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间接酶联免疫吸附试验检测北京市昌平地区体检人群中汉赛巴尔通体抗体
目的 调查北京市昌平地区健康体检人群血清汉赛巴尔通体抗体阳性情况.方法 用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光抗体(IFA)试剂盒检测体检人群血清汉赛巴尔通体抗体情况.结果 以IFA为参考标准,间接ELISA方法的灵敏度为70.6%,特异度为91.6%;阳性预测值为82.2%(60/73),阴性预测值为84.9%.ELISA共检测了357份健康体检人群血清,汉赛巴尔通体抗体阳性率为34.5%,IFA共检测了239份体检血清,其汉赛巴尔通体抗体阳性率为35.6%.结论 间接ELISA方法对于检测汉赛巴尔通体感染是一种快速、敏感、特异的方法,昌平地区健康体检人群中存在汉赛巴尔通体抗体阳性的情况.
关键词： 汉赛巴尔通体 间接酶联免疫吸附试验 -
三种不同原理的间接酶联免疫吸附试验方法在严重急性呼吸道综合征诊断中的比较研究
目的比较不同原理的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法在严重急性呼吸道综合征(Severe acute respiratory syndrome,SARS)诊断中的应用,以便研制开发更先进的诊断试剂,应对可能发生的SARS再次流行.方法对山西省疾病预防控制中心(CDC)送检的正常成年人血清标本44份,首都医科大学附属宣武医院住院SARS患者血清标本62份,宁夏回族自治区CDC送检SARS患者及疑似患者血清28份,分别采用三种不同原理的间接ELISA试剂进行抗体检测:①美国CDC采用全病毒灭活抗原包被,检测血清IgA、IgM、IgG抗体的试剂;②国内某公司采用全病毒灭活抗原包被,检测血清IgG及IgM抗体试剂;③基因工程表达并纯化刺突蛋白(spike protein,S蛋白)和核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N蛋白)抗原包被,检测血清中IgM及IgG抗体的试剂.结果通过比较研究显示:试剂①与试剂③的特异性较高,3种试剂的敏感性有较高的一致性.结论由于全病毒裂解抽提液作包被抗原其生产过程存在生物安全隐患,要求条件高,所以基因工程表达并纯化的蛋白来制备SARS冠状病毒抗体检测试剂有自身的优越性.由于N蛋白具有较强的免疫原性,在各毒株之间的变异又很小,因此以体外基因重组N蛋白代替全病毒裂解液蛋白,是SARS抗体检测试剂的发展方向.
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蛋清中食物不耐受组分分析
目的 分析引起患者鸡蛋不耐受的主要蛋白组分.方法 用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)分析蛋清粗提取物中的蛋白组分.以鸡蛋不耐受患者血清特异性IgG作为识别抗体,经Western blotting和间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分析与患者血清特异性IgG结合的蛋白成分.结果 蛋清粗提物SDS-PAGE电泳结果主要有4个条带,相对分子质量分别为:14×103、34×103、45×103和76×103,根据相对分子质量推测分别为溶菌酶、卵类黏蛋白、卵清白蛋白和卵转铁蛋白.患者血清的免疫印迹结果主要呈现4个条带,分别对应溶菌酶、卵类黏蛋白、卵清白蛋白和卵转铁蛋白,间接ELISA法结果显示四种纯化抗原均与患者血清有反应.结论 引起患者鸡蛋不耐受的蛋白主要有两种,分别为卵类黏蛋白和卵清白蛋白,其相对分子质量分别为34×103和45×103.
关键词： 鸡蛋 食物不耐受 特异性IgG 免疫印记 间接酶联免疫吸附试验 -
基于重组优势多表位抗原的梅毒间接酶联免疫吸附试验与梅毒螺旋体血凝试验和甲苯胺红不加热血清试验检测梅毒螺旋体抗体的比较研究
目的建立操作简便、特异性好、敏感性高的血清梅毒抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA).方法通过计算机分析选择梅毒螺旋体优势抗原表位,构建了梅毒螺旋体多表位优势嵌合抗原(rTpN15-TpN17-TpN42-TpN47)表达载体,转化宿主菌HB101进行表达,纯化获得高纯度融合抗原.在此基础上,以纯化抗原包被酶联板,建立检测血清中梅毒抗体的间接ELISA法.利用该方法与梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)和甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)同时检测了126例梅毒可疑血清样本,对检测结果进行了比较研究.结果梅毒螺旋体多表位优势嵌合抗原(rTpN15-TpN17-TpN42-TpN47)在大肠杆菌中获得了高效表达,并成功建立了检测血清中梅毒抗体的间接ELISA法及试剂.对126例梅毒可疑血清样本的检测结果,ELISA、TRUST、TPHA的检出阳性率分别为75.40%(95/126)、72.22%(91/126)、70.63%(89/126),其中TRUST有29例,TPHA有6例为可疑阳性.TPHA检测的6例可疑阳性中,有5例ELISA、TRUST均为阳性;而TRUST测出的29例可疑样品中,仅7例ELISA、TPHA阳性.结论多表位嵌合抗原ELISA试剂在特异性、敏感性与TPHA法相近,但明显优于TRUST法.
关键词： 梅毒 重组多表位嵌合抗原 间接酶联免疫吸附试验 -
89例HIV阳性青年人咽部临床观察
人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染导致获得性免疫缺陷综合征(acquired immune deficiency syndrome,AIDS)，它使人体免疫功能产生缺陷，丧失对微生物的抵御能力，是一种致死性疾病。AIDS及HIV感染可在咽部出现各种临床症状、体征、微生物及病理学改变。在非洲博茨瓦纳Princess Marina医院和Nyangangwe医院我们对89例HIV感染的青年人进行咽部临床观察，报告如下。1 材料与方法 HIV阳性患者89例中，男40例，女49例，年龄18岁～36岁，平均年龄27岁。发病至确诊时间1个月～4年。均为博茨瓦纳本地人，黑色人种。本组病例全部经间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检出HIV阳性，再经蛋白印迹法(Western blot)确诊，符合WHO/CDC艾滋病临床诊断标准。
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新疆维吾尔自治区正常汉族儿童与维族儿童血清甘露聚糖凝集素含量水平测定及意义
目的 建立正常新生儿及 6 月～10 岁儿童血清甘露聚糖凝集素(MBL)水平正常值参考范围.方法 用 ELISA 方法检测 262 例新生儿脐血 MBL 水平及 6 月～10 岁健康儿童血清 MBL 水平,比较不同地区、不同族别、不同性别新生儿、正常儿童血清 MBL 水平.结果 新生儿脐血 MBL 值为(1.71±1.60)mg/L,6 月～10 岁正常儿童外周血 MBL 值为(3.09±1.58)mg/L,两者间差异有统计学意义(P＜0.05),汉族及维族新生儿脐血 MBL 值比较差异无统计学意义(P＞0.05);汉族与维族 6 月～10 岁正常儿童血清 MBL 值比较差异无统计学意义(P＞0.05);不同性别正常儿童血清 MBL 值比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 确立不同年龄段儿童血清 MBL 值对临床治疗将有很重要意义.
关键词： 甘露聚糖凝集素 天然免疫机制 间接酶联免疫吸附试验 -
抗泛素羧基末端水解酶-1抗体在神经精神性狼疮诊断中的临床意义
目的 探讨抗泛素羧基末端水解酶-1(UCHL-1)抗体在神经精神性狼疮(NPSLE)诊断中的临床意义.方法 采用间接酶联免疫吸附试验对2014年5月至2016年3月间在郑州大学第五附属医院住院56例患者的脑脊液进行抗UCHL-1抗体检测,并分析NPSLE患者的临床资料及诊断价值.结果 抗UCHL-1抗体在NPSLE组中的表达水平显著高于系统性红斑狼疮(SLE)组及神经疾病对照组(P<0.05).脑脊液中抗UCHL-1抗体阳性率在 NPSLE组为23.7%(9/38),其他对照组为0%.在抗核小体抗体、抗dsDNA抗体、抗磷脂抗体、抗nRNP抗体、抗核糖体P蛋白抗体、抗Sm抗体阴性的NPSLE患者中抗UCHL-1抗体阳性率分别为41.7%、29.4%、29.2%、25.9%、25.0%、25.0%.抗UCHL-1抗体在血液系统受累的NPSLE患者中检出率显著增高(P=0.012).抗UCHL-1抗体表达水平与24 h尿蛋白呈正相关(r=0.361,P=0.039).结论 抗UCHL-1抗体对NPSLE的诊断具有一定意义.
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人源Dickkopf-1原核表达产物在非小细胞肺癌患者血清中的应用研究
目的 探讨非小细胞肺癌患者血清中Dickkopf-1(DKK-1)自身抗体潜在的临床应用价值.方法 应用RT-PCR方法获得DKK-1 cDNA,构建原核表达载体pET30a(+)/DKK-1,亲和层析方法纯化蛋白,SDS PAGE电泳及Western blot鉴定,应用间接ELISA方法对38名键康志愿者和97例非小细胞肺癌患者血清中 DKK-1自身抗体进行检测.结果 DKK-1自身抗体在非小细胞肺癌患者血清中的阳性率为34.0%,特异性为84.2%;DKK-1自身抗体与非小细胞肺癌患者有无远处转移存在相关性(P＝0.006);DKK-1自身抗体和肿瘤标志物痛胚抗原联合检测的阳性率明显高于癌胚抗原与胃泌素释放肽前体、细胞角蛋白、神经元特异性烯醇化酶、鳞状细胞癌抗原进行联合检测的阳性率.结论 该研究成功构建原核表达载体pET30a(+)/DKK 1.并建立检测DKK-1自身抗体的ELISA方法.DKK-1自身抗体可能成为非小细胞肺癌诊断、治疗中一种有用的肿瘤标志物.
关键词： 原核表达 DKK-1自身抗体 非小细胞肺癌 间接酶联免疫吸附试验 -
120例反复腹痛儿童幽门螺杆菌抗体检测分析
为探讨幽门螺杆菌(Hp)感染与小儿消化道疾病的关系,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定120例反复腹痛患儿血清Hp抗体IgG,其中阳性54例,阳性率45%,阳性率随年龄增长而增加,提示对反复腹痛儿童进行血清Hp抗体检测简单、快速,敏感度及特异性均较高.
关键词： 幽门螺杆菌 腹痛 间接酶联免疫吸附试验 -
间接ELISA法测定转基因小鼠血清中核糖核酸酶抑制因子的表达
[目的] 建立间接ELISA法测定血清中核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)含量的方法,并测定在转RI基因小鼠血清中RI的表达情况.[方法] 用血清样品包被酶标板,兔抗人 RI抗体为一抗,辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为二抗,建立血清RI定量检测的间接ELISA法;取转染了RI基因的小鼠的血清,用上述建立的间接ELISA法测定不同时相小鼠血清中RI的表达水平.[结果] 定量检测血清RI的间接ELISA法适反应条件为一抗佳稀释度为1∶4000,二抗的佳稀释浓度为1∶2000.转基因小鼠第2、3周血清中RI含量较低(0.556±0.080),1个月左右达到高值(0.836±0.113),3个月时明显下降(0.640±0.100).[结论] 间接ELISA法可以用于测定血清中的RI抗原含量.
关键词： 核糖核酸酶抑制因子 间接酶联免疫吸附试验 血管生长因子 -
间接酶联免疫吸附试验测定恶性肿瘤血清中核糖核酸酶抑制因子表达的研究
目的:探讨间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测核糖核酸酶抑制因子(RI)在恶性肿瘤患者血清中的表达.方法:建立检测血清RI含量的间接ELISA法,检测和比较正常人、恶性肿瘤患者(乳腺癌、胃癌、肺癌、肝癌)、乳腺良性肿瘤患者血清中RI的表达水平.结果:所建立的间接ELISA法特异性高;恶性肿瘤患者血清中RI表达均明显低于正常人(P＜0.05),乳腺癌亦明显低于乳腺良性肿瘤(P＜0.05).结论:RI表达的降低可以作为肿瘤良、恶性鉴别的指标之一.
关键词： 核糖核酸酶抑制因子 间接酶联免疫吸附试验 恶性肿瘤 -
三种不同免疫检验方法检测抗HIV结果可靠性对比分析
目的：分析探讨双抗原夹心 ELISA 法、金免疫层析试验、间接酶联免疫吸附试验三种方法检测抗 HIV 结果可靠性差异。方法：对卫生部全国血站系统免疫检验2010年室间质量评价血清18份、卫生部不定量临床检验中心定值参比血清2NCU/ml和4 NCU/ml 以及无偿献血血清200份分别行上述三种检验方法检测，比较三种方法检测可靠性差异。结果：双抗原夹心 ELISA 法检测室间质量评价血清、2NCU/ml 血清、4NCU/ml血清和无偿献血者血清阳性率分别为100．0％、100．0％、100．0％和0．0％；而金免疫层析试验依次诊断上述四项血清阳性率为94．4％、100．0％、88.9％和0．5％；间接酶联免疫吸附试验依次诊断上述四项血清阳性率为83．3％、94．4％、100．0％、1．5％。结论：三种方法中，双抗原夹心 ELISA 法诊断准确性高，可靠性强，值得临床推广。
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肠致病性大肠杆菌外膜蛋白免疫保护性研究
目的:观察免疫家兔对肠致病性大肠杆菌外膜蛋白的免疫应答.方法:以提纯的兔源致病性大肠杆菌WF0305菌株的外膜蛋白(Outer membrane protein,OMP)皮下注射免疫组家兔,对照组仅注射佐剂,于免疫前及免疫后38天分别收集血清,以间接ELISA法检测血清中的抗体效价,同时用免疫血清与菌株做玻板凝集试验和保护力试验;采用MTT法检测OMP对体外脾淋巴细胞特异性增殖反应.结果:免疫组的家兔在三免后免疫血清中抗OMP的抗体效价可达1∶25 600;免疫血清均能与WF0305菌株、WF0408菌株、WF0504菌株发生直接凝集反应,且效价均能达到1∶16以上,小鼠的半数保护量均在0.03～0.06 ml之间.采用MTT法检测OMP对体外脾淋巴细胞特异性增殖反应,证明OMP对脾淋巴细胞的增殖有明显增强作用(P＜0.01).结论:OMP可诱导兔对大肠杆菌的特异性体液免疫和细胞免疫应答,说明OMP具有较好的免疫原性,且对大肠杆菌感染有一定的保护力.
关键词： 致病大肠杆菌 外膜蛋白(OMP) 间接酶联免疫吸附试验 MTT -
脑脊液早期分泌性靶抗原-6水平的动态变化及对结核性脑膜炎的诊断价值
目的 探讨脑脊液早期分泌性靶抗原-6( ESAT-6)水平的动态变化对结核性脑膜炎早期诊断的意义.方法 结脑病人50例,其中确诊者10例,临床诊断40例,非结核病对照40例,健康对照10例.间接酶联免疫吸附试验检测各组ESAT-6水平.结果 间接ELISA方法检测脑脊液中的ESAT-6,敏感性88％,特异性92％,结脑组早期脑脊液ESAT-6含量较对照组明显升高,抗痨治疗6 w后脑脊液ESAT-6含量明显下降.结论 应用间接酶联免疫吸附试验测定脑脊液中ESAT-6水平诊断结脑是可靠的,其动态变化有助于判断结脑预后.
关键词： 结核性脑膜炎 早期分泌性靶抗原-6 间接酶联免疫吸附试验 诊断 -
包被伤寒Vi多糖抗原检测鼠血清中伤寒沙门菌抗体的间接ELISA方法的建立
目的 建立检测伤寒沙门菌(Salmonella typhi)抗体的间接ELISA方法,并进行验证.方法 对常规间接ELISA方法进行优化,确定抗原适包被质量浓度及被检血清佳稀释度、适包被温度及时间、包被抗原与血清的适温度和时间、血清与酶标二抗及封闭的适温度和时间、酶标二抗适工作质量浓度,并验证该方法的灵敏度、精密性、特异性及耐用性;用伤寒Vi多糖结合物原液和伤寒Vi多糖衍生物经小鼠大腿内侧皮下免疫,分别于免疫后第14、21、28、35天,经眼眶采全血,分离血清,应用建立的间接ELISA方法检测抗体水平,计算抗体几何平均滴度(GMT).结果 确定了间接ELISA方法适工作条件:伤寒Vi荚膜多糖抗原适包被质量浓度为5μg/ml,血清佳稀释倍数为1:40;适包被温度及时间为4℃12 h;包被抗原与血清适反应温度和时间为37℃2 h;血清与酶标二抗适反应温度和时间为37℃1 h;封闭液适封闭温度和时间为室温1 h;HRP标记的羊抗鼠IgG佳反应浓度为1∶8 000.该方法灵敏度为1∶1 600;孔间和板间CV平均值分别为2.8％和5.8％;与其他血清无交叉反应;pH值、包被时间、包被温度及酶结合时间调整前后,同一样品检测的A450值差异无统计学意义(P＞0.05).伤寒Vi多糖与蛋白载体偶联后,免疫原性明显增强,且白喉类毒素(diphtheria toxin DT)和重组铜绿假单胞菌外毒素A(recombinant Pseudomonas aeruginosa exotoxinA,rEPA)两种不同载体偶联得到的结合物免疫原性无明显差异.结论 成功建立了一种检测伤寒沙门菌抗体的间接ELISA方法,该方法具有较强的特异性、灵敏度及精密性.
关键词： 伤寒沙门菌 荚膜多糖 间接酶联免疫吸附试验 -
重组戊型肝炎p179疫苗小鼠抗体间接ELISA检测方法的建立及其初步应用
目的 建立重组戊型肝炎p179疫苗抗体间接ELISA检测方法,并进行初步应用.方法 确定重组戊型肝炎疫苗p179抗原的佳包被浓度及包被条件、酶标抗体的佳稀释度、封闭条件、佳抗体稀释液,对建立的方法的特异性、准确性及精密度进行验证,并与市售ELISA试剂盒进行比较.结果 抗原佳包被浓度为1μg/ml,4℃包被过夜;酶标抗体佳稀释度为1∶5000;3％牛血清白蛋白封闭3h;佳抗体稀释液为含1％酪蛋白PBS.建立的方法检测的A450与重组戊肝抗原浓度呈明显的剂量依赖性,对不相关的anti-HAV、anti-HB、anti-INF、anti-RABV无交叉反应;36份小鼠阳性血清的检出率为100％;3份阳性血清重复检测20次的CV均小于15％.市售某厂家ELISA试剂盒检测48份血清,阳性检出率为83.3％,建立的间接ELISA方法检测,阳性检出率为89.6％.结论 建立了重组戊肝p179疫苗抗体间接ELISA检测方法,可用于重组戊肝疫苗小鼠免疫后血清抗体的检测.
关键词： 戊型肝炎疫苗 p179 小鼠 间接酶联免疫吸附试验 -
汉坦病毒核蛋白基因截短片段在大肠杆菌中表达及其产物的初步应用
目的获得汉坦病毒重组核蛋白,并将其应用于血清学诊断.方法采用PCR方法,从带有HTN型Z10株病毒全长核蛋白基因的质粒上扩增读码框的前354bp的核蛋白基因片段.将截短的核蛋白基因片段插入表达载体pGEX-20T,得到重组质粒pGEX20-Z10trNP,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,表达产物经Glutathione Sepharose 4B柱纯化,并进行抗原性及抗原特异性检测.结果 pGEX20-Z10trBP表达产物是相对分子质量约为40000的谷光甘肽转移酶(GST)融合蛋白GST-Z10trNP.经Western blot分析,GST-Z10trNP具有良好的抗原性.用纯化GST-Z10trNP为抗原,用ELISA间接法检测出血热病人血清、出血热疫苗免疫的家兔及小鼠血清,均能很好地区分阴性和阳性血清.结论 GST-Z10trNP表达量高,易于纯化,并且具有良好的抗原性及抗原特异性,是一种安全、廉价的诊断抗原.
关键词： 汉坦病毒 重组核蛋白 免疫印迹试验 间接酶联免疫吸附试验 -
布鲁菌感染的实验室检测方法对比
目的 探讨实验室诊断人布鲁菌病(布病)快速、准确及简便的检测技术.方法 采用试管凝集试验(SAT)、间接酶联免疫吸附试验(IELISA)、荧光偏振试验(FPA)和血培养方法对95例确诊(确诊病例组)及42例疑似布病患者(疑似病例组)和同期56例健康体检者(健康对照组)进行布鲁菌实验室检测.分析上述方法在布鲁菌病诊断中的价值.结果 SAT、IELISA、FPA及血培养方法检测人血清布鲁菌在确诊病例组中的阳性率(100.0％、98.9％、96.8％、17.9％)均高于疑似病例组(0、7.1％、4.8％、0,P均＜0.01)和健康组(1.8％、0、3.6％、未做血培养,P均＜ 0.01).确诊病例组中,急、亚急性及慢性病例间比较,IELISA、FPA检测布鲁菌抗体及血培养阳性率间差异无统计学意义(P均＞ 0.05).IELISA试验的敏感性(98.9％)、特异性(100.0％)和Yonden指数(0.989)高.FPA敏感性和特异性分别为96.8％和96.4％.结论 采用FPA对布鲁菌抗体进行初筛,IELISA进行确诊相结合的实验室检测方法,能更简便、迅速地对布鲁菌病进行诊断.
关键词： 试管凝集试验 间接酶联免疫吸附试验 荧光偏振试验 布鲁菌 -
间接酶联免疫吸附试验与传统血清学方法应用于人布鲁杆菌抗体的试验比较
目的 探讨间接酶联免疫吸附试验(IELISA)与传统血清学方法在人布鲁杆菌抗体的检测中的差别.方法 采用IELISA、虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)、抗人免疫球蛋白试验(Coomb's试验)和半胱氨酸试验方法对430例确诊及疑似布病患者(病例组)和同期300例健康体检者(健康组)进行布鲁杆菌抗体检测.分析IELISA方法与RBPT、SAT、Coomb's试验、半胱氨酸试验的符合程度.结果 病例组IELISA、RBPT、SAT、Coomb's试验及半胱氨酸试验的布鲁杆菌抗体检测阳性率高于健康组(IELISA:83.49％比0;RBPT:86.97％比0;SAT:76.27％比0;Coomb's试验:65.58％比0.02％;半胱氨酸试验:67.91％比0,x2=535.05、41247、437.66、339.22、489.49,P均＜0.01).IELISA与RBPT、SAT、Coomb's试验、半胱氨酸试验检测布鲁杆菌抗体阳性符合率分别为87.19％、79.39％、71.59％和76.60％,其中IELISA与RBPT的阳性符合率高,而与Coomb's试验的阳性符合率低.结论 RBPT和IELISA的联合应用可简便、快速、准确的检测布鲁杆菌抗体,为布鲁杆菌病的防治提供重要技术支撑,值得推广应用.
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布鲁菌omp19原核表达和间接酶联免疫吸附试验检测布鲁菌方法的建立
本研究原核表达并纯化了布鲁菌脂蛋白Omp19，并通过蛋白免疫印迹法对其免疫原性进行验证。采用Omp19作为包被抗原，建立检测羊种布鲁菌的间接酶联免疫吸附试验（iELISA），检测90份羊血清样本，并与标准血清凝集试验（SAT）比较，用SPSS软件进行数据分析。结果显示，iELISA与SAT的阳性符合率为95．12％，阴性符合率为67．35％，Kappa值为0．6077。对2种方法进行McNemar卡方检验，结果有显著性差异（P＜0．05）。本研究建立的iELISA与SAT的总符合率达80％，可作为羊种布鲁菌病血清学诊断的备用方法。
关键词： 布鲁菌 omp19 间接酶联免疫吸附试验 标准血清凝集试验
