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复尔康注射液对人肝癌细胞株及裸鼠移植瘤的抑制作用
目的:研究复尔康注射液对人肝癌细胞株增殖及裸鼠移植瘤生长的影响.方法:采用CCK8试剂盒检测复尔康注射液对人肝癌细胞株SMMC-7721和BeL-7402增殖的抑制作用;建立SMMC-7721细胞裸鼠移植瘤模型,通过比较肿瘤体积(tumor volume,TV)、相对肿瘤体积(relative tumor volume,RTV)和相对肿瘤增殖率(T/C)考察复尔康注射液对肿瘤生长的影响.结果:复尔康注射液对SMMC-7721和BeL-7402的IC50分别为(61.51±1.58),(68.39±7.16)mg·L-1;不同剂量复尔康注射液能够不同程度地抑制裸鼠移植瘤的生长,与阴性对照组比较,P＜0.05.低、中、高剂量复尔康注射液组(0.065,0.130,0.260 g·kg-1)T/C分别为57.75%,39.9%和44.08%.结论:复尔康注射液体外能抑制人肝癌细胞株的增殖,体内能明显抑制SMMC-7721细胞裸鼠移植瘤的生长.
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HPLC同时测定复尔康注射液中3种活性成分的含量
目的 建立同时测定复尔康注射液中甘草酸铵、蒿酮和维A酸含量的HPLC分析方法 .方法 色谱柱:Dikma KromasilC18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;分段变波长测定;柱温:30℃;流速:1.0 mL·min-1.结果 甘草酸铵、蒿酮和维A酸的线性范围分别为:0.249～1.992 μg(r=0.999 9),0.440 9～3.527 2 μg(r=0.999 9)、0.138～1.104 μg(r=0.999 9).平均回收率分别为98.89%,99.17%,99.02%,RSD为0.67%,0.59%,0.74%.结论 该方法 简便、快速、准确、具有良好的重复性和回收率,可作为该制剂的质量控制标准.
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HPLC测定复尔康注射液中3种活性成分在小鼠体内分布
目的 考察复尔康注射液中3种主要活性成分在小鼠体内的分布及靶向性,了解不同剂型中的甘草酸铵在小鼠体内的分布行为.方法 采用HPLC测定经尾静脉给药后小鼠体内血液及组织中的药物浓度.结果 复尔康注射液与甘草酸铵水溶液中的甘草酸铵均在血液及肝脏中分布高,但复尔康注射液中的甘草酸铵清除时间明显延长;蒿酮30 min在肝脏分布高,120 min在肺中分布高;维A酸在肝脏与血液中的分布,各时间点均高于其他被检脏器.结论 复尔康注射液中3种活性成分根据不同的性质具有不同的靶向性,且具有明显的趋肝性和缓释特征.
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复尔康注射液对肝癌HepG2细胞凋亡和VEGF表达的影响
目的 研究复尔康注射液对肝癌HepG2细胞凋亡和VEGF表达的影响.方法 复尔康注射液干预HepG2细胞48 h后,CCK8试剂盒检测细胞的增殖活性,Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡率,免疫组化SABC法检测细胞VEGF的表达.结果 复尔康注射液可抑制HepG2细胞的增殖,IC50值为(29.63±1.22)mg/L.复尔康注射液5、10 mg/L干预HepG2细胞48h后,Hoechst 33258荧光染色可见核浓缩、核碎裂等凋亡形态学改变,Annexin V/PI双染法检测显示细胞凋亡率明显升高,免疫组化SABC法检测显示VEGF的表达明显减弱,且呈现出一定的量效关系.结论 复尔康注射液可诱导HepG2细胞凋亡,减弱VEGF的表达.
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复尔康注射液血管、肌肉刺激性及溶血试验研究
目的 观察复尔康注射液给予动物后的血管、肌肉刺激性情况及溶血情况,对复尔康注射液的安全性进行评价.方法 分别采用家兔耳缘静脉注射给药、股四头肌肌肉注射给药,取相应组织病理切片检查观察复尔康注射液血管、肌肉刺激性;家兔红细胞悬液中加入复尔康注射液,观察其溶血情况.结果 复尔康注射液静脉给药、肌肉注射给药后对血管和肌肉无刺激性,对家兔红细胞体外不溶血.结论 复尔康注射液静脉、肌肉注射给药无刺激性,无溶血反应.
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复尔康注射液抗血管生成的体外实验研究
目的 研究复尔康注射液在体外对血管生成的抑制作用及对肿瘤细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响.方法 采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)、细胞刮痕法(cell wounding healing assay)和小管形成试验(tube formation assay)等检测复尔康注射液对人微血管内皮细胞株(human microvascular endothelial cells,HMECs)增殖、迁移和小管形成的影响;采用CCK8、免疫组化SABC法检测复尔康注射液对HepG2细胞增殖和VEGF表达的影响.结果 复尔康注射液明显抑制HMEC细胞的增殖,IC50为(11.44±3.97)mg · L-1;复尔康注射液质量浓度在3.125 mg · L-1时,表现出抑制HMEC细胞迁移和小管形成的作用,且随着质量浓度的增加,抑制作用愈明显,呈现出较好的剂量依赖关系;复尔康注射液还能明显抑制HepG2细胞的增殖,减弱VEGF的分泌表达.结论 抗血管生成作用可能是复尔康注射液抗肿瘤作用的机制之一.
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复尔康注射液抗白血病的实验研究
白血病是临床常见的恶性肿瘤之一,特别是青少年发病率较高.维甲酸、三氧化二砷单用或二者联合使用,是目前临床治疗白血病的首选药物[1].但均有耐药及复发率高,以及高白细胞症、维甲酸综合征、肝肾功能异常等毒副作用[2-4].为了寻求治疗白血病疗效好,副作用少的新制剂,我们研制了复尔康多相脂质体注射液,其主药由青蒿油、甘草酸盐组成.本文报道复尔康注射液抗白血病的实验研究.
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复尔康注射液及拆方制剂对SMMC-7721和NB4细胞株的抑制作用
目的:研究复尔康注射液(青篙油、甘草酸盐、维A酸等)及拆方制剂对不同肿瘤细胞株的抑制作用,了解该注射剂的抑瘤谱以及组方的合理性.方法:以相同药物浓度的复尔康注射液及拆方制剂作用于SMMC-7721及NB4细胞48 h,阿霉素为阳性对照药,采用MTT法检测复尔康注射液及拆方制剂对两种细胞株的生长抑制作用.结果:复尔康注射液及拆方1、2、3号制剂浓度为1.260 μg/mL时,对SMMC-7721细胞的抑制率分别为54.78%、55.49%、53.18%、53.79%,半抑制浓度IC_(50)依次为0.415 μg/mL、0.376 μg/mL、0.715 μg/mL、0.636 μg/mL;浓度为0.630 μg/mL时,对NB4细胞的抑制率分别为88.6%、82.5%、77.9%、76.9%,半抑制浓度IC_(50)依次为0.091 μg/mL、0.108 1 μg/mL、0.084 μg/mL、0.120 μg/mL.结论:复尔康注射液及拆方制剂对SMMC-7721和NB4细胞株均具有明显的抑制作用,各单味药在复方制剂中具有协同增效作用.
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复尔康注射液对HepG2细胞增殖及血管内皮生长因子表达的影响
目的 研究复尔康注射液对人肝癌HepG2细胞增殖和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响.方法 HepG2细胞增殖采用CCK8试剂盒(cell counting kit-8)进行检测,VEGF的表达采用免疫组化SABC法进行染色分析.结果 复尔康注射液可抑制HepG2细胞的增殖,IC50值为(29.63 ± 1.22) mg · L-1;经5,10 mg · L-1的复尔康注射液作用48 h后, HepG2细胞VEGF的表达明显减弱,且呈现出一定的量效关系.结论 复尔康注射液可抑制HepG2细胞的增殖和VEGF的表达,抗血管生成可能是复尔康注射液抗肿瘤的作用机制之一.
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复尔康注射液挥发性成分的气相色谱-质谱联用分析
目的 对复尔康注射液中挥发性成分进行分析研究.方法 用水蒸气蒸馏法提取复尔康注射液挥发油,通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术对其成分进行分析鉴定,并用面积归一化法测定其相对百分含量.结果 共得到47个组分,鉴定出其中42种化合物,约占总量的98.52%,其中含量高的为蒿酮(38.12%),其次为右旋樟脑(16.05%)、桉油精(8.15%)、大根香叶烯D(6.54%)、丁香烯(4.08%)、2,6-二甲基-3,7-辛二烯-2-醇(3.21%)等.结论 该法分离效果良好,所鉴定组分较准确,为复尔康注射液的深入研究提供科学依据.
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复尔康注射液抗肝肿瘤的实验
目的 研究复尔康注射液对移植性小鼠肝癌的治疗作用,为开发新制剂提供药效依据.方法 将肝癌H22S及A型瘤细胞分别接种于小鼠腋皮下及腹腔内,每只小鼠接种瘤细胞数量为2×106,次日随机分组,实验组分别静脉/腹腔注射复尔康注射液315、157.5、78.75 mg/(kg·d),连续给药10d,分别计算肿瘤抑制率及小鼠生命延长率.结果 复尔康注射液大中小剂量组对肝癌H22S型实体瘤的抑制率分别为49.36%、39.10%、21.50%;对肝癌H22 A型腹水瘤小鼠的生命延长率分别为82.19%、65.18%、50.61%.重复2次,结果基本相似.结论 复尔康注射液对移植性肝癌小鼠有明显的治疗作用.
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复尔康注射液诱导肝癌HepG2细胞凋亡的研究
目的:研究青蒿油制剂复尔康注射液对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响.方法: CCK8试剂盒(cell counting kit-8)检测复尔康注射液对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用;Hoechst33258荧光染色观察HepG2细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测HepG2细胞的凋亡率.结果:复尔康注射液可抑制HepG2细胞的增殖,IC50值为29.63 ± 1.22μg/ml;复尔康注射液0.3125～10μg/ml作用48h后,Hoechst33258荧光染色均可见HepG2细胞出现核浓缩、核碎裂等细胞凋亡形态学改变,且呈现出一定的剂量依赖性;AnnexinV/PI双染法检测显示,不同浓度的复尔康注射液均可诱导HepG2细胞凋亡,凋亡率分别为4.71% ± 0.71%、10.05% ± 0.67%、15.08% ± 1.16%、23.59% ± 1.65%、32.30% ± 1.87%、42.09% ±1.43%.结论:复尔康注射液可抑制HepG2细胞的增殖,诱导其凋亡.
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复尔康注射液热原检查试验
目的:观察复尔康注射液给予动物后的热原反应,对复尔康注射液的安全性进行评价.方法:采用家兔法进行热原检查.结果:复尔康注射液静脉给药后无热原反应.结论:复尔康注射液静脉注射给药安全可靠.
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高效液相色谱法研究复尔康注射液在家兔体内的药动学特征
目的:建立一种快速的高效液相色谱法(HPLC)同时测定复尔康注射液中维A酸和甘草酸铵的血药浓度,利用3P97药动学软件计算药动学参数,并与维A酸注射液比较其药动学特征.方法:色谱柱:Dikma Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:分段变波长测定,0～23min为252 nm,23～40min为355 nm;柱温:30℃;进样量:20μl.结果:复尔康注射液中维A酸和甘草酸铵及维A酸注射液在家兔体内均符合开放二室动力学模型特征.复尔康注射液中维A酸的t1/2 α=10.61 min,t1/2 β=99.44 min,K10=0.02 min-1 ,AUC=257.14 μg·min·ml-1,CL=0.02 mg·kg-1·min-1;维A酸注射液的t1/2 α=8.61 min,t1/2 β=54.05 min,K10=0.03 min-1,AUC=174.86 μg·min·ml-1,CL=0.03 mg·kg-1·min-1;复尔康注射液中甘草酸铵的t1/2 α=5.50 min,t1/2 β=129.06 min,K10=0.02 min-1,AUC=28611.23 μg·min·mL-1,CL=0.01 mg·kg-1·min-1.结论:HPLC简便、快速、精确,可同时检测复尔康注射液中维A酸和甘草酸铵的血药浓度和药动学参数.
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HPLC测定复尔康注射液中维A酸在家兔体内的药动学
目的:采用高效液相色谱法(HPLC)测定复尔康注射液中维A酸的血药浓度,计算药动学参数,并与维A酸对照品溶液比较其药动学特征.方法:色谱柱:Dikma Kromasil C18(250min×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液;流速:1.0 ml·min-1;检测波长:355nm;柱温:30℃;进样量:20μl.结果:复尔康注射液中维A酸和维A酸对照品溶液在家兔体内均符合开放二室动力学模型特征.复尔康注射液中维A酸的t1/α=10.61min,t1/2β=99.44min,K10=0.022min-1,AUC=257.15μg·min·ml-1,CL=0.022mg·kg-1·min-1;维A酸对照品溶液的t1/2α=8.61min,t1/2β=54.06min,K10=0.033min-1,AUC=174.87μg·min·ml-1,CL=0.032mg·kg-1·min-1.结论:与维A酸对照品溶液相比,复尔康注射液中维A酸的消除速率减慢,生物利用度增加,在体内滞留时间延长.
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复尔康注射液气相色谱指纹图谱研究
目的:建立复尔康注射液气相指纹图谱检测标准.方法:采用气相色谱(GC)检测复尔康注射液中所含挥发性化学成分,以樟脑为参照物,按"中药注射剂指纹图谱研究的技术要求"计算相对保留时间及峰面积比值,标定共有指纹峰.结果:在全面方法学研究的基础上,先后对10批复尔康注射液供试品进行检测分析,从而建立了该药品的GC指纹图谱.结论:GC指纹图谱中共有11个共有峰,其相对保留时间及峰面积比值可作为复尔康注射液质量控制的方法之一.
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复尔康注射液对人肺癌和白血病细胞株的生长抑制作用
目的:研究复尔康注射液抗肿瘤作用,为临床用药提供理论依据.方法:用复尔康注射液作用于A549与CEM-C7细胞株48h,以阿霉素为阳性对照药,采用MTT法检测复尔康注射液对两种细胞株的生长抑制作用.结果:0.75ìg穖l-1复尔康注射液对A549细胞的抑制率为96.48%,0.187ìg穖l-1对CEM-C7细胞的抑制率为97.30%;半抑制浓度IC50分别为0.164ìg穖l-1及0.024ìg穖l-1,重复3次,结果基本相似.结论:复尔康注射液对A549与CEM-C7细胞株的增殖生长有高度抑制作用.
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复尔康注射液体外抗肿瘤实验研究
目的:研究复尔康注射液对不同肿瘤细胞株的生长抑制作用.方法:以阿霉素为阳性对照,采用MTT法检测复尔康注射液对4种不同肿瘤细胞株的生长抑制作用.结果:复尔康注射液对人白血病HL-60、人红白血病K562、小鼠黑色素瘤B-16及人肝癌BEL-7402细胞的半抑制浓度（IC50)分别为42.80μg/ml、146.65μg/ml、463.37μg/ml和945.37μg/ml,在浓度为520μg/ml时,对4种细胞株的抑制率分别为89.12％、80.68％、63.40％和34.92％.结论:复尔康注射液在体外对4种肿瘤细胞株均具有明显的抑制作用,具有开发成抗癌新药的潜力.
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复尔康注射液挥发性和非挥发性成分HPLC特征图谱
目的:建立复尔康注射液中挥发性和非挥发性成分HPLC特征图谱.方法:以蒿酮为参照物,色谱柱:Dikma KromasilC18柱(250 mm ×4.6 mm,5μm)；流动相:乙腈-0.1％磷酸溶液,梯度洗脱；分段变波长测定；流速:1 mL· min-1；柱温:30℃.结果:建立了复尔康注射液的HPLC特征图谱,并标定了33个共有峰,共有峰的参数符合“中药注射剂特征图谱技术要求”的有关规定.结论:方法简便,可靠,建立的特征图谱检测标准,能同时控制复尔康注射液中挥发性和非挥发性成分,可作为复尔康注射液质量评价的重要依据之一.
