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广西地区乙型肝炎病毒无症状携带者乙型肝炎病毒前C区突变分析
目的调查广西地区乙型肝炎病毒(HBV)无症状携带者HBV前C区基因突变株的流行情况.方法用套式聚合酶链反应(nPCR)对77例广西南部、北部地区人群HBV无症状携带者血清HBV前C区进行扩增,阳性者用直接测序法进行序列分析.结果 39例HBsAg无症状携带者血清HBV DNA阳性,阳性率为50.7%(39/77),突变株出现率为22.1%(17/77).南部地区阳性率为55.6%(20/36),其中6份标本出现突变株,占30%,常见的突变类型是nt1858位发生点突变(T→C),只有一份标本在nt1896发生点突变(G→A),导致终止密码产生,该标本同时伴有nt1837点突变(A→G);北部地区阳性率为46.3%(19/41),其中有11份标本出现突变株,占57.9%,常见的突变类型是nt1896位发生点突变(G→A),这些标本中有4份同时在nt1846发生点突变(A→T),2份同时在nt1862发生点突变(G→T);标本734分别在nt1856、1858发生点突变(C→T、T→C).结论广西地区HBV无症状携带者HBV前C区突变株的流行率居全国中等水平,广西南部、北部是否存在主要突变类型不同值得进一步研究.
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福建省慢性HBV感染者HBV基因S区、基本核心启动子区和前C区基因变异特征分析
为研究福建省慢性HBV感染者HBV基因多样性及变异规律,了解该人群HBV-DNA的病毒学特征.收集慢性HBV感染者血清标本,通过巢式PCR法扩增其HBV基因序列,比对NCBI数据库中标准基因型序列,分析HBV基因S区,基本核心启动子区(BCP)及前C区的序列变异情况,并对这些变异可能造成的病毒抗原表达,疫苗逃逸,患者病症改变等情况进行探讨.终成功扩增82例HBV全长基因序列,其中B基因型56例,C基因型26例.基因组特定功能区序列分析发现慢性HBV感染者HBV基因在S区(23.2％)、BCP区(61.0％)和前C区(29.3％)均出现了不同程度的变异.其中主蛋白(HBsAg)主要抗原决定簇a决定簇45.8％位点出现了变异,这些变异位点中包括与肝炎重症化及免疫逃逸密切相关的位点(aa126、aa129、aa145等).位点G1896A(19.5％),G1764A(11.0％)和A1762T(9.8％)依然是BCP/前C区的主要突变位点.而位点A1752G(25.6％)高突变率的出现在BCP区应引起关注.此外位点G1764A(x2=5.742,P=0.030)、A1896G(x2=14.392,P=0.000)以及A1762T/G1764A(x2=7.289,P=0.012)的突变更容易发生在HBeAg阴性的样品中;而位点A1846T(x2=11.882,P=0.003)、A1762T(x2 =6.561,P=0.038)和A1896G(x2=6.958,P=0.030)的突变与HBV-DNA的病毒载量存在一定相关性.总之,福建省慢性HBV感染者在HBV不同基因功能区域均存在不同程度的变异,一些与HBeAg表达情况、HBV-DNA载量、疫苗免疫逃避及肝细胞癌发生具有相关联的变异位点已经出现,BCP区A1752G位点的高频率出现应值得关注,对于这些变异位点的患者应加强监测.
关键词： 乙型肝炎病毒(HBV) 基因变异 基本核心启动子(BCP) 前C区 -
HBV慢性感染者前C/BCP区变异特点及与疾病发展关系分析
目的:探讨慢性HBV感染者前C/BCP区突变与血清HBeAg、HBsAg、DNA、甲胎蛋白(AFP)及肝硬度值(LSM)的关系及对疾病进展的预测性.方法:收集101例未经抗病毒治疗的慢性HBV感染者和47例乙型肝炎肝硬化(LC)患者清晨空腹血清.以免疫化学发光法检测血清HBeAg、HBsAg、AFP含量,采用磁珠法检测HBV-DNA,应用半巢式聚合酶链反应检测前C/BCP区基因突变,采用无创实时检测设备检测LSM.结果:101例慢性HBV感染者中,HBeAg阴性组的前C、BCP、前C+BCP区的变异率显著高于HBeAg阳性组(P<0.01).而LC组总变异率显著高于慢性HBV感染者HBeAg阴性组和HBeAg阳性组(P<0.01).148例HBV感染者中前C区、BCP区和前C+BCP变异株共87例,野生株61例,变异型组与野生型组比较,HBeAg含量减少(P<0.05),HBsAg含量增加(P<0.01),AFP水平和LSM值增高(P<0.05),DNA水平无统计学意义(P>0.05).结论:HBeAg阴性的慢性HBV感染患者中前C/BCP区变异率较高,变异可能导致更易发展为肝硬化,病情加重.监测HBeAg阴转的慢性HBV感染患者的DNA、HBsAg、AFP、LSM指标,对了解病情及体内病毒是否确实已被免疫清除有参考价值.
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儿童慢性乙型肝炎患者HBV前C/基本核心启动子区基因变异特点研究
目的 探讨慢性乙型肝炎(慢乙肝)患儿HBV前C(procore,PC)/基本核心启动子(basic core promoter,BCP)区的变异特点.方法 收集符合慢乙肝和肝硬化诊断标准的患儿血清166例.采用DNAout方法提取血清HBV DNA;巢式PCR方法扩增HBV PC/BCP区序列,PCR产物纯化后直接测序.分析HBVPC/BCP区相关位点变异情况.结果 166例患儿中,HBV B基因型的患儿占比20.83％,HBV C基因型的患儿占比79.17％.在感染HBV B基因型的患儿中,乙型肝炎(乙肝)肝硬化患儿与慢乙肝患儿的HBV DNA水平无明显差异,但前者G1899A位点突变率高于后者.在感染HBV C基因型的患儿中,与慢乙肝患儿相比,乙肝肝硬化患儿发生A1762T/G1764A、G1896A突变的比率明显升高且ALT水平较高.结论 HBV C基因型,ALT水平升高,发生A1762T/G1764A,G1896A位点变异的患儿,更容易发展为乙肝相关肝硬化.
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HBV基本核心启动子区和前C区变异与肝病进展的关系
乙型肝炎病毒( HBV)感染是我国严重的卫生健康问题,目前大约有1.7亿慢性HBV感染者,约占世界慢性HBV感染者的一半[1].HBV基因组结构为部分环状双链DNA,全长约3.2 kb,其核心启动子对于HBV的复制和形态构成发挥了关键性作用.核心启动子包含基本核心启动子区(basal core promoter,BCP)和上游调控区(upper regulatoryregion,URR),直接引导两种3.5 kb mRNA的转录,即前基因组mRNA( pregenomic RNA,pgRNA)和前CmRNA( precore mRNA,pre-C mRNA).BCP区位于基因组中核苷酸1742～1849位置,目前发现的变异主要有A1762T/G1764A双变异,C1653T、T1753C/A/G、C1766T/T1768A变异等,还发现有缺失和插入变异[2-3].A1762T/G1764A双变异是BCP区常见的,也是重要的变异,目前研究较多.
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HBV基本核心启动子和前C区变异的深度测序分析
目的：利用Ion Torrent PGM深度测序技术，探讨乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）阳性慢性乙型肝炎（CHB）患者乙型肝炎病毒（HBV）基本核心启动子和前C区突变特征。方法收集HBeAg阳性CHB患者血清样本25例，提取HBV DNA，采用巢式PCR方法扩增HBV基本核心启动子和前C区片段，构建深度测序文库，基于Ion Torrent PGM平台深度测序，生物信息学分析突变位点及其突变率；构建HBV基本核心启动子和前C区突变型和野生型参考质粒，作为深度测序质控品。结果在25例HBeAg阳性CHB患者HBV基本核心启动子和前C区检出流行率达20%的突变位点10个：G1746A、A1752G/T、T1753C/G、A1762T、G1764A、C1817G/A、T1825C/A、A1846T、G1896A、G1899A；G1746A和T1825C/A的流行率分别达92%和100%。突变位点在HBV B基因型和C基因型感染者的分布情况显示，A1752G/T和G1896A主要流行于B基因型感染者（63.6% vs 0.0%，χ2=12.374、P =0.0007；72.7% vs 28.6%，χ2=4.812、P =0.0472），A1762T和G1764A主要流行于C基因型感染者（27.3% vs 78.6%，χ2=6.579，P =0.0172）；C基因型感染者A1762T/G1764A突变率显著高于B基因型感染者，但差异无统计学意义（25.7%±28.4% vs 68.4%±42.7%，t =1.614、P =0.1326）。25例HBeAg阳性CHB患者中，32.0%患者仅有A1762T/G1764A突变，24.0%患者仅有G1896A突变，24.0%患者同时携带A1762T/G1764A和G1896A突变。结论深度测序分析可用于定量检测HBV基本核心启动子和前C区突变，为HBV突变研究的临床应用提供了技术平台。
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乙型肝炎病毒前C区及基本核心启动子区变异与基因型的临床相关性研究
目的：探讨乙型肝炎病毒前C区 G1896A突变、基本核心启动子区 A1762T、G1764A双突变与基因型、拉米夫定疗效的相关性。方法采用基因测序法对接受拉米夫定治疗的81例慢性重型乙型肝炎患者的血清标本进行前C区、基本核心启动子区（BCP区）、基因型及逆转录酶区（P区）检测，并对前 C区、BCP区的变异与基因型、逆转录酶区的变异进行相关性分析。结果81例慢性重型乙型肝炎患者送检标本中，68份标本可检出前 C区 G1896A变异或BCP区 A1762T／G1764A变异；单纯 G1896A突变31例，单纯 A1762T／G1764A突变24例，前C区联合BCP区变异13例；81例慢性重型乙型肝炎患者经拉米夫定治疗后，有45例发生变异，其中180M和204V变异株35例，204 I变异株10例；前C区变异在野生型组、变异型组中的检出率分别为38．9％、66．7％，两者差异有统计学意义（P＜0．05）；BCP区变异在野生型组、变异型组中的检出率分别为33．3％、55．6％，两者差异有统计学意义（P＜0．05）；在81例慢性重型乙型肝炎患者血清标本中，B基因型18例，C基因型63例；前C区变异在B、C基因型中的检出率分别为72．2％、33．3％，两者差异有统计学意义（P＜0．05）；BCP区变异在B、C基因型中的检出率分别为16．7％、54．0％，两者差异有统计学意义（P＜0．05）；G1896A突变在 B基因型感染者中检出率明显高于C基因型感染者；A1762T／G1764A双突变在B基因型感染者中检出率明显低于 C基因型感染者。结论发生 G1896A突变和 A1762T／G1764A突变的患者，在接受拉米夫定治疗后更易发生逆转录酶区的变异；G1896A突变易出现在B基因型感染者中，A1762T／G1764A突变易出现在C基因型感染者中。
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乙型肝炎病毒基本核心启动子和前C基因序列分析
目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子(BCP)区及前C(Pre C)区基因的变异情况,并且分析其发生频率、分布规律及其与临床病情的关系.方法 应用套式PCR扩增nt1660-1935的HBV DNA片段及PCR产物直接测序的方法检测BCP区及Pre-C区基因的变异情况.结果 130例乙型肝炎患者标本中,BCP区nt1762/nt1764发生双突变者75例(57.69%),Pre-C区nt1896发生突变者20例(15.38%),并且这两种突变在重型肝炎组(75.00%)及肝硬化组(72.22%)所占比例均明显高于慢性肝炎组(52.56%);此外,在BCP区及Pre-C/C区还发现了一些突变频率较高的其他突变位点(如nt1753,nt1766,nt1846,nt1899,nt1915),其中nt1753突变仅发生于有nt1762/1764双突变的患者,与重型肝炎及肝硬化的发生有一定关系;在BCP区有4处核苷酸突变共存者10例,其中重型肝炎组(12.50%)及肝硬化组(13.88%)所占比例明显高于慢性肝炎组(5.12%).结论 HBV BCP区nt1762/nt1764双突变和Pre-C区nt1896突变与肝炎的活动、重型化及肝硬化的发生有关;BCP区其他位点的突变共存对肝炎病情的进展也有重要影响.
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乙型肝炎患者血清HBV前C区A1896变异的检测分析
目的 了解HBsAg(+ )/HBcAb(+ )/HBeAb(+)的慢性乙肝病人血清乙肝病毒(HBV) DNA前C区A1896的变异情况及其与临床关系.方法 对所有试验对象检测肝功能指标,根据检测结果 分为丙氨酸氨基转移酶(ALT)升高组和ALT正常组.用聚合酶链反应杂交(PCR-ELISA)定量检测HBV-DNA并进一步检测HBV前C区A1896位点的变异情况.结果 38例患者中有18例HBV-DNA阳性,其中15例发生A1896位点变异,变异率为83.3％ (15/18).ALT升高组的18例中,血清HBV-DNA阳性13倒,阳性率72.2％,平均浓度为9.62 × 106( 1.10×103 ～1.09× 108)拷贝/ml,A1896变异13例,变异率为100％( 13/13).ALT正常组的20例中,HBV-DNA阳性5例,阳性率25.00％,平均浓度2.55×104(3.28 ×103 ～4.61 ×104)拷贝/ml.A1896变异2例,变异率为40％ (2/5).两组比较无论在HBV-DNA阳性率,还是A1896位变异率都具有统计学差异(P＜0.05).结论 HB8Ag(+ )/HBcAb(+ )/HBeAb(+)的慢性乙肝患者存在较高的A1896变异率,ALT升高组HBV-DNA阳性率和变异率均高于ALT正常组(P＜0.05),提示HBV A1896位点变异与肝脏病变活动加重和ALT升高有关.
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乙肝肝硬化患者HBV前C区和基本核心基因启动子序列分析
用套式PCR(nPCR)对35例肝硬化患者血清HBV前C区和基本核心基因启动子(BCP)进行扩增,阳性者用直接测序法进行序列分析.结果23例HBV DNA阳性,阳性率为65.7%(23/35),无正常序列标本,与e抗原产生有关的突变:nt1762、1764双突变(A→T、G→A),占73.9%(17/23);nt1896点突变(G→A),导致终止密码产生,占21.7%(5/23);nt1858点突变(T→C),占21.7%,其中标本417、426、430同时在nt 1856发生点突变(C→T).其它的突变有nt1799点突变(C→G),占47.8%(11/23),为无义突变;有6例在nt1846发生点突变A→T,4例nt1802-1804发生突变(TTC→CGT);4例nt1752位点突变(A→G);标本432在nt1751插入TG导致移码突变,并在nt1774-1874发生缺失突变.说明HBV BCP和前C突变株在肝硬化患者中很常见,提示这些突变与肝硬化的发生有关.
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乙肝病毒前C区变异与其真核表达的研究进展
:乙型肝炎病毒(HBV)变异与乙型肝炎病情的发展、对该疾病病情的监测等关系密切.其中,HBV前C区基因变异可使HBeAg产生异常的表达,并对HBV基因组的复制也有一定的影响.现就对HBV前C区基因常见变异及其生物学意义,及其真核表达模型构建相关因素等方面进行综述.
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乙型肝炎病毒前C区1896、基本C区启动子区1762/1764变异对拉米夫定抗病毒疗效的影响及其临床意义
目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)前C区G1896A变异和基本C区启动子(BCP)区A1762T/G1764A双变异对拉米夫定(LAM)抗病毒疗效的影响及其临床意义.方法 收集上海及其周边地区34例慢性乙型肝炎患者,单用LAM或LAM+聚乙二醇干扰素α-2a进行抗病毒治疗共48周,应用Trugene HBV genotyping试剂盒测定分析治疗前(0周)、治疗过程中(24周)、治疗结束时(48周)及随访结束时(72周)RT区YMDD变异;采用HBV基因多态性检测芯片试剂盒测定前C区1896、BCP区1762/1764位点的变异情况.结果 在治疗前有9例患者检测出前C区G1896A变异,均为HBV e抗原(HBeAg)阴性慢性乙型肝炎患者;9例前C区G1896A变异患者中7例治疗应答(77.8%,7/9),BCP区A1762T/G1764A变异在治疗应答者与无应答者中差异无统计学意义;3例患者分别在治疗24和48周时检测到YMDD变异,对治疗均无应答.结论慢性乙型肝炎患者治疗前血清HBV DNA变异状态可能影响LAM抗病毒治疗应答及YMDD耐药变异株的复制能力.
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5例HBV前C区1896位点和／或BCP1762、1764位点变异对聚乙二醇干扰素α2a早期应答的影响
目的：探讨 HBV 前 C 区1896位点和／或 BCP1762、1764位点变异对聚乙二醇干扰素α2a 早期应答的影响。方法选择5例 HBV PC1896和／或 BCP1762、1764位点发生变异的慢性乙型肝炎患者，使用聚乙二醇干扰素α2a 和／或核苷酸类似物抗病毒治疗，观察患者治疗12周、24周、48周时 HBsAg、HBeAg、HBV DNA、ALT 的变化。结果5例患者使用聚乙 二 醇 干 扰 素α2a 和／或核苷酸类似物抗病毒治疗后12周、24周 均 发 生 了 应 答。结论 HBV PC1896和／或BCP1762、1764位点发生变异作为亚洲人群聚乙二醇干扰素α2a 治疗取得早期应答的预测因素。
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孕妇中乙型肝炎病毒前C区和核心启动子区热点变异研究
目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)携带产妇体内HBV前C区和核心启动子(CP)区热点变异情况.方法 82例无症状慢性HBV携带临产孕妇采用HBV核酸扩增荧光定量检测试剂盒抽提孕妇血清HBV DNA,血清HBsAg、HBeAg采用EIA法检测,半巢式PCR法扩增产妇HBV前C区、CP区核苷酸片段,ABI 3730型DNA自动荧光测序仪对PCR产物直接测序.结果 82例无症状HBV携带临产孕妇中HBsAg单阳性52例,HBsAg、HBeAg双阳性30例;单阳性孕妇中1896G→A变异的检出率为21.2%(11/52),仅测到1例双阳性孕妇存在1896G→A变异,1899G→A变异仅发生在1例单阳性孕妇,且与1896G→A变异连锁出现.1762A→T/1764G→A变异总是连锁出现,且仅发生于单阳性孕妇,单阳性孕妇中双变异的检出率为17.3%(9/52).结论 HBV前C区、CP区1896G→A及1762A→T/1764G→A热点变异在无症状HBV携带单阳性孕妇中有较高的检出率,HBV前C区和核心启动子区的热点变异可能与肝损伤的严重程度无关.
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乙型肝炎病毒YMDD联合前C变异及其临床意义
目的研究拉米夫定治疗过程中乙型肝炎病毒(HBV)前C区、P区YMDD基序变异及其对疗效的影响.方法对5例拉米夫定(100 mg/d)治疗过程中HBeAg血清转换而HBV DNA仍阳性的慢性乙型肝炎患者,采用聚合酶链反应(PCR)产物直接测序方法分析HBV前C、P区的基因序列.结果 5例患者前C区均发现有G1896A变异,其中3例HBeAg血清转换前未发现此变异,2例已有此变异;同时5例患者在拉米夫定治疗后检测出YMDD变异,变异类型均为M552I,其中有1例在出现M552I变异40周后变为M552V变异,有2例M552I联合L528M变异;5例患者中有1例治疗无反应,另4例在治疗过程中HBV DNA突发.结论拉米夫定治疗过程中YMDD变异的出现可导致HBV DNA突发,而前C区G1896A变异可致HBeAg阴转,因此在治疗过程中出现HBeAg血清转换后需结合HBV DNA检测,排除前C区变异的可能.
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反向杂交检测肝癌相关乙型肝炎病毒前C区突变方法的建立和应用
背景与目的：日益增多的研究表明，乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)DNA前C区G1896A和G1899A突变是肝癌发生的危险因素。本研究旨在建立简单、快速、灵敏和准确的检测HBV前C区突变的反向杂交方法，并应用于检测江苏省启东地区HBV DNA前C区突变与肝癌发生的关系。方法：设计并合成HBV DNA前C区1896和1899位点的特异性探针，通过优化条件建立特异、敏感的杂交体系，并与直接测序检测结果进行比较。将该方法应用于检测启东100例肝癌和100例慢性HBV携带者(对照组)，分析HBV DNA前C区突变与肝癌的关系。结果：反向杂交对血清样本的低检测下限为HBV DNA 103 copy/mL，检测混合感染时比直接测序更占优势，混合株中10％以上的突变株均可被检测。启东地区HBV DNA前C区G1899A突变与肝癌高发具有相关性(P=0.000, OR=4.846, 95%CI：2.240～10.485)，而G1896A突变未见其相关性。结论：反向杂交检测HBV DNA前C区突变方便、快速、准确，可有效监控肝癌的发生，适合临床大规模推广应用。
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乙型肝炎病毒携带产妇前C区和核心启动子区热点变异及其与宫内感染的关系
目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)携带产妇前C区和核心启动子(CP)区热点变异情况及与宫内感染的关系.方法 采用HBV核酸扩增荧光定量检测试剂盒抽提99对无症状乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性携带临产孕妇及其新生儿血清HBV DNA,EIA法检测血清HBsAg、HBeAg,半巢式PCR法扩增产妇HBV前C区、CP区核苷酸片断,ABI3730型DNA自动荧光测序仪对PCR产物直接测序.结果 82例(单阳性52例,双阳性30例)孕妇HBV前C区和CP区核苷酸片断扩增测序成功.无症状HBV携带单阳性孕妇中1896G→A变异的检出率为21.2％(11/52,仅测到1例双阳性孕妇存在1896G→A变异);1899G→A变异仅发生在1例单阳性孕妇,且与1896G→A变异连锁出现.1762A→T/1764C →A变异总是连锁出现,且仅发生于单阳性孕妇,单阳性孕妇中双变异的检出率为17.3％(9/52).1896G→A变异和无该点变异孕妇所生新生儿宫内感染率分别为25.0％(3/12)和37.1％(26/70) (P＞0.05);1762A→T/1764GA变异和无该点变异的单阳性孕妇所生新生儿宫内感染率分别为22.2％(2/9)和37.2％(16/43)(P＞0.05).结论 HBV前C区和CP区1896G→A及1762A→T/1764G →A热点变异在无症状HBV携带单阳性孕妇中有较高的检出率,而在HBsAg、HBeAg双阳性孕妇中的检出率较低.HBV前C区和C启动子区热点变异对宫内感染率无显著影响.
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HBV前-C区突变研究进展
许多慢性乙型肝炎患者感染的乙型肝炎病毒(HBV)是前-C区突变株,虽然这些患者血清中抗-HBe阳性,但体内病毒仍然在持续地复制.HBV前-C区突变经常发生在nt1896、1858和1899.如果感染的是HBV前-C区突变株,则可能导致HBeAg阴性患者的病情加重.拉米夫定、干扰素以及其他一些因素可以诱导HBV前-C区突变的发生.
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慢性乙型肝炎病毒感染者前C区变异及HBV DNA载量的临床意义
目的探讨慢性HBV感染者前C区A1896变异及HBV DNA载量与肝炎病情进展的关系.方法检测116例慢性HBV感染者前C区A1896变异,比较不同临床类型前C区A1896变异阳性率,再根据前C区变异不同,比较不同临床类型HBV DNA含量的差异.结果不同临床类型前C区变异株检出率差异无统计学意义(x2=2.863,P=0.581).在慢性HBV携带者中,变异阳性率同时伴有较高水平的HBVDNA量(P=0.003),其余各临床类型均未见明显差异;但变异情况相同的条件下,HBV DNA载量似随着病情的加重呈降低趋势.结论影响肝炎病情进展的因素错综复杂,前C区A1896变异可能不起作用,但前C区A1896变异可能是影响HBV DNA复制的一个因素.
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慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者乙型肝炎病毒前C/CP区变异研究进展
慢加急性肝衰竭(ACLF)是我国肝衰竭的主要类型,其病情发展迅速、预后不良、病死率较高.在我国,乙型肝炎病毒(HBV)感染是导致ACLF的主要病因,其中HBV前C(PC)/核心启动子(CP)区基因变异与ACLF的发生密切相关.本文重点介绍HBV PC/CP区基本结构和功能、PC/CP区变异后生物学特性的改变、ACLF的免疫病理损伤机制、PC/CP区变异与ACLF疾病进展的临床意义等方面的研究进展.
