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氯唑沙宗在C57BL/6小鼠体内的代谢及药代动力学参数研究
目的 通过氯唑沙宗(CZX)经口灌胃C57BL/6雄性小鼠,确定血浆中CZX和代谢产物6-羟基-氯唑沙宗(6-OH-CZX)的浓度-时间曲线,计算药代动力学参数,并与文献报道的CZX药代动力学参数进行比较和讨论.方法 72只SPF级C57BL/6雄性小鼠,随机分成20和200 mg/kg·bw 2个剂量组,经口灌胃给药.在灌胃前和灌胃后2、5、10、15、20和30 min,1、2和4h分别取4只小鼠采血,通过高效液相-串联质谱测定血清中的CZX和6-OH-CZX浓度,并利用DAS 2.0软件计算药代动力学数据.结果 20 mg/kg·bw CZX组小鼠灌胃后30 min,CZX和6-OH-CZX在血浆中均达到高浓度,分别为57.61和1.84 nmol/ml.200 mg/kg·bw CZX组小鼠灌胃后10和15 min,CZX和6-OH-CZX血浆中的浓度分别达到高峰,为332.56和5.96 nmol/ml.药代动力学参数结果表明,20和200 mg/kg·bw剂量组的CZX半衰期t1/2分别为63.11和53.80 min.200 mg/kg·bw剂量组的CZX和6-OH-CZX的浓度-时间曲线下面积(AUC)分别为20 mg/kg· bw剂量组AUC的3.71和2.91倍.结论 C57BL/6小鼠在经口灌胃CZX的剂量为20 ～ 200 mg/kg·bw时,可以选择检测灌胃后5～ 20 min内血浆CZX和6-OH-CZX的浓度,以便在进行同一种属小鼠的CYP2E1酶活性相关研究中,达到较好的对比效果.
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UV致弱尾蚴免疫对小鼠血吸虫再感染的保护力观察
目的 观察致弱日本血吸虫尾蚴免疫小鼠再次感染血吸虫后的减虫率、减卵率及肝脏病理损伤,为血吸虫疫苗的研制奠定基础.方法 分别以400μw/cm2×60 s和422 μw/cm2×40 s两种不同UV强度及时间照射的日本血吸虫尾蚴免疫C57BL/6和DBA小鼠,观察免疫小鼠对再次血吸虫感染的减虫率、肝脏减卵率及肝脏病理改变.结果 400 μw/cm2 UV×60 s(A)和422 μw/cm2 UV×40 s(B)照射的日本血吸虫尾蚴免疫组C57BL/6小鼠再次感染血吸虫后的减虫率分别为-0.60％和0.02％,肝脏肝脏减卵率分别为2.70％和11.37％;DBA小鼠再次感染血吸虫后的减虫率分别为29.10％和25.70％,肝脏肝脏减卵率分别为59.50％和69.50％.422 μw/cm2 UV×40 s辐照尾蚴免疫C57BL/6小鼠,再次感染血吸虫形成的肝脏单个虫卵肉芽肿面积与对照组比较显著减小(P＜0.01);400 μw/cm2 UV× 60 s和422μw/cm2 UV×40 s辐照尾蚴免疫DBA小鼠再次感染血吸虫造成的肝脏单个虫卵肉芽肿面积与对照组比较显著减小(P＜0.01).结论 UV致弱尾蚴免疫对C57BL/6、DBA小鼠再次感染血吸虫的保护作用较小,但能降低肝脏卵荷并减轻肝脏的病理损伤.
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消炎痛和阿斯匹林对C57BL/6和Balb/c小鼠胃酸分泌的效应
目的:观察非甾体类抗炎药消炎痛和阿斯匹林对C57BL/6和Balb/c小鼠胃酸分泌的影响及胃黏膜损害的效应.方法:应用幽门结扎术,测定消炎痛(40 mg/kg)和阿斯匹林(250 mg/kg)j.p后C57BL/6和Balb/c小鼠总胃酸分泌量(mL),胃酸度([H+]mmol/L)以及3 h总酸度(μmol/h)并应用Lanza score评分观察药物对胃黏膜的损害程度.同时应用[14C]-氨基比林蓄积试验观察2种小鼠离体胃对组胺刺激的效应.结果:在基础状态下,C57BL/6和Balb/c小鼠的总胃酸分泌量和总酸度显著不同(0.82±0.06 vs 2.32±0.18;P<0.0 001:2.9±0.4 vs 9.7±1.6,P=0.0 005),而胃酸度没有显著差别(P=0.377).在C57BL/6小鼠,腹腔内应用消炎痛后总胃酸分泌量和总酸度与基础水平相比差别显著(2.08±0.16 vs 0.82±0.06,P<0.0 001;9.4±1.1 vs 2.9±0.4,P<0.0 001),而胃酸度也没有显著差别(P=0.11):腹腔内应用阿斯匹林后总胃酸分泌量,胃酸度以及总酸度分别为1.5±0.3、16.1±1.4和8.7±2.7,与基础水平相比均有显著差异(P=0.03,0.009,0.03):在Balb/c小鼠,腹腔内应用消炎痛后总胃酸分泌量,胃酸度以及总酸度分别为3.4±0.3、5.8±1.0和6.5±1.2,前二者与基础水平相比有显著差异(P=0.007,0.01);腹腔内应用阿斯匹林后总胃酸分泌量,胃酸度以及总酸度与基础水平相比均没有显著差异(P=0.15,0.15,0.7).应用消炎痛后,C57BL/6和Balb/c小鼠Lanza score分别为12.6±0.9和16.4±1.1(P=0.03);应用阿斯匹林后,C57BL/6和Balb/c小鼠Lanza score为10.4±1.0和11.0±1.1(P=0.91).应用[14C]-氨基比林蓄积试验观察2种小鼠离体胃对组胺刺激的效应,发现C57BL/6小鼠对不同浓度组胺刺激的效应显著低于Balb/c小鼠(10-s mol/L:30.8±8.5 vs120.8±23.0,P=0.006;10-4mol/L:45.1±7.1 vs236.1±48.7,P=0.005;10-3mol/L:37.9±5.3 vs199.4±35.2,P=0.002).结论:C57BL/6和Balb/c小鼠的胃酸分泌生理功能存在显著差异.消炎痛和阿斯匹林对C57BL/6和Balb/c小鼠的胃酸分泌功能和胃黏膜损害产生不同的效应.
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C57BL/6小鼠上皮性卵巢癌模型的建立及其生物学特性
目的 在免疫功能正常的C57BL/6小鼠体内建立上皮性卵巢癌腹腔转移瘤模型及皮下瘤模型,为卵巢癌的诊断、治疗及预防的相关研究提供基础.方法 体外培养近交系C57BL/6小鼠卵巢上皮低分化腺癌细胞株ID-8,将对数生长期的ID-8细胞按1×10 7、5×106、1×106和1×105个细胞/只的剂量,分别接种于6～8周雌性SPF级C57BL/6小鼠腹腔及左侧肩部皮下,共8组,每组6只.观察腹腔瘤及皮下瘤的成瘤时间、成瘤率、腹水、腹腔肿瘤转移情况及小鼠生存期;处死小鼠时留取主要脏器、腹腔肿瘤及皮下肿瘤标本,行病理学检查.另外6只小鼠接种5×106个ID-8细胞,分别在4、8、16周后处死进行系统解剖,做常规病理学检查.结果 将不同数量的ID-8细胞接种C57BL/6小鼠腹腔及皮下后,成瘤率均为100％,腹腔瘤模型组:腹腔注射1×105,1×106,5×106,1×107个ID-8细胞,平均生存时间分别为(141±6.7)d、(122.8±4.5)d、(83.4±7.2)d和(74.4±4.5)d,随着肿瘤细胞接种负荷增加,动物生存期明显缩短(P＜0.05).皮下瘤组:1×107细胞组和5×106细胞组,1周左右成瘤;1×106细胞组,3周左右成瘤;1×105细胞组,6周左右成瘤.随着肿瘤接种负荷的增加,肿瘤直径和体积明显增大(P＜0.05).结论 C57BL/6小鼠腹腔瘤模型类似人类Ⅲ、Ⅳ期卵巢上皮癌患者的临床特点.皮下瘤模型更易于观察免疫治疗或药物治疗的疗效.在免疫功能正常的C57BL/6小鼠建立的ID-8细胞卵巢癌肿瘤模型,是适合于卵巢癌分子和免疫治疗研究的模型.
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新生小鼠脑缺氧缺血性脑病模型的制作
目的 建立新生C57BL/6小鼠缺氧缺血性脑病(HIE)模型,并讨论模型制作中的相关问题.方法 采用健康7日龄C57BL/6新生小鼠,结扎后剪断右侧颈总动脉,置于37℃、8%低氧浓度环境下,分别于30min、60min、90min、120min取出,并于不同时间处死小鼠,观察脑组织病理改变,并进行行为学检测.结果 (1)HIE模型组小鼠寻找目标所需时间和路径远长于正常组小鼠,且其与正常组间评分有统计学意义(P＜0.05).(2)随着缺氧时间的延长,HIE小鼠12h内死亡率逐渐增高,当缺氧达90min时,死亡率为10%,缺氧120min时,死亡率高达83%.(3)HIE模型组甲苯胺蓝染色见神经细胞核固缩,着色加深,胞浆Nissl小体明显减少;HE染色可见右侧大脑皮层、海马等区域神经细胞明显减少,尤以海马区为明显,神经细胞变性坏死、胶质细胞反应性增生,形成胶质细胞结节.(4)病理改变与缺氧时间、缺血缺氧(HI)损伤后时间点有关.结论 本方法制作新生C57BL/6小鼠HIE模型获得成功.该模型具有进一步推广意义.
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Mxi1基因敲除小鼠遗传背景的转换研究
目的 对FVB/N品系Mxi1基因敲除(knock out,KO)(Mxi1-/-)小鼠进行遗传背景转换,为研究疾病发病机制提供更多种类的基因修饰小鼠.方法 将FVB/N品系杂合子小鼠(Mxi1+/-)与异性C57BL/6品系野生型(wild type,WT)小鼠(Mxi1+/+)杂交,获得杂合子F1代后将其与C57BL/6品系Mxi1+/+小鼠回交,再选择F2杂合子与C57BL/6品系Mxi1+/+小鼠回交,依此再回交8次后,子代互交.利用鼠尾DNA进行基因型鉴定及微卫星DNA(msDNA)检测,组织信使RNA(mRNA)和组织蛋白检测背景转换效率.结果 基因型鉴定为Mxi1-/-的互交子代小鼠msDNA检测结果与WT型C57BL/6小鼠一致,与FVB/N小鼠不同.PCR和Western印迹结果显示,随机选取的任意自交子代纯合子小鼠体内不表达Mxi1的mRNA和蛋白质,成功获得C57BL/6品系Mxi1-/-小鼠.结论 通过杂交-回交的方式成功获得的新品系Mxi1-/-小鼠能稳定地将突变基因传递给子代.这一成果为疾病动物模型的建立提供了更多的选择.
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米诺环素对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶诱导C57BL/6小鼠行为学损伤的抑制作用研究
目的 探讨米诺环素对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的C57BL/6小鼠的行为学损伤的保护作用及其机制.方法 通过MPTP腹腔注射C57BL/6小鼠建立帕金森病亚急性模型.40只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照(control)组,模型(MPTP)组,治疗(MPTP+ Mino)组和米诺环素阴性对照(Mino)组,每组10只.分别采用游泳、爬杆和自主活动计数实验检测小鼠的运动行为能力.并采用HPLC测定中脑多巴胺(DA)、二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量.结果 治疗组游泳评分,爬杆评分和自主活动能力明显高于模型组(P＜0.01).且治疗组的中脑DA、DOPAC和HVA的含量明显高于模型组(P＜0.01).结论 米诺环素对MPTP所致的小鼠运动功能损伤具有良好的保护作用,其机制可能是通过抑制MPTP所致的小鼠多巴胺神经元的损伤而起作用.
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IRM-2小鼠移植性肿瘤模型的生物学特性
目的 观察IRM-2小鼠和C57BL/6小鼠接种Lewis肺癌生物学特性的对比研究.方法 取肿瘤组织研磨,用生理盐水稀释成2×106/mL,取细胞悬液接种于IRM-2小鼠和C57BL/6小鼠腋下,0.2 mL/只.观察两品系肿瘤生长、荷瘤鼠生存时间,外周血细胞及病理指标变化.结果 两品系小鼠成瘤率均是100%,荷瘤鼠存活时间无明显差异,IRM-2小鼠荷瘤鼠体重净增长明显高于C57BL/6荷瘤小鼠(P＜0.05).白细胞分类及病理指标变化无明显差别.结论 IRM-2小鼠与C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型生物学特性基本一致,IRM-2小鼠可以建立稳定的Lewis肺癌肿瘤模型应用于实验研究.
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鼠伤寒沙门氏菌S.Typhimurium感染C57BL/6小鼠肠道模型的建立及表型分析
目的 建立鼠伤寒沙门氏菌S.Typhimurium感染C57BL/6小鼠肠道模型.方法 先用5% NaHCO3溶液灌胃,中和部分胃酸,提高鼠伤寒沙门氏菌S.Typhimurium的感染能力,随后进行鼠伤寒沙门氏菌S.Typhimurium灌胃攻毒.观察小鼠的临床症状,对小鼠的生存情况及体重进行统计学分析,并通过组织病理切片分析小鼠肠道组织病理变化等.结果 鼠伤寒沙门氏菌S.Typhimurium攻毒后C57BL/6小鼠出现体重下降、萎靡不振、寒颤及死亡等表型,解剖学水平显示小鼠肠道充血膨胀.病理分析结果显示小鼠小肠绒毛间质水肿、肠粘膜层坏死及炎性细胞浸润等.结论 成功建立鼠伤寒沙门氏菌S.Typhimurium感染C57BL/6小鼠肠道模型,该模型在研究相关免疫分子或细胞因子在S.Typhimurium引发肠炎过程中的生物学功能及治疗等方面具有重要的科学意义.
关键词： 肠道感染 S.Typhimurium C57BL/6 组织病理 -
不同品系小鼠在三种常见抑郁检测方法中的行为学表现
目的 探讨4种不同品系小鼠在3种实验(空场实验、悬尾实验及强迫游泳实验)中的行为学差异,为抗抑郁新药研究中的实验动物选择提供参考.方法 利用空场实验检测C57BL/6、BALB/c、ICR、和昆明小鼠的自主活动能力和对新奇环境的探索能力;利用悬尾实验和强迫游泳实验检测它们在应激刺激下的行为绝望状态.结果 在空场实验中,BALB/c、ICR和昆明小鼠的运动总路程、运动速度和运动时间明显高于C57BL/6小鼠(P<0.05),ICR和昆明小鼠的直立次数也明显高于C57BL/6小鼠(P<0.05);悬尾实验C57BL/6小鼠的不动时间显著长于其他3种品系小鼠(P<0.05),但是4种品系小鼠在强迫游泳实验中的不动时间差异无显著性.结论 C57BL/6小鼠自发活动量低,对新奇环境的探索能力差,并且在急性应激刺激下容易造成行为绝望,因此C57BL/6小鼠可能适合作为急性应激抑郁模型动物.
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睾酮对肝细胞胰岛素敏感性的影响及分子机制
目的 探讨睾酮对肝细胞胰岛素敏感性的影响及分子机制.方法 在体实验:21只成年C57BL/6雌鼠根据体重按完全随机法分为睾酮组(11只)及对照组(10只),给药24周后处死.离体实验:将HepG2肝癌细胞分成3组:(1)10 9～10-5 mol/L睾酮处理0～36 h后胰岛素刺激;(2)101睾酮处理0～96 h后胰岛素刺激;(3)10-7 mol/L睾酮预处理36 h后胰岛素刺激,间隔4或6h后再次胰岛素刺激.Western印迹法检测鼠肝组织及HepG2细胞的蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶3β(GSK3β)活性及表达水平.结果 睾酮组鼠肝组织的Akt及GSK3β活性均明显低于对照组(分别为43.1％±3.2％比77.1％ ±6.7％,14.7％±6.7％比82.3％±2.0％,均P＜0.05).胰岛素单次刺激HepG2细胞时,10-8～10-6 mol/L睾酮处理36 h的Akt、GSK3β活性均显著高于对照组(均P＜0.05);但当睾酮处理时间延长至96 h或浓度升高至10-5 mol/L时,Akt、GSK3β的活性转趋下降;10-7mol/L睾酮组预处理36 h后胰岛素间隔6h二次刺激时,睾酮组的Akt、GSK3β活性均显著低于对照组(均P＜0.05).结论 睾酮先增强后抑制肝细胞的胰岛素信号通路的转导,可能导致肝脏的胰岛素敏感性先增强后抑制,甚至转变为胰岛素抵抗.
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热休克蛋白70在小鼠膀胱癌模型中的表达及其与凋亡的关系
本研究使用N-丁基-N-4-羟丁基亚硝胺(BBN)和抗坏血酸钠(Na-AsA),建立小鼠膀胱肿瘤模型,观察热休克蛋白(HSP)70在膀胱癌发生发展中的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系.1 材料与方法1.1 建立动物模型:6周龄纯系C57BL/6雄性小鼠60只,每笼5只饲养,温度24℃,相对湿度60%,昼夜节律光照.0.05%BBN蒸馏水作为诱导组饮水,5%Na-AsA于14周开始加入诱导组饮水中.随机选20只小鼠作为对照组,给予正常饲料及自来水:另40只作为实验组,时间共30周.
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不同品系小鼠骨髓间质干细胞扩增能力及细胞表型差异的比较
背景:虽然近年来对小鼠骨髓间质干细胞分离培养的报道层出不穷,但就其方法而言,有的操作步骤过于繁琐,有的不适用于国内相关实验,如采用一系列抗体负选或利用自行研制的新抗体筛选.目的:拟建立简便稳定的小鼠骨髓间质干细胞体外分离和扩增的方法,并比较不同品系小鼠骨髓间质干细胞的生物学特点.设计、时间及地点:细胞学体外对比观察,于2007-04/09在中山大学中山医学院病理生理教研室完成.材料:清洁级6周龄雄性C57BL/6和BABL/C小鼠各5只,由中山大学中山医学院实验动物中心提供.方法:取两种品系小鼠双侧股骨,去除股骨上附带组织,用含10%FCS的DMEM培养基冲洗骨髓腔,过200目不锈钢网,收集骨髓细胞,用Tris-NH4C1红细胞裂解液溶解2 min,用含10%FCS的DMEM培养基调整细胞浓度,按500个细胞/孔低密度接种于24孔板,置于37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中.出现成纤维样细胞克隆后消化收集并移至6孔板,待细胞70%～80%融合时消化传代.主要观察指标:细胞形态和生长特点,流式细胞仪检测细胞表型,茜素红染色观察成骨诱导情况,油红O染色观察成脂诱导情况.结果:约培养2周可形成细胞克隆,经历一缓慢扩增阶段后,第6～7代细胞生长明显加快,可见形态均一的成纤维细胞群,呈典型的旋涡状生长,两种品系小鼠骨髓问质干细胞均可传至10代以上,但C57BL/6小鼠骨髓间质干细胞体外扩增能力更强.C57BL/6和BABL/C小鼠骨髓间质干细胞均呈CD45 CD11b CD117,CD44和Sca-1呈阳性表达,可连续表达MHC-Ⅰ,少量表达CD80,此外前者可少量表达MHC-Ⅱ,而后者几乎不表达MHC-Ⅱ.两者体外均能够向成骨、成脂方向分化.结论:通过低密度培养技术可简单方便的体外分离并扩增C57BL/6和BALB/c小鼠骨髓间质干细胞.两品系小鼠骨髓间质干细胞均易向成骨成脂分化,但在扩增能力、细胞表型上略有不同.
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不同油脂对小鼠肠道菌群的影响
[目的]研究不同油脂对肠道菌群的影响.[方法]采用C57BL/6雄性小鼠(6周龄,体重16～18g),每组12只,分为7组,对照组采用脂肪能量占总能量10％的普通饲料饲养,其余6组用D12451高脂饲料进行饲养,各组高脂饲料中的油脂分别为猪油、大豆油、24度棕榈油、33度棕榈油、混合油(含大豆油与棕榈油,质量比=0.9:1)、橄榄油,连续干预12周后眼框采血,检测总胆固醇和三酰甘油等血脂指标,处死后采集结肠内的残留排泄物,采用16S rRNA扩增子测序技术进行测序,进行操作分类单元聚类和物种分类分析.采用MetaStat方法分析物种丰度数据,得到P值,校正后得到q值,筛选具有差异的物种.[结果]实验组总胆固醇和三酰甘油高于对照组.混合油组放线菌门物种相对丰度高于对照组(q＜0.05).猪油组、33度棕榈油组疣微菌门物种相对丰度高于对照组(q＜0.05).[结论]长期的高脂膳食会对小鼠肠道菌群产生影响.大豆油、橄榄油、24度棕榈油不会引起肠道菌群的异常.
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牛MBP诱导BALB/c和C57BL/6小鼠实验性变态性脑脊髓炎样反应的研究
为了进一步研究实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)动物模型,采用从新鲜牛脊髓中提取的MBP免疫诱导非敏感品系BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠,通过对实验动物的症状、中枢神经系统的病理改变及细胞因子水平变化的检测,较成功地建立了C57BL/6、BALBL/c小鼠的EAE模型,实验方法稳定可靠.
关键词： 实验性变态性脑脊髓炎 C57BL/6 Balb/c 髓鞘碱性蛋白 IFN-γ -
柯萨奇病毒B诱导的免疫性多发性肌炎模型的建立
目的:探讨制作实验性免疫性多发性肌炎动物模型的方法,以及柯萨奇病毒感染与多发性肌炎发病的关系.方法:分别用不同毒力0.3 ml的柯萨奇病毒B1(CVB1 10-2,10-3,10-4 TCID50)感染和兔肌肉匀浆(30 mg/ml)加完全弗氏佐剂多次免疫28只正常豚鼠,共观察3～5周;和不同毒力0.2 ml CVB1 10-3,10-5,10-7 TCID50分别腹腔接种各20只BALB/C和C57BL/6小鼠;以及0.1 ml CVB3 10-6 TCID50腹腔接种28只BALB/C小鼠,共观察1～3周,制成实验性多发性肌炎动物模型,观察其在血清肌酶、巨检和组织病理的改变.结果:发现0.3 ml毒力为10-2(A组),10-3(B组)和10-4(C组)TCID50柯萨奇病毒B1感染豚鼠组,3周后仅少数豚鼠出现多发性肌炎的症状,但均能导致肌酶谱(CK,CK-MM,LDH和AST)异常升高,与正常组相比有明显差异(均P＜0.05),以B组升高值高,但巨检肌肉无异常;4周后10-3组(F组)豚鼠33.3%出现下肢瘫痪,巨检发现肌肉萎缩,弹性差,病理检查证实为多发性肌炎改变;3周与5周的CK和CK-MM升高值相比,无显著差异(P=0.1031和P=0.1164).单纯兔肌肉匀浆免疫(E组)也能导致豚鼠肌酶谱异常升高,但不如病毒感染后明显,也不引起股肌肉肌炎的病理改变.柯萨奇病毒B1和B3均不能诱导BALB/C和C57BL/6小鼠出现多发性肌炎改变.结论:柯萨奇病毒B1感染的毒力和病毒量与豚鼠多发性肌炎的发病相关,在感染5周后比较明显.本模型可作为研究人类多发性肌炎的一个重要手段,为人类肌炎的发病机理和治疗提供较好的动物模型.
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C57BL/6胎鼠大脑皮质神经元体外培养与鉴定
目的 探讨近交系C57BL/6胎鼠皮质神经元体外培养方法,观察其生长情况,并进行鉴定.方法 分离孕17 d C57BL/6胎鼠大脑皮质,剪碎吹打,静置取上清液,余组织块以木瓜酶和DNaseI消化,差速贴壁提纯,培养6 h后以添加含谷氨酰胺和B27的Neurobasal培养基继续培养,观察其生长情况,并于体外培养3、5d时,以神经元特异性核蛋白(neuron specific nuclear protein,NeuN)和微管相关蛋白-2(microtubule-associated protein-2,MAP-2)为标志物,用免疫荧光双染法对分离培养的原代细胞进行鉴定.结果 体外培养6h细胞已贴壁,少量细胞发出1～3个短小突起；此后神经元相继发出突起、并伸长,与邻近细胞突起互相接触,培养5d突起已互相交织成网；体外培养3、5d的NeuN阳性细胞率分别为(94.1±5.0)％、(95.0±5.6)％；MAP-2阳性细胞率分别为(96.7±2.9)％、(95.6±5.6)％,NeuN、MAP-2阳性细胞率差异无统计学意义(P＞0.05),NeuN和MAP-2鉴定结果一致性好.结论 本方法制备的C57BL/6胎鼠皮质原代神经元纯度高,损伤小,生长发育状态良好,无明显增殖性,可作为神经元体外研究的良好实验材料.
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C57BL/6J亚系Nnt部分功能基因丢失的检测
目的 介绍一种判定C57BL/6小鼠亚系中烟酰胺核苷酸转氢酶(Nnt)基因是否丢失的PCR检测方法.方法 用PCR方法分别对5只购自杰克逊的C57BL/6J小鼠以及10只本公司C57BL/6背景的转基因小鼠基因组DNA进行扩增,对扩增产物进行分析.结果 从杰克逊实验室购得的5只C57BL/6J小鼠基因组以及本公司抽取的3只C57BL/6小鼠Nnt部分功能基因丢失,本公司C57BL/6中有6只小鼠含有Nnt基因未丢失,另外还有1只小鼠为Nnt基因杂合小鼠.结论 在选择C57BL/6作为代谢性实验的模型时,应考虑选择适当的亚系.
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血管生成素在小鼠皮肤中的表达及其对小鼠毛发生长的影响
目的:探讨血管生成素在小鼠皮肤中的表达及其对小鼠毛发生长的影响.方法:利用松香-石蜡拔毛法诱导C57BL/6小鼠背部的毛囊同步进入生长期,半定量RT-PCR检测血管生成素mRNA在不同毛囊周期小鼠皮肤中的表达.分离与培养完整的小鼠触须毛囊,加入不同浓度的血管生成素(0～200 μg/L),培养8 d 后测量毛囊的生长长度.与此同时,皮内注射血管生成素或血管生成素真核表达质粒pEGFP-ANG,并设立同时注射抗人血管生成素抗体组、注射空质粒pEGFP-C2 组和注射赋形剂的对照组,观察小鼠局部皮肤颜色的改变,并借助苏木精-伊红染色组织切片测量皮肤的厚度和计数生长期Ⅵ毛囊的比例.结果:半定量RT-PCR 显示小鼠皮肤中血管生成素mRNA 在生长期表达逐渐增加,生长期晚期表达高,退行期开始减少,至休止期表达低,其表达模式与毛囊周围的血管形成相一致.12.5～200.0 μg/L血管生成素呈剂量依赖性地促进体外培养的小鼠触须毛囊生长(P < 0.01).而且,皮内注射血管生成素和血管生成素真核表达质粒对C57BL/6小鼠背部的局部皮肤颜色无明显影响,但能明显增加局部皮肤的厚度(P ＜ 0.01)和生长期Ⅵ毛囊的比例(P ＜ 0.01).结论:血管生成素在小鼠皮肤中的表达具有毛囊周期依赖性的特点,血管生成素可能通过促进毛囊周围的血管形成和诱导毛囊进入生长期Ⅵ而促进小鼠毛发的生长.
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胆结石小鼠肝脏核受体基因LRH-1及其调控基因CYP7A1的表达
目的:探讨胆固醇结石(GS)小鼠肝脏的核受体基因—旰核受体类似物1 (liver receptor homolog 1,LRH-1)及其调控基因胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7-α hydroxylase,CYP7A1)的表达.方法:雌性C57BL/6小鼠40只,分为2组,每组20只,分别予以正常饮食、高脂饮食喂养10周后处死.病理切片检查小鼠胆囊壁细胞组织学改变,实时定量PCR法测定肝脏LRH-1及CYP7A1表达量.Western Blot方法测定肝脏上述基因蛋白的表达量.结果:胆结石小鼠胆囊壁细胞呈现炎性改变.胆石组小鼠LRH-1 mRNA及蛋白表达均高于对照组(P＜0.01),CYP7A1 mRNA及蛋白表达量较对照组升高(P＜0.01).结论:啮齿动物肝脏LRH-1和CYP7A1的表达异常与胆囊胆固醇结石形成有关,可能共同在小鼠胆结石形成中发挥作用.
