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OPN和ON mRNA在人乳腺癌组织中的表达及其与微钙化的关系
目的 进一步探讨人乳腺癌组织中微钙化的形成机制.方法 收集乳腺癌组织30例,同时取距癌组织边缘5 cm以上非癌正常乳腺组织作对照.患者术前均行钼靶X线检查且临床病理资料齐全.应用半定量RT-PCR方法检测并比较了组织中OPN和ON mRNA的表达水平,分析了其与微钙化表现和各临床病理特征的关系.结果 乳腺癌组织与正常乳腺组织中OPN mRNA校正值(OPN/β-actin)分别为0.479±0.114和0.205±0.059;ON mRNA校正值(ON/β-actin)分别为0.480±0.109和0.223±0.049.两组比较差异显著(P＜0.05).本组病例钼靶片中表现微钙化13例,占43.30%,钙化病例电泳条带亮度明显高于无钙化者,扩增结果显示钙化组与无钙化组OPN mRNA校正值分别为0.604±0.036和0.385±0.022;ON mRNA校正值分别为0.598±0.036和0.389±0.020.两组比较有显著性差异(P＜0.05).钙化组与正常乳腺组相比,差异更显著(P＜0.05).乳腺癌组织中OPN、ON mRNA表达与患者年龄、腋下淋巴结有无转移、肿瘤分化程度和临床分期均无显著相关性.结论 乳腺癌组织中OPN和ON mRNA表达水平与微钙化的出现密切相关,可能参与和/或调节了微钙化的形成.
关键词： 骨桥蛋白 骨连接蛋白 乳腺癌 微钙化 逆转录-聚合酶链反应法 -
骨连接蛋白在正常牙髓和修复性牙本质形成中的基因表达
骨连结蛋白（osteonectin，ON）是一种重要的非胶原糖蛋白，可能参与了牙本质的生物矿化过程［1］。我们利用原位杂交技术，观察ON在正常牙髓和牙髓修复过程中的基因表达特征，探讨ON在修复性牙本质形成中的作用。 1．材料与方法：分别在Wistar大白鼠（体重150～250 g）的上下颌第一磨牙近中面制备单面洞，术后第3及15天处死动物。迅速分离上下颌骨，4％多聚甲醛4℃下固定，10％EDTA脱钙，系列乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，5 μm连续切片，4℃下保存备用。实验中所有试剂均由含DEPC水配制以消除RNA酶的作用。利用T7 RNA多聚酶（Boehringer Mannheim公司）体外转录体系合成ON单链RNA探针，地高辛标记RNA检测试剂盒（Promega公司）标记。根据Holland等［2］的方法将标本与已标记探针进行原位杂交。DAB显色，苏木素淡复染。光镜下检查呈棕色的阳性杂交信号。 2．结果：正常对照的大鼠第二磨牙，杂交信号主要表达于成牙本质细胞层内，成牙本质细胞层下方的牙髓细胞也呈阳性表达，但信号强度低于成牙本质细胞。固有牙髓内的牙髓细胞信号较微弱或不表达。术后3 d组标本可见窝洞下方的成牙本质细胞表达呈强阳性，成牙本质细胞层下方的牙髓细胞也呈阳性表达。固有牙髓内的牙髓细胞也呈阳性表达。前期牙本质和牙本质内表达阴性。15 d组标本，可见修复性牙本质形成。修复性牙本质下方的细胞无极化，缺乏典型的成牙本质细胞表型，为成牙本质细胞样细胞。在成牙本质细胞样细胞内，ON表达阳性，染色均匀。可见扩张的牙髓毛细血管内皮细胞也表达阳性。
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SPARC在恶性肿瘤中的研究进展
SPARC(secreted protein acidic and rich in cysteine),又称作骨连接蛋白(osteonecfin)、基膜40蛋白(BM40),是一种富含半胱氨酸(Cys)的低分子糖蛋白.SPARC定位于人类染色体5q31.3-q32,为单基因产物,在进化过程中3个模块结构具有高度保守性.作为一种非结构性的细胞外间质蛋白,其与胚胎发育、血管生成、组织重塑、细胞更新及组织修复等均有密切关系[1].近年来诸多研究表明,SPARC与肿瘤的发生发展有着密切而复杂的关系.现就近年来SPARC功能的研究进展及在肿瘤发生发展中的作用综述如下.
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人软骨细胞的体外培养
软骨组织起源于中胚层,由软骨细胞、基质及纤维构成.根据软骨组织所含纤维不同,可将软骨分为透明软骨、纤维软骨和弹性软骨[1].透明软骨分布于成人关节、肋软骨及呼吸道一些软骨;纤维软骨分布于椎间盘、关节盘及耻骨联合等处;弹性软骨分布于耳廓及会厌等处.软骨基质中包含软骨特异性标志成分:Ⅱ、Ⅸ、Ⅺ型胶原蛋白,蛋白聚糖聚集体(Aggrecan),软骨连接蛋白和基质蛋白及在不同生长阶段所表达的蛋白,其中Ⅱ型胶原和Aggrecan是主要的评价软骨细胞功能指标[2].
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乳腺癌组织中骨桥蛋白和骨连接蛋白的表达及其临床病理意义
目的 探讨乳腺癌组织中骨桥蛋白(OPN)、骨连接蛋白(ON)的表达及其临床病理意义.方法 采用免疫组织化学SP法检测61例浸润性乳腺癌OPN、ON的表达,并与临床病理特征及钼靶X线征象进行对比分析.结果 本组乳腺癌组织中OPN和ON的阳性高表达率分别为72.13%和77.05%,均明显高于乳腺良性肿瘤(44.83%和37.93%,P＜0.05).钼靶X线发现微钙化的钙化组乳腺癌病例中OPN、ON高表达率分别为87.50%和91.67%,明显高于无钙化组(62.16%和67.57%,P＜0.05).(P＞0.05).结论 OPN、ON在乳腺癌组织中高表达,OPN、ON高表达与钼靶X线微钙化征象密切相关,但与各临床病理特征及X线片中毛刺征无相关性.
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骨唾蛋白和骨连接蛋白在正常年轻恒牙及龋患牙中分布的研究
目的:旨在研究骨唾蛋白(bone sialoprotein, BSP)和骨连接蛋白(osteonectin, ON)在正常年轻恒牙和龋患牙中的表达,以了解这两种蛋白在牙本质形成过程中的作用.方法:制备5μm厚连续切片,用于BSP和ON的免疫组化定位研究,并通过图像分析,将这两种蛋白在牙髓中央和牙髓周围组织的表达强度进行比较.结果:BSP和ON均在正常恒牙的成牙本质细胞及前期牙本质中表达,且在牙髓中央和牙髓周围组织的表达强度有显著性差异,在龋患牙中BSP牙髓外层着色依然显著高于中央区,且BSP抗体在第2、3期牙本质交界处呈强阳性反应.ON则在龋患牙中普遍表达,在第3期牙本质中表达不明显.结论:BSP和ON可能参与第2期牙本质的形成.第3期牙本质形成可能与BSP有关,与ON无关.
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乳腺癌钼靶X线表现与癌组织骨桥蛋白、骨连接蛋白表达的相关性研究
目的检测骨桥蛋白(OPN)、骨连接蛋白(ON)在乳腺癌组织中的表达,探讨二者与乳腺癌钼靶X线征象的关系. 资料与方法采用免疫组织化学S-P法检测61例浸润性乳腺癌、8例导管内乳头状瘤和21例乳腺纤维腺瘤组织中OPN、ON的表达,并分析与钼靶X线表现及临床病理的关系. 结果 61例乳腺癌组织OPN、ON高表达率分别为72.13%和77.05%,明显高于乳腺良性肿瘤(χ2=6.310,χ2=13.126,P＜0.05);钙化组乳腺癌OPN、ON高表达率分别为87.50%和91.67%,与无钙化组比较,有显著性差异(χ2=4.649,χ2=4.781,P＜0.05);钼靶片中肿块表现、毛刺征和腋下淋巴结转移及其他各项临床病理表现与OPN、ON高表达均无统计学意义(P＞0.05). 结论 OPN、ON在乳腺癌组织中高表达,钼靶X线表现在一定程度上反映了肿瘤组织中OPN、ON的表达水平,对评估乳腺癌生物学行为和预后具有一定的参考价值.
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SPARC标签SNP与冠心病遗传易感性和临床表型关联分析
目的 以能代表80%以上基因变异状态的标签单核苷酸多态性(tagSNP)为基础,探讨骨连接蛋白(SPARC)tagSNP与冠心病发病风险及并发症的关联性.方法 采用KASP基因分型平台对107例冠心病患者及125例健康对照者进行分型检测,采用多因素Logistic回归分析和Spearman相关分析评估基因多态性与疾病和表型的相关性.结果 5个SPARC tagSNP与冠心病发病风险比较,差异无统计学意义(P>0.05).SPARC rs1054204 GC和rs3549 GC杂合型冠心病患者合并发生2型糖尿病的风险增高,是野生型携带个体的3倍以上,差异有统计学意义(P=0.048和P=0.029).携带CCTAC单体型的冠心病患者合并发生2型糖尿病的发病风险大幅度升高,是未携带个体的10.56倍,差异有统计学意义(P=3.34×10-4).rs1054204、rs3210714、rs3549变异等位基因型数目均与冠心病患者受累的冠状动脉数目成正相关(P<0.05).结论 携带SPARC rs1054204 GC、rs3549 GC杂合型或CCTAC单体型的冠心病个体合并发生2型糖尿病风险显著增高;同时rs1054204、rs3210714、rs3549与受累的冠状动脉数目成正相关,更容易发展为严重性冠心病.
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SPARC在Ⅱ期舌体鳞癌组织中的表达及意义
背景与目的:已经发现富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine.SPARC)在多种恶性肿瘤中有不同程度的表达,并且与肿瘤生物学行为、预后相关.本研究通过检测SPARC在临床Ⅱ期舌体鳞癌的表达.分析其表达强度与舌癌预后的关系.方法:收集55例中山大学肿瘤防治中心头颈外科1999年1月至2003年12月临床Ⅱ期(T2NOMO)舌体鳞癌术后标本,25例舌炎症旁组织作对照,免疫组化定性检测SPARC的表达.分析其表达强度与舌癌患者生存、复发、隐匿性淋巴结转移的关系.结果:55例舌癌术后标本中SPARC阳性率为49.1%,25例对照舌上皮组织不表达(P＜0.001);SPARC阳性患者的5年累积生存率为30.0%,SPARC阴性患者5年累积生存率为85.3%,统计学分析差异有统计学意义(P=0.005);SPARC在隐匿性淋巴结转移阳性与阴性患者表达率分别为86.7%及35.0%,差异有统计学意义(P=0.001).SPARC在复发与否患者表达率分别100%及31.7%.差异有统计学意义(P＜0.001).SPARC的表达与隐匿性淋巴结转移、复发呈正相关.相关系数依次为0.460(P＜0.001)、0.595(P＜0.001).结论:SPARC在临床Ⅱ期舌体鳞癌中表达高于正常舌上皮组织,其表达与生存率、隐匿性淋巴结转移、复发呈正相关.
