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骨形成蛋白信号转导与成牙本质细胞分化
骨形成蛋白在牙胚发育过程中发挥重要的作用,参与调控成牙本质细胞分化和牙本质形成.本文就骨形成蛋白与成牙本质细胞分化的分子机制相关的研究进展作一综述.
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骨唾蛋白及骨桥素在修复性牙本质形成中免疫组化定位的实验
骨唾蛋白(bone sialoprotein, BSP)和骨桥素(osteopontin, OPN)是矿化组织中重要的非胶原蛋白,两者都属于唾蛋白,有许多相似的物理化学性质,分别在矿化起始及成熟中发挥作用.我们通过免疫组化的方法,短期动态观察了BSP和OPN在修复性牙本质形成中时间、空间上的表达,以期进一步了解这两种蛋白在修复性牙本质形成中的作用.
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骨连接蛋白在正常牙髓和修复性牙本质形成中的基因表达
骨连结蛋白（osteonectin，ON）是一种重要的非胶原糖蛋白，可能参与了牙本质的生物矿化过程［1］。我们利用原位杂交技术，观察ON在正常牙髓和牙髓修复过程中的基因表达特征，探讨ON在修复性牙本质形成中的作用。 1．材料与方法：分别在Wistar大白鼠（体重150～250 g）的上下颌第一磨牙近中面制备单面洞，术后第3及15天处死动物。迅速分离上下颌骨，4％多聚甲醛4℃下固定，10％EDTA脱钙，系列乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，5 μm连续切片，4℃下保存备用。实验中所有试剂均由含DEPC水配制以消除RNA酶的作用。利用T7 RNA多聚酶（Boehringer Mannheim公司）体外转录体系合成ON单链RNA探针，地高辛标记RNA检测试剂盒（Promega公司）标记。根据Holland等［2］的方法将标本与已标记探针进行原位杂交。DAB显色，苏木素淡复染。光镜下检查呈棕色的阳性杂交信号。 2．结果：正常对照的大鼠第二磨牙，杂交信号主要表达于成牙本质细胞层内，成牙本质细胞层下方的牙髓细胞也呈阳性表达，但信号强度低于成牙本质细胞。固有牙髓内的牙髓细胞信号较微弱或不表达。术后3 d组标本可见窝洞下方的成牙本质细胞表达呈强阳性，成牙本质细胞层下方的牙髓细胞也呈阳性表达。固有牙髓内的牙髓细胞也呈阳性表达。前期牙本质和牙本质内表达阴性。15 d组标本，可见修复性牙本质形成。修复性牙本质下方的细胞无极化，缺乏典型的成牙本质细胞表型，为成牙本质细胞样细胞。在成牙本质细胞样细胞内，ON表达阳性，染色均匀。可见扩张的牙髓毛细血管内皮细胞也表达阳性。
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咬合创伤后牙本质形成相关细胞的形态学变化
目的:探讨大鼠咬合创伤牙齿牙本质形成相关细胞以及牙本质的变化.方法:制备大鼠下颌第一磨牙咬合创伤,观察7d、15d、30d、90d时间点牙本质的形成与吸收,牙髓组织中与牙本质形成相关的细胞的形态和数日变化.结果:实验性咬合创伤的早期,牙髓组织中成牙本质细胞和多细胞层细胞增生活跃,牙本质形成增多现象,增生区域的牙体硬组织表面为坚硬组织破坏和牙本质暴露.后期可以出现细胞萎缩现象,牙本质吸收明显.结论:咬合创伤影响牙本质的形成功能,这种影响可能与相应区域牙本质足否暴露无关.
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格鲁玛(Gluma)脱敏剂在前牙深龋缺损修复中脱敏处理的临床观察
近年来在修复各种原因引起的前牙牙体缺损方面进展较大,前牙深缺损近髓的有效治疗是封闭或部分封闭牙本质小管的开口,减少或避免牙本质小管内液体的流动,促使继发性牙本质形成.格鲁玛(Gluma)脱敏剂和牙本质小管内的蛋白液产生反应后,凝固了蛋白液,在牙本质小管内形成隔断,阻止了蛋白液在牙质小管内流动,从而消除了过敏.考虑到前牙深缺损修复的特征,选用了格鲁玛脱敏剂在前牙深缺损修复中做脱敏预处理,光固化氢氧化钙做垫底,光固化修复的方法效果较满意.
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牙本质形成的研究进展
牙本质形成包括细胞分化、成牙本质细胞分泌细胞外基质及基质矿化.目前认为这一过程有很多因素参与调控,如特异性蛋白、骨形成蛋白(BMP)及多种生长因子.现就近年牙本质形成有关影响因素的报道作一综述.
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骨形态发生蛋白与牙体硬组织形成研究进展
骨形态发生蛋白是参与多种组织器官包括骨和牙齿发育形成的多向性信号分子家族.在牙齿发育过程中发挥着重要的作用,参与调控成牙本质细胞分化和牙本质形成.本文就其与成牙本质细胞分化、牙体硬组织形成的分子机制研究进展作一综述.
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新型生物相容性材料MTA盖髓的临床研究
目的评价新型生物材料MTA盖髓的临床疗效.方法38颗深龋露髓或意外露髓的患牙,随机分为MTA组和对照组,分别使用MTA和氢氧化钙作为直接盖髓剂,术后随访6个月,观察盖髓后症状、牙髓活力、X线牙本质形成等疗效指标.结果MTA盖髓的成功率超过氢氧化钙(P＜0.05),MTA组牙本质形成时间也明显早于对照组(P＜0.05).结论MTA盖髓治疗成功率高,是理想的盖髓剂.
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内源性1,25(OH)2D3缺乏对哺乳期小鼠牙齿矿化和牙本质形成的影响
目的:研究内源性1,25(OH)2D3缺乏对哺乳期小鼠牙齿矿化和发育的影响.方法:利用X线检测、HE染色、组织化学、免疫组织化学以及real-time RT-PCR等方法检测2周龄同窝的WT和1α(OH)ase-/-小鼠下颌牙齿.结果:和2周龄WT小鼠相比,1α(OH)ase-/-小鼠下颌磨牙的X线透光率明显增加;1α(OH)ase-/-小鼠下颌第一磨牙及下颌切牙前期牙本质厚度与WT小鼠厚度有统计学差异.1α(OH)ase-/-小鼠下颌磨牙总胶原阳性面积与WT小鼠有统计学差异;1α(OH)ase-/-小鼠下颌第一磨牙牙本质I型胶原阳性面积与WT小鼠有统计学差异(P＜0.05);OCN在1α(OH)ase-/-小鼠下颌第一磨牙的牙本质和牙髓相对阳性面积与WT小鼠相对阳性面积有统计学差异(P＜0.01);Biglycan在1α(OH)ase-/-小鼠下颌第一磨牙的牙本质相对阳性面积与WT小鼠相对阳性面积有统计学差异(P＜0.01);OCN与ALP在1α(OH)ase-/-小鼠下颌切牙牙髓细胞中mRNA的表达水平较WT小鼠有明显降低,有统计学差异(P＜0.05).结论:内源性的1,25(OH)2D3缺乏导致哺乳期小鼠牙齿的牙本质矿化不良和牙本质的形成减少.
关键词： 内源性1 25(OH)2D3缺乏 哺乳期小鼠 牙齿矿化 牙本质形成 -
骨唾蛋白和骨连接蛋白在正常年轻恒牙及龋患牙中分布的研究
目的:旨在研究骨唾蛋白(bone sialoprotein, BSP)和骨连接蛋白(osteonectin, ON)在正常年轻恒牙和龋患牙中的表达,以了解这两种蛋白在牙本质形成过程中的作用.方法:制备5μm厚连续切片,用于BSP和ON的免疫组化定位研究,并通过图像分析,将这两种蛋白在牙髓中央和牙髓周围组织的表达强度进行比较.结果:BSP和ON均在正常恒牙的成牙本质细胞及前期牙本质中表达,且在牙髓中央和牙髓周围组织的表达强度有显著性差异,在龋患牙中BSP牙髓外层着色依然显著高于中央区,且BSP抗体在第2、3期牙本质交界处呈强阳性反应.ON则在龋患牙中普遍表达,在第3期牙本质中表达不明显.结论:BSP和ON可能参与第2期牙本质的形成.第3期牙本质形成可能与BSP有关,与ON无关.
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022.Er:YAG激光用于鼠牙窝洞制备后牙髓及牙髓神经的组织病理及免疫组化研究
[英]/Takamori K…∥J Endod.-2000,26(2).-95～99Er:YAG激光切割牙体硬组织后表面形态改变已有报道,但对牙髓的影响研究很少.本研究用降钙素基因相关肽免疫活性(CGRP-IR)纤维作为主要观察指标,比较Er:YAG激光和高速牙钻备洞后该指标变化,来揭示这两种方法对牙髓损伤与修复的影响.采用66只雄鼠按制备后1 d、4 d、7 d、14 d、21d、35 d分6组,每组11只,其中9只用Er:YAG激光和高速牙钻备洞,另2只未处理作对照.激光组所用剂量为100mJ、10 pps,牙钻组用#1204、300000r/min,2组均有冷却装置.每只鼠左上第一磨牙为激光组,对侧同名牙为牙钻组,备洞深度精确控制.髓底用玻璃离子粘固粉垫底,洞腔用Cleafil AP-X修复.按预定时间麻醉动物,心内灌注固定,取上颌标本,牙齿用10%中性缓冲福尔马林固定,10%EDTA-2Na脱矿,连续石蜡切片,分别用3种方法染色:HE染色光镜观察2组剩余牙本质厚度及牙髓病理变化;免疫组化染色用链亲合素-过氧化酶法,免疫荧光染色用链亲合素结合的异硫氰酸荧光素法,用共聚焦激光显微镜观察单位面积(CGRP-IR)纤维数目差别.结果显示2组剩余牙本质厚度无统计差异.剩余牙本质厚度是研究牙体备洞后牙髓变化的主要指标.作者通过预实验确定100mJ、10 pps为Er:YAG的佳剂量,通过牙钻选号和标记掌握备洞深度,使2组结果均衡可比.HE染色2组组织病理变化:除术后14 d激光组较牙钻组成纤维细胞和修复性牙本质形成更早、更多外,其他无明显差别.免疫组化标本显示:备洞后4 d牙钻组CGRP-IR纤维较对照组分布范围广、数目多.免疫荧光标记的CGRP-IR纤维计数:牙钻组较激光组CGRP-IRF在牙髓各层分布数目多.共聚焦激光显微镜观察术后4 d牙钻组较对照组增加2.7倍,到7 d渐降,21 d恢复到对照水平;激光组术后1 d增加1.5倍,4 d渐降,7 d恢复到对照水平.2组在术后7 d、21 d变化有统计学意义(P＜0.05).CGRP主要分布在外周无髓神经纤维,是神经源性损伤和修复的重要指标.它在牙髓的作用是:牙髓受刺激后,分泌增加,使局部血流增加和组织胺释放,引起神经源性炎症.同时诱导血管内皮细胞和成纤维细胞增生并控制增生时间和分布,其结果促进修复性牙本质形成.此外还参加牙痛感觉信息的传入.作者研究指出:用Er:YAG激光较高速牙钻备洞对牙髓的损伤小、恢复快、疼痛轻.[贺慧霞摘刘鲁川校]
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基质金属蛋白酶-8在人和大鼠牙胚发育钟状期的表达
目的研究基质金属蛋白酶-8(MMP-8)在牙胚发育牙本质形成过程中的表达.方法免疫组织化学方法检测MMP-8在人牙胚发育钟状期的表达;原位杂交方法检测MMP-8 mRNA在大鼠牙胚发育钟状期的表达.结果 MMP-8在人牙胚钟状晚期硬组织形成期成牙本质细胞和牙本质基质阳性表达,近髓腔处,牙本质染色更深;MMP-8 mRNA在大鼠牙胚发育钟状早期个别分化的成牙本质细胞表达阳性,钟状晚期,即硬组织形成期,MMP-8mRNA在成牙本质细胞表达强阳性.结论 MMP-8可能参与了人和大鼠牙胚发育过程牙本质基质改建.
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尼莫地平对人牙本质形成的影响
目的 采用人牙齿切片体外器官培养的方法 研究尼莫地平对牙本质形成的影响.方法 收集年轻人健康前磨牙,用慢速切锯制备2 mm厚的牙齿横切片,将在尼莫地平溶液中浸泡过的琼脂糖微球与在PBS液中浸泡过的琼脂糖微球对称放置在牙片上,将切片用含琼脂糖的半固体培养基包被后采用器官培养方法 培养1周,观察其对牙本质形成的影响.结果 尼莫地平处理后四环素线状荧光带较对照组变细、变淡,Von-Kossa染色前期牙本质处球状矿化也较对照组减少,透射电镜显示实验组成牙本质细胞内的分泌小泡与对照组相比略有增多,但是Ⅰ型胶原免疫组化染色显示实验组和对照组无明显区别.结论 尼莫地平能够影响牙本质的矿化形成,但对牙本质基质的合成和分泌无明显影响.
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正畸力对幼鼠牙本质中DSP表达的影响
目的:探讨正畸力对牙齿发育过程的牙本质中DSP表达的影响.方法:选取5周龄雄性SD大鼠,建立正畸牙齿移动模型.分别于加力后1、3、7、14、21 d处死动物,取含双侧上颌第一磨牙的上颌标本,制作石蜡切片,进行HE染色和DSP免疫组化染色.结果:牙冠部牙本质小管、前期牙本质、成牙本质细胞和牙根部成牙本质细胞DSP染色阳性.其中,牙尖部位的牙本质小管和前期牙本质呈强阳性染色,14 d时达到高峰,21 d时阳性染色有所减弱;根部成牙本质细胞在实验初期呈弱阳性染色,随时间的延长阳性染色逐渐增强.正常对照组DSP的表达明显弱于实验组.结论:对处于发育晚期的年轻恒牙施加适当的正畸力会促使成牙本质细胞进入活跃状态,牙本质中DSP表达上调,从而在一定程度上加速牙本质的形成及矿化.
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L型钙离子通道α1亚基D亚型多克隆抗体对人牙本质形成的影响研究
目的:采用人牙齿切片体外器官培养的方法研究L型钙离子通道α1亚基D亚型多克隆抗体对牙本质形成的影响.方法:收集年轻人健康前磨牙,用慢速切锯制备2 mm厚的牙齿横切片,将在L型钙离子通道αl亚基D亚型多克隆抗体中浸泡过的琼脂糖微球与在PBS液中浸泡过的琼脂糖微球对称放置在牙片上,将切片用含琼脂糖的半固体培养基包被后采用Trowel器官培养方法培养1周,观察其对牙本质形成和矿化的影响.结果:L型钙离子通道α1亚基D亚型多克隆抗体组四环素线状荧光带较对照组变细,von Kossa染色前期牙本质处球状矿化也较对照组减少,I型胶原免疫组化染色显示实验组与对照组无明显区别.结论:L型钙离子通道α1亚基D亚型多克隆抗体能够影响牙本质的矿化,但对牙本质基质的合成和分泌无明显影响.该结果提示成牙本质细胞膜上的L型钙离子通道α1亚基D亚型对牙本质矿化过程中的钙离子转运有重要作用.
关键词： 器官培养 L型钙离子通道α1亚基D亚型 矿化 牙本质形成 -
上颌乳中切牙畸形舌尖1例
病人女,5岁,因家长发现上前牙内侧多生两个细小牙齿,前来就诊.检查:患儿发育正常,牙列排列整齐,51、61舌侧牙隆突处各生有一个指状畸形突起,突起呈锥形,高约3.5 mm,与71、81形成创伤性咬合.畸形舌尖与牙冠间形成畸形舌侧窝(图1).X线片示畸形牙尖内有明显髓角突入.诊断:51、61畸形舌尖.治疗:因已妨碍咬合,故行分次少量磨除,氟化钠涂布,促进修复性牙本质形成,每2周复诊.
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下颌中切牙与侧切牙冠根融合1例
患者女，20岁，1999-03来诊，发现患者41、42牙冠相融合，牙冠形态可辨，大小基本正常。融合牙唇侧见一浅沟，舌侧见一个三角锥形舌尖，其底位于41、42舌面邻接处，高约3mm，顶部低于咬合面。摄X线片显示牙根也相融合，41、42共有一根管，管腔粗大，根尖发育正常。作者认为因该畸形舌尖未在咬合面上，牙质发育良好，不影响患者的咀嚼和发音，在患者无症状时，可暂不处理，或少量多次调磨，以促进修复性牙本质形成，使舌尖变低、圆钝，防止折裂并发牙髓病变。
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修复性牙本质形成的大鼠模型
目的:建立修复性牙本质形成的动物实验模型,观察修复性牙本质形成的组织形态学特征.方法:在Wistar大鼠第一磨牙近中面制备窝洞,分别观察3、 15、30d,标本切片,HE染色,显微镜下观察.结果:术后3d未见修复性牙本质形成.15d后可见修复性牙本质形成,并可见骨样牙本质.窝洞下原代成牙本质细胞由新分化的成牙本质细胞样细胞取代.30 d后,修复性牙本质明显增加.新分化的成牙本质细胞样细胞发生极化.结论: 大鼠模型是研究修复性牙本质形成的一个良好模型.
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脱矿牙本质基质直接盖髓的临床观察
寻找理想的盖髓剂一直是牙髓病治疗领域中学者们努力探索的课题之一.本研究利用同种脱矿牙本质基质(Demineralized Dentin Matrix,DDM.)中含有骨诱导蛋白(Bone morphogenetic protein,BMP)而具有诱导修复性牙本质形成的能力这一特点,将DDM作为一种直接盖髓剂应用于临床,并取得了满意的效果.以往有关DDM的研究仍处于动物实验阶段,临床用于盖髓未见报道.本文对临床上用DDM直接盖髓的疗效进行了观察.
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脱矿牙本质对修复性牙本质形成的诱导作用
自从1965年Urist等建立了骨诱导理论以来,人们对与骨有相似化学组成的牙本质是否具有诱导能力产生了浓厚的兴趣[1].大量研究表明,脱矿牙本质(demineralized dentin)不仅具有骨诱导作用,而且还具有诱导修复性牙本质形成的作用[2,3,4].因此,对脱矿牙本质诱导修复性牙本质形成的研究,既具有临床应用价值,又将对细胞分化理论的认识产生深远的影响.
