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Beclin 1基因过表达对人乳腺癌细胞BT-549裸鼠皮下成瘤生长影响研究
目的 人乳腺癌BT549细胞缺失自噬基因Beclin 1是一种抑癌基因,过表达Beclin 1诱导自噬可抑制肿瘤的形成和发展.本研究预通过重组慢病毒载体转染Beclin 1基因,以观察过表达Beclin 1对裸鼠人乳腺癌BT549细胞皮下成瘤生长情况的影响.方法 以重组慢病毒载体pLenO-GTP-Beclin 1感染BT549细胞为实验组(6只),以对照慢病毒颗粒(pLenO-GTP-Vecto)感染BT549细胞为阴性对照组(6只),不做处理BT549细胞(缺失Beclin 1基因)为空白对照组(6只).3组转染细胞分别接种至裸鼠皮下,构建人乳腺癌BT549细胞裸鼠皮下成瘤模型.观察记录裸鼠成瘤情况并绘制肿瘤生长曲线.裸鼠饲养28 d后脱臼法处理,剥离瘤体,测定肿瘤体积和质量.用RT-PCR法、蛋白质印迹法及免疫组化法检测皮下成瘤中Beclin 1基因表达情况.结果 慢病毒载体构建成功,裸鼠接种各组细胞后在第7天均有肿瘤形成,实验组的瘤体平均体积为(79.66±42.52)mm3,肿瘤生长速度明显慢于阴性对照组的(358.62±58.83)mm3和空白对照组的(400.40±121.45)mm3,差异有统计学意义,F=27.34,P<0.05;实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均重量分别为(0.16±0.06)、(0.81±0.32)和(0.93±0.37)g,差异有统计学意义,F=12.749,P<0·05.RT-PCR法检测显示,实验组Beclin 1 mRNA的相对表达量为31.11±12.77,明显高于阴性对照组的0.66±0·02和空白组的1.00±0.07,差异有统计学意义,F=16.86,P<0.05;实验组Beclin 1蛋白表达量为0.212±0.078,明显高于阴性对照组的0.044±0.006和空白对照组的0.043±0.009,差异有统计学意义,F=27.418,P<0.05.实验组中Beclin 1蛋白的阳性表达率为46.7％,明显高于阴性对照组的10.0％和空白对照组的16.7％,差异有统计学意义,χ2=12·34,P<0.01.结论 Beclin 1基因过表达能够明显抑制裸鼠人乳腺癌BT549细胞皮下成瘤的生长,Beclin 1的表达量与肿瘤成长呈负相关.
关键词： 乳腺癌 Beclin 1基因 皮下成瘤 BT-549细胞 -
beclin 1过表达对三阴性乳腺癌BT-549细胞生长抑制作用观察
目的:观察自噬调控基因beclin 1过表达对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC) BT-549细胞的体外生长影响.方法:应用荧光显微镜观察细胞转染效率,采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测细胞beclin 1 mRNA和蛋白表达水平,采用吖啶橙染色观察细胞自噬情况,采用MTT检测细胞的增殖率,采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期情况.结果:细胞转染48 h实验组和对照组的细胞转染效率均＞45％,qRT-PCR提示实验组细胞beclin 1 mR-NA 2-ΔΔCt值为16.806±2.920,较空白组(0.853±0.025)显著升高,F=88.733,P＜0.001;蛋白质印迹法提示实验组细胞beclin 1/GAPDH灰度值比为1.050±0.056,较空白组(0.640±0.006)显著升高,F=137.213,P＜0.001;吖啶橙染色提示实验组细胞发生自噬的比例为33％,显著高于空白组(15％),x2=8.985,P=0.011;MTT法提示实验组细胞增殖率在24 h(0.152±0.019)、48 h(0.254±0.029)、72 h(0.322±0.027)和96 h(0.357±0.035)均显著低于空白组24 h(0.202±0.023)、48 h(0.308±0.030)、72 h(0.446±0.032)和96 h(0.851±0.014),P值均＜0.05;72 h实验组细胞凋亡率为(6.560±0.593)％,显著高于空白组(2.533±0.216)％,F=107.085,P＜0.001;实验组G0/G1期为(63.267±3.650)％,显著高于空白组(51.533±5.152)％,F=6.566,P=0.027.结论:自噬调节基因beclin 1过表达可显著抑制BT-549细胞的体外增殖水平.
关键词： 乳腺肿瘤 自噬 Beclin 1基因 BT-549细胞 -
条索状透明质酸在乳腺肿瘤细胞BT549化疗耐药中的作用
目的 观察透明质酸的新存在形式--条索状透明质酸在乳腺肿瘤细胞BT549表面的表达情况,探索该结构在BT549细胞耐受紫杉醇杀伤中的作用.方法 采用免疫细胞荧光技术观察BT549细胞表面条索状透明质酸的分布情况;分别用流式细胞术和RT-PCR检测透明质酸的条索状结构被破坏前后,紫杉醇诱导的肿瘤细胞凋亡、坏死率的改变以及凋亡相关基因c-jun mRNA表达的改变.结果 BT549细胞天然表达大量的条索状透明质酸,条索状结构被破坏后,紫杉醇诱导BT549细胞的凋亡和坏死率显著增高(P＜0.05),凋亡基因c-jun的表达水平也显著增高(P＜0.05).结论 乳腺肿瘤细胞BT-549高表达条索状结构的透明质酸,这种透明质酸的新存在形式可能在BT549细胞耐受紫杉醇的杀伤过程中起到一定的保护作用.
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Beclin1基因增强三阴性乳腺癌细胞BT-549对多柔比星的敏感性
目的:探讨Beclin1基因对三阴性乳腺癌细胞BT-549增殖及多柔比星作用于癌细胞的影响.方法:脂质体法分别将质粒pDsRed-C1、pDsRed-C 1-Beclin1转染于人三阴性乳腺癌BT-549细胞株.转染后一组用多柔比星处理,另一组不做处理.MTT法分析Beclin1过表达对BT-549细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果:多柔比星处理前后,Beclin1组细胞增殖均慢于阴性对照组和空白组细胞(各P＜0.01)；细胞凋亡的变化:多柔比星处理前转染pDsRed-C1-Beclin1的BT-549细胞凋亡率为(8.81±1.45)％,高于转染pDsRed-C1细胞组和空白组(P＜0.05),多柔比星处理后,Beclin1组细胞的凋亡率为(14.3±1.09)％,亦高于阴性对照组和空白组(P=0.00).结论:Beclin1基因过表达抑制BT-549细胞的增殖,增强癌细胞对多柔比星的敏感性.
