活力水平升高,如Pb 0.5 mmol/L组P30时段和Pb 2.4 mmol/L组P22时段的ERK活力比对照组明显升高,而逐渐升高的铅浓度可以引起P22～P30时段小鼠脑中ERK活力表达逐渐下降,9.6 mmol/L Pb浓度下P30时段小鼠脑ERK活力降至低.但在更高的铅浓度(14.4 mmol/L)下,未见ERK活力继续降低.另外,Pb7.2组在P1、P8和P15时段明显高于正常对照组,而P22和P30时段则明显低于正常对照组.结论铅对P22和P30时段小鼠脑中ERK活力水平有明显的影响.低浓度铅可引起某些发育时段ERK1/2活力水平升高,较高浓度铅引起某些发育时段ERK1/2水平降低.
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转基因牛的重组人α-乳清白蛋白的离体和体外消化稳定性研究
目的 通过测定转人α-乳清白蛋白基因的克隆牛所表达的重组人α-乳清白蛋白在模拟胃肠液及小型猪胃肠液中的消化时间,并与人α-清白蛋白标准品在上述消化液中的消化时间相比较,判定该重组蛋白的消化稳定性,为其致敏性评价提供基础资料.方法 根据<转基因生物及其产品食用安全检测--模拟胃肠液外源蛋白质消化稳定性试验方法>消化人α-乳清白蛋白标准品和重组人α-乳清白蛋白,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹法(Western blotting)分析消化后的样品.结果 重组人α-乳清白蛋白在模拟胃液中0 s即被完全消化,模拟肠液中10 min内完全消化,在小型猪胃液和肠液中均在20 min内被完全消化.虽然完全消化的时间存在差异,但均在20 min内.重组蛋白与人α-乳清白蛋白标准品的消化稳定性相似.结论 重组人α-乳清白蛋白在模拟胃肠液及小型猪胃肠液中均不具有消化稳定性.
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地黄管食通口服液对食管癌大鼠上皮型钙粘蛋白表达的影响
目的:探讨地黄管食通口服液对食管癌大鼠上皮型钙粘蛋白(E-Cad)表达影响.方法:采用蛋白免疫印迹法对各组食管黏膜上皮组织E-Cad表达进行研究.结果:E-Cad蛋白在食管癌模型组阳性表达率明显降低,与正常组比较有显著性差异(P<0.01).各药物治疗组和放疗组E-Cad阳性表达率均有不同程度的升高,以地黄管食通组升高为明显,其余依次为六味地黄丸组和放疗组.地黄管食通组与模型组比较有显著统计学意义(P<0.01);与放疗组、六味地黄丸组相比,有统计学意义(P<0.05);结论:地黄管食通口服液可以提高食管癌组织E-Cad蛋白表达.
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中国莱姆病伽氏疏螺旋体蛋白免疫印迹法诊断标准的研究
目的研究中国莱姆病伽氏疏螺旋体基因型蛋白免疫印迹法(WB)的阳性诊断标准. 方法采用中国莱姆病螺旋体伽氏疏螺旋体基因型参照菌株PD91作抗原,建立WB检测方法.采用Gel-Pro凝胶分析软件进行结果分析.病例组和对照组各组蛋白条带的频数分布比较采用χ2检验或Fisher′s精确检验,WB检测莱姆病阳性诊断标准确定采用ROC曲线. 结果共检测127例莱姆病病例和504例对照的血清标本,经统计学分析得出我国莱姆病伽氏疏螺旋体检测中WB阳性诊断标准为:对于IgG P83/100、P58、P39、P30、OspC、P17、P66、OspA中至少有一条蛋白条带显色即可诊断为阳性,此标准敏感度为73.2%,特异度为99.4%;对于IgM P83/100、P58、OspA、P30、OspC、P17、P41中至少有一条蛋白条带显色则可诊断为阳性,此标准敏感度为50.4%,特异度为93.1%. 结论建立了中国莱姆病伽氏疏螺旋体基因型WB阳性诊断标准,用于莱姆病的WB诊断具有较好的特异性.
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嗜酸乳杆菌对小鼠结肠炎的疗效及结肠黏膜转录因子表达的影响
目的: 观察嗜酸乳杆菌治疗DSS诱导小鼠实验性结肠炎的疗效以及对转录因子STAT1, T-bet及GATA3的影响, 了解嗜酸乳杆菌的作用机制.方法: 采用2.5% DSS诱导小鼠结肠炎模型, 70只Balb/c小鼠随机分为7组: 模型组、阴性对照组(菌粉保护剂组)、阳性对照组(美沙拉嗪组)、嗜酸乳杆菌低剂量组(1×109 CFU/L)、中剂量组(1×1010 CFU/L)、高剂量组(1×1011CFU/L)、正常组. 用DAI评分和病理组织学积分检测各干预组疗效, RT-PCR法检测结肠组织中STAT1、T-bet、GATA3的表达水平,Western blot和免疫组织化学法检测结肠组织中T-bet的表达.结果: 模型组小鼠DAI积分及组织病理学积分要明显高于正常组(均P<0.05), 嗜酸乳杆菌低、中、高剂量组和美沙拉嗪干预后, 小鼠DAI积分及组织病理学积分较模型组有明显下降(6.20±2.64, 5.00±1.21, 5.72±2.63,5.81±1.32 vs 7.81±1.02; 4.25±2.05, 2.56±1.81, 2.20±1.12, 3.10±2.60 vs 5.80±2.94, 均P<0.05); 嗜酸乳杆菌低、中、高剂量组及美沙拉嗪干预后转录因子在核酸水平较模型组STAT1、T-bet的表达降低(均P<0.05); GATA3的表达升高(均P<0.05), 但仍低于正常组. 而T-bet的蛋白和免疫组织化学表达都与mRNA有相同趋势, 较模型组降低(0.27±0.04, 0.23±0.02, 0.18±0.04, 0.27±0.11 vs 0.30±0.04;0.263±0.045, 0.234±0.015, 0.114±0.025,0.252±0.024 vs 0.322±0.064, 均P<0.05). 其中又以嗜酸乳杆菌高剂量组效果佳.结论: 嗜酸乳杆菌对实验性结肠炎小鼠有治疗作用, 可抑制转录因子的表达, 其部分作用机制可能为通过抑制STAT1、T-bet信号分子的激活来抑制Th1型免疫反应, 减少对GATA3的抑制而发挥治疗作用.
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微管不稳定蛋白在食管癌细胞和组织中的表达及意义
目的:探讨食管鳞癌细胞和组织中STMN1的表达与食管鳞癌病理分级的关系.方法:一维(1-D)Western blot分析8种食管鳞癌细胞的STMN1表达,二维(2-D)Western blot分析KYSE180食管鳞癌细胞中STMN1的表达与修饰状态.免疫组织化学分析食管鳞癌组织及其配对样本食管上皮STMN1表达和定位,以及卡方检验统计分析食管癌组织STMN1表达与临床分级的关系.结果:STMN1在人食管鳞癌细胞WHCO1、ECO156、KYSE510、KYSE180、KYSE170、KYSE150、KYSE140和KYSE30中广泛表达.2-D Western blot结果表明STMN1在食管癌细胞KYSE180中呈现为一个具有较强信号的蛋白点和另一个具有较弱信号的,等电点偏碱性的蛋白点,提示STMN1可能存在特定修饰状态.Western blot结果显示,与正常食管上皮相比,食管癌组织中STMN1表达升高(69.2%,9/13).食管癌组织芯片免疫组织化学分析结果显示STMN1在72%(13/18)肿瘤组织中高表达较STMN1在17.6%(3/17)癌旁食管上皮表达具有统计学意义(P<0.05),但与组织病理分级无关(P=0.646).结论:STMN1蛋白在食管鳞癌细胞和组织表达上调并伴随部分修饰,提示在食管鳞癌组织中STMN1具有癌基因的作用,参与食管癌变进程.
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塞来昔布对不表达环氧合酶-2的胃癌细胞生长的影响
目的: 探讨选择性COX-2抑制剂celecoxib抑制不表达COX-2的胃癌细胞MGC-803生长的机制.方法: 采用MTT法研究celecoxib对细胞存活率的影响;流式细胞术检测celecoxib处理后细胞DNA含量的变化, 免疫组织化学方法检测Bax及Bcl-2的表达, Elisa法检测VEGF蛋白表达水平, Western blot法检测COX-2及NF-κB蛋白的表达.结果: MGC-803中未检测到COX-2的表达;选择性COX-2抑制剂celecoxib呈浓度和时间依赖性抑制MGC-803细胞生长( r = 0.985,P<0.05), 流式细胞仪检测DNA图谱上表现为G0/G1期前出现一个代表凋亡细胞的亚G1峰. Bax及Bcl-2无表达, celecoxib对细胞分泌VEGF( r = 0.928, P<0.01)及NF-κB蛋白均有抑制作用, 并且NF-κB蛋白的表达和celecoxib呈浓度和时间依赖性( r = 1).结论: celecoxib可诱导不表达COX-2的胃癌细胞MGC-803凋亡, 可能通过抑制IKKβ-NF-κB信号通路影响MGC-803细胞的凋亡, 而不依赖COX-2途径.
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P53和Bcl-2家族蛋白在胰腺癌中的表达
目的:探讨胰腺癌组织(pancreatic carcinoma,PC)中P53和Bcl-2家族(Bcl-2,Bax,Bcl-xL,BclxS)蛋白表达及与细胞凋亡的关系.方法:免疫组化法检测35例PC中P53蛋白表达,将PC分为P53阴性表达组(第1组,n = 18)和P53阳性表达组(第2组,n = 17);Western blot检测两组PC中P53,Bcl-2,Bax,Bcl-xL和BclxS蛋白表达,TUNEL法检测第1组中凋亡指数(AI).结果:Bcl-2蛋白在P53阳性PC表达上调,而在P53阴性PC表达下调( P = 0.047);Bax和Bcl-xL蛋白在两组PC中表达都明显上调( P = 0.274,0.334);Bcl-xS在P53阳性表达PC明显下调,在P53阴性表达组明显上调( P = 0.01);在P53阴性和阳性表达PC,AI分别为12.1±2.47和9.1±1.48( P = 0.023);Bcl-2家族各成员表达与AI无相关性,而Bcl-2/Bax比率与AI有明显的相关性( P<0.01).结论:Bcl-2是依赖P53调节的抗凋亡蛋白,BclxS是依赖P53调节的促凋亡蛋白,而P53主要通过调节Bcl-2/Bax比率发挥凋亡调节作用.
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Livin、Smac/DIABLO和PTEN在胃癌组织中的表达及其与胃癌的相关性
目的:探讨凋亡抑制蛋白Livin及线粒体促凋亡蛋白Smac/DIABLO和PTEN在胃癌发生发展分子机制中的调控作用及意义.方法:实时荧光定量PCR检测75例手术切除胃癌患者组织, 20例癌旁组织及20例正常胃组织中Livin mRNA和Smac/DIABLO mRNA的表达, Western blot结合免疫组织化学法检测两者与PTEN蛋白的表达及组织学定位.结果:正常胃组织及癌旁组织中均无Livin mRNA表达, 胃癌组织中Livin mRNA相对表达量显著上调(6.374±4.759), 其表达在低分化胃癌组及淋巴结转移组具有显著差异(χ2 = 9.60, 5.51, P<0.01或0.05), 与肿瘤大小, 浸润程度及TNM分期等病理表现无关;Smac/DIABLO mRNA胃癌组织中的表达水平低于正常胃组织及癌旁组织, 但差异无显著性(0.731±0.420 vs 1.104±0.276, 1.061±0.737, 均P>0.05), Smac/DIABLO mRNA的表达水平与胃癌各临床病理因素无关; 其蛋白表达量与Smac/DIABLO mRNA的表达水平存在差异. Smac/DIABLO在肠型胃癌与弥漫型胃癌中的表达有显著差异(χ2 = 5.06,P<0.05). 正常胃黏膜及胃癌组织中未检出PTEN蛋白表达.结论:Li v i n、Sma c/DIABLO及PTEN的表达水平在不同阶段及病理类型的胃癌中存在差异. 实时荧光定量PCR检测Li v i n及Smac/DIABLO的表达量, 有可能为判断胃癌的发生, 分化程度及预测化疗敏感性提供新的指标.
关键词： 凋亡抑制蛋白 胃癌 Smac/DIABLO Livin 蛋白免疫印迹法 -
缩宫素受体在子宫内膜异位症的表达及与痛经的关系
目的 探讨缩宫素受体(OTR)在子宫内膜异位症(EM)患者的异位内膜及在位子宫内膜组织中表达情况及与痛经的关系.方法 应用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测EM患者39例卵巢子宫内膜异位病灶,30例在位子宫内膜以及30例非EM患者的正常子宫内膜作为对照,比较不同组织中OTR蛋白的阳性表达率和表达强度的差异,以及与痛经的关系.结果 OTR在EM组表达高于对照组(P＜0.05),在EM组在位内膜增生期和分泌期的表达无显著性差异(P＞0.05),OTR在EM组痛经者的表达高于非痛经者(P＜0.05).结论 EM患者OTR的高表达可能参与了EM发病机制,而且可能与EM的痛经有关,对OTR的深入研究将为EM痛经的治疗提供新的方向.
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人脑胶质瘤中垂体瘤转化基因的表达及其意义
目的 探讨垂体瘤转化基因(PTTG)在胶质瘤的诊断及恶性程度和预后判断中的临床意义.方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western-blot)对65例胶质瘤患者进行PTTG mRNA和PTTG蛋白检测.结果 (1)65例胶质瘤组织中PTTG蛋白和PTTG mRNA表达全部呈阳性.(2)计算分组的标本PTTG mRNA和与β-actin mRNA灰度比值:Ⅰ级和Ⅲ、Ⅳ级之间差别有统计学意义(P<0.01),Ⅲ、Ⅳ级之间PTTG mRNA表达均高于Ⅰ级;Ⅱ级和Ⅲ、Ⅳ级之间差别有统计学意义(P<0.01),Ⅲ、Ⅳ级之间PTTG mRNA表达均高于Ⅱ级.计算分组的标本PTTG蛋白和与β-actin吸光度比值:四组之间任意两两比较,差别均有统计学意义(P<0.01).(3)相关性分析:PTTG蛋白和PTTG mRNA表达水平与胶质瘤病理分级均呈正相关性(P<0.001).结论 (1)PTFG的mRNA和蛋白的表达与胶质瘤病理分级呈正相关.检测FTTG的mRNA和(或)蛋白的表达,可以作为胶质瘤诊断、判断预后的一个可靠指标.(2)检测PTTG的mRNA的表达,从分子病理方面将可以弥补传统病理的局限性,在脑肿瘤的诊断、治疗和预后评估中将发挥重大的作用.
关键词： 神经胶质瘤 垂体肿瘤 癌基因 蛋白免疫印迹法 半定量逆转录聚合酶链反应法 -
HIV抗体不确定样本3种初筛结果与确证结果对比分析
目的 通过化学发光法(CIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金快速检测法(RT)3种初筛试验分析免疫印迹试验(WB)HIV抗体不确定样本,探讨4种方法检测结果的关系.方法 对WB试验HIV抗体不确定的样本31例,观察WB试验结果的条带分布情况及CIA、ELISA、RT 3种初筛试验检测结果,计算CIA、ELISA的S/c.o值与WB试验结果的符合率,分析初筛试验与WB试验条带分布的关系.结果 WB试验结果的条带分布为:gp160(77.42％)、gp120(22.58％)、P24(22.58％)、p17(9.68％)、p51(3.23％).CIA、ELISA、RT 3种初筛试验与WB试验的符合率分别为87.10％、90.32％、70.97％.3种初筛试验结果与WB试验条带分布无相关性(x2=0.859).CIA、ELISA的S/c.o值均较低,分别为(11.14±11.03)、(5.88±3.82).结论 对于HIV抗体不确定样本,初筛试验大多为弱阳性反应并存在一定比例的漏检情况,初筛试验结果与WB试验条带分布无相关性,需引起临床重视.
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S180瘤株对动物模型体内荷瘤的影响及致瘤机制
目的：通过动物实验，观察S180瘤株对小鼠荷瘤形成的影响，探讨S180肉瘤细胞的致瘤机制。方法建立小鼠实体瘤模型，将昆明系小鼠36只，按体重随机分为3组，每组12只。空白组：每日灌胃给予蒸馏水，0.2 mL/10 g体重；模型组：皮下接种S180肉瘤细胞，制成小鼠实体瘤模型，其后每日口服灌胃1%羧甲基纤维素钠(CMC)溶液；环磷酰胺组：皮下接种S180肉瘤细胞，制成小鼠实体瘤模型后，注射0.02 g/(kg·d)环磷酰胺注射液。观察各组肿瘤生长情况，计算平均重量；与模型组比较，环磷酰胺组计算肿瘤生长抑制率；采用蛋白免疫印迹法技术方法，检测抑癌基因P53、P21及凋亡抑制基因Bcl-2在S180肿瘤动物模型瘤体组织中的蛋白表达。结果模型组小鼠荷瘤成功，与空白组比较，模型组小鼠出现肿瘤，其瘤重为(1.513±0.790)g，环磷酰胺组瘤重为(0.248±0.253)g，两组比较差异有高度统计学意义(P<0.01)，环磷酰胺抑瘤率为83.63%。在被检瘤体中，三种蛋白表达空白组与模型组、空白组与环磷酰胺组相比差异均有高度统计学意义(P<0.01)；与环磷酰胺组比较，模型组P53、P21抗体的蛋白表达量明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)，其中，P21表达差异有高度统计学意义(P<0.01)，而Bcl-2变化不大，差异无统计学意义(P=0.66)。结论 S180肉瘤细胞可能通过抑制P53与P21的表达而起到促进肿瘤形成的作用，该机制的研究可为筛选肿瘤治疗药物及肿瘤机制探讨等的肿瘤动物模型提供重要的实验±据。
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SHH在GES-1和其他胃癌细胞中表达差异性的比较
目的 探讨SHH在GES-1、AGS、SGC-7901和BGC-823中的表达差异性.方法 采用real time RT-PCR技术和Western blot方法研究SHH在GES-1、AGS、SGC-7901和BGC-823细胞mRNA和蛋白质水平上的表达.结果 与GES-1相比较,SHHmRNA和SHH蛋白在AGS、SGC-7901和BGC-823中的表达明显减少,差异均具有显著性(P<0.01).结论 SHH信号通路在胃癌的发生中具有重要的作用.
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Notch 1在GES-1和其他胃癌细胞中表达差异性的比较
目的 探讨Notch 1在GES-1、AGS、 SGC-7901和BGC-823中的表达差异性.方法 采用real time RT-PCR技术和Western blot方法研究Notch 1在GES-1、AGS、SGC-7901和BGC-823细胞mRNA和蛋白质水平上的表达.结果 与GES-1相比较,Notch 1 mRNA和NOTCH 1蛋白在 AGS,SGC-7901 和BGC-823中表达显著降低,差异均具有显著性(P < 0.01).结论 Notch 1在胃癌的发生中可能作为抑癌基因起作用.
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复方排毒止带汤含药血清对人宫颈鳞癌SiHa细胞人乳头瘤病毒16型E6,E7,p53,Rb蛋白表达的影响
目的 采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)研究中药复方排毒止带汤含药血清对人宫颈鳞癌SiHa细胞人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6,E7,p53,pRb蛋白表达的影响.探讨复方排毒止带汤对人乳头瘤病毒的影响.方法 将大鼠随机分为空白对照组、25％含药血清组及50％含药血清组.空白对照组口服生理盐水,25％含药血清组及50％含药血清组口服复方排毒止带汤煎剂,将复方排毒止带汤25％含药血清和50％含药血清分别作用于SiHa细胞72,120 h后,采用Western Blot法检测HPV16 E6,E7,p53,pRb蛋白表达,采集数据.统计学分析采用独立样本t检验.结果 复方排毒止带汤50％含药血清作用72 h,HPV16 E6,E7蛋白表达水平下降,p53,pRb蛋白表达水平升高,复方排毒止带汤50％含药血清作用120 h,HPV16 E6,E7蛋白表达水平较作用72 h明显下降,p53,Rb蛋白表达水平明显升高,2组相应指标比较P均＜0.05,差异有统计学意义.复方排毒止带汤25％含药血清作用120 h,HPV16 E6,E7蛋白表达水平下降,p53,Rb蛋白表达水平上升,复方排毒止带汤50％含药血清作用120 h HPV16 E6,E7蛋白表达水平较25％含药血清明显下降,p53,Rb蛋白表达水平明显升高,2组相应指标比较P均＜ 0.05,差异有统计学意义.结论 复方排毒止带汤含药血清对HPV16 E6,E7,p53,Rb蛋白表达具有明显调控作用,复方排毒止带汤的活性具有一定的时效性.
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AnnexinⅡ在肝细胞癌中的表达及其临床意义
目的 研究钙磷脂结合蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ)在肝细胞癌中的表达及意义.方法 采用Western印迹方法检测18例肝癌及相应瘤旁组织中AnnexinⅡ蛋白的表达情况,免疫组织化学方法分析AnnexinⅡ在79对肝细胞癌及瘤旁组织,8例正常肝组织中的表达.结果 Western印迹显示AnnexinⅡ在肝细胞癌组织及相应瘤旁组织中均有表达,而癌组织中表达阳性率高于相应瘤旁组织(P＜0.05).免疫组织化学显示AnnexinⅡ在肝细胞癌中的表达阳性率高于相应瘤旁组织及正常肝组织(P＜0.05).结论 AnnexinⅡ在肝细胞癌中高表达,在瘤旁组织及正常肝组织表达较少,对肝细胞癌具有诊断价值.
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电针对非酒精性脂肪肝大鼠血清RBP4水平的影响及其脂质调节作用机制
目的：探讨电针对高脂高胆固醇造模的非酒精性脂肪肝（NAFLD）大鼠的脂质调节作用，阐明血清视黄醇结合蛋白4（RBP4）水平以及肝 X受体α（LXR-α）和肝脏固醇调节元件结合蛋白-1 c （SREBP-1 c）表达的调节作用机制。方法：44只雌性 SD大鼠适应性喂养7 d，随机分为正常组、模型组、东宝肝泰组和电针组，每组11只。正常组大鼠用标准饲料喂养，其余各组大鼠用高脂高胆固醇饲料喂养。8周后电针组针刺“肝俞”、“脾俞”和“膈俞”进行治疗，电压9 V，电流强度1～3 mA，频率为1.5～2.0 Hz，疏密波，留针15 min，每天1次，连续28 d。检测各组大鼠空腹血糖（FBG）、血清游离脂肪酸（FFA）和肝组织匀浆甘油三酯（TC）、总胆固醇（TG）的变化，采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清 RBP4水平，采用 Western blotting法检测大鼠肝组织中 LXR-α和SREBP-1 c蛋白表达水平。结果：与正常组比较，模型组大鼠的 FBG、FFA、肝组织匀浆中 TC和 TG以及血清 RBP4水平升高（P＜0.01）， LXR-α和 SREBP-1 c蛋白表达水平也升高（P＜0.01）；与模型组比较，电针组和东宝肝泰组大鼠 FBG、FFA、肝组织匀浆TC和TG水平下降（P＜0.05或P＜0.01），血清 RBP4水平下降（P＜0.01）， LXR-α和 SREBP-1 c蛋白表达水平明显降低（P＜0.05或P＜0.01）。结论：电针“肝俞”、“脾俞”、“膈俞”能降低 NAFLD大鼠血清 RBP4水平，调节脂质代谢，改善脂质沉积，对 NAFLD有明显的治疗作用，其机制可能与抑制肝组织中 LXR-α和 SREBP-1 c蛋白表达上调有关。
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O-GlcNAc转移酶在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义
目的:探讨氧连氮-乙酰葡萄糖胺转移酶(OGT)在原发性肝细胞癌(HCC)组织、细胞及血清中表达情况,阐明OGT在HCC的诊断和治疗中的意义.方法:采用Western blotting法分别检测20例HCC组织和癌旁组织中以及8例肝癌细胞株和正常人肝细胞裂解物中OGT蛋白表达水平,采用直接酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测20名健康志愿者、肝硬化(LC)、HCC患者血清中OGT蛋白表达水平,分析HCC组织、细胞、血清中OGT蛋白表达水平与肿瘤发生发展的关系.结果:Western blotting检测,OGT在HCC肿瘤组织及相对应癌旁组织中均有表达,HCC患者肿瘤组织中OGT阳性表达率高于相对应癌旁组织(P＜0.05);同时OGT在肝细胞癌株及正常人肝细胞裂解物中均有表达,而肝细胞癌株中阳性表达率高于正常人肝细胞裂解物(P＜0.05).ELISA法检测,HCC和LC患者血清中OGT表达水平均高于健康志愿者(P＜0.05).结论:OGT在HCC肿瘤组织中表达升高,OGT有望成为HCC新的诊断靶点.
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蛋白免疫印迹法同时检测大、小分子蛋白的实验条件改进
目的:蛋白免疫印迹法是现代生物医学研究中广泛应用于蛋白定性和半定量分析的实验技术.然而,常规采用传统单一浓度凝胶的蛋白免疫印迹法在应用过程中仍有不足之处,如不能同时检测分子量很大和很小的蛋白,因而有必要探索一种增大凝胶有效分离范围的检测方法.本文提出采用组合凝胶来实现更大范围分子量蛋白的同时检测.方法:比较双浓度的组合凝胶与单一浓度凝胶的分离范围以及分析采用组合凝胶,蛋白免疫印迹法对大、小分子蛋白的检测效果.结果:12％/7.5％组合凝胶和15％/7.5％组合凝胶的分离范围显著大于相应的单一浓度凝胶.通过12％/7.5％组合凝胶,蛋白免疫印迹法同时检测到15-300 kDa范围内的大、小分子蛋白.结论:组合凝胶有助于蛋白免疫印迹法对分子量相差很大的蛋白进行同时检测分析,具有很强的实用性.
