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婴幼儿配方奶粉中的反式脂肪酸评价
近年来,在媒体的宣传下,人们几乎谈反式脂肪而色变。反式脂肪酸(Trans-Fatty Acids,以下简称TFA)是碳链上存在一个以上非共轭反式双键不饱和脂肪酸及其所有异构体的总称,是人体非必需脂肪酸,空间构象接近直线型(如图1),其异构体顺式脂肪酸(Cis-Fatty Acids)中氢原子在碳链同侧,空间构象接近U型。TFA有两个来源:天然来源和工业生产过程来源,经大量研究证实,过量摄入工业化来源的TFA有增加罹患心血管疾病的风险,而日常膳食摄入的天然来源TFA则没有危害,且有研究表明它对人体健康有益。
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卡拉胶海藻多糖硫酸酯化技术研究
多糖的抗病毒活性与多糖的分子量大小、硫酸根含量以及空间构象有较大联系,本文对微波辐射制备不同分子量卡拉胶多糖及硫酸酯化修饰技术进行了研究.1材料与方法1.1材料标准多糖(Dextran Standard 270000、80000、12000、5000、1000和DextranBlue),卡拉胶,真空反应器,纳滤系统,凝胶色谱柱.1.2实验方法1.2.1微波辐射制备卡拉胶多糖取一定量卡拉胶加水搅匀,80℃保温15min,使其充分溶解:然后加入一定量H2SO4,750W微波处理10~30min;料液先用碱调节至pH4.5,冷却后调至pH6.0.
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气相色谱分析法测定奶油中c9,t11-共轭亚油酸的含量
共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)(以下简称CLA)是一类共轭双键位置在9和11或10和12的亚油酸(linoleic acid, LA)同分异构体的混合物,每个双键可以成顺式或反式构型[1],因而CLA基本的空间构象是形成8种同分异构体[2].国外的大量研究表明,CLA具有很多重要的生物活性作用[3~10],如CLA具有抑癌作用、降低胆固醇和抗动脉粥样硬化作用、抗氧化作用,能有效地防止免疫刺激的分解代谢作用等,而c9,t11-CLA被认为是生物活性作用强的共轭亚油酸异构体.目前,国内在CLA抑癌作用方面的研究已取得了很大的进展,但是关于食物中CLA含量的测定这一领域尚属空白.我们采用气相色谱内标法对奶油中c9,t11-CLA的含量进行定量测定.
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T4噬菌体表面展示技术的研究进展
噬菌体表面展示技术(phage display)是由Smith于1985年首先建立起来的一种新的生物技术[1],它能将表达的外源多肽或蛋白以融合蛋白的形式展示在噬菌体的表面,保持相对独立的空间构象和原有的生物活性[2].常用的噬菌体表面展示系统主要有丝状噬菌体、λ噬菌体及T4噬菌体展示系统等.虽然它们都具有噬菌体展示系统的优点,但对于丝状噬菌体来说,它不能展示那些难以分泌的肽和蛋白质,而且它的N端可融合外源多肽的容量有限,较大蛋白的融合会造成空间障碍,影响噬菌体的装配,使其失去感染力.而对于λ噬菌体,大分子蛋白的融合会抑制噬菌体的组装,使其生长受到影响,因此这两种噬菌体更适用于构建短肽库和cDNA表达文库[3],而不适于构建重组疫苗和表达分子量大具有完整结构域的蛋白质[4,5].
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一株特殊抗原性乙脑毒株的分子生物学特征研究
目的 对一株抗原性特殊的乙脑毒株进行生物学和分子生物学特征研究,以找出特殊抗原性的分子生物学基础. 方法 通过空斑减少交叉中和试验对乙脑病毒KT株的抗原性进行比较.提取KT株RNA,逆转录后扩增其E基因片段并测序,通过Blast与GenBank中所有乙脑病毒基因进行核苷酸和氨基酸序列比对,利用PdbViewer对KT株关键位点突变后的空间构象进行预测比对. 结果 交叉中和试验显示,KT株免疫血清对其他株乙脑病毒的中和作用较低,而其他乙脑病毒免疫血清对KT株的中和作用也较低.对E基因序列进行比对,KT株属于基因Ⅲ型,氨基酸序列上只在E62位存在一个独特的位点突变:组氨酸(H)→精氨酸(R).空间构象显示,该位点位于结构域Ⅰ与结构域Ⅱ的连接交界处,当发生由组氨酸(H)到精氨酸(R)突变时,其与周围氨基酸形成的氢键数量和长度发生改变,空间构象也随之发生改变. 结论 乙脑病毒KT株的抗原性与其他乙脑病毒株存在较大差异,E62位组氨酸(H)→精氨酸(R)的突变是导致其抗原性差异的主要原因.
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丙型肝炎病毒E2蛋白HVR1在体液免疫应答中的作用
丙型肝炎病毒(HCV)感染是肝硬化、肝癌的高危险因素,目前尚无HCV疫苗上市.HCV包膜E2蛋白能诱导机体产生中和抗体,是重要的候选疫苗成分.E2蛋白氨基末端由27个氨基酸残基组成的高变区1(hypervariable region 1,HVR1)含有多个线性中和抗体表位,变异频率极高[1],增加了HCV疫苗研制的难度.近年发现,除了HVR1含有中和抗体表位外,E2蛋白还存在其他的保守空间构象和线性中和抗体表位[2].
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肝素促进创面愈合作用的研究进展
烧伤是造成皮肤局部损伤和全身多个器官系统影响的复杂的创伤,组织烧伤后形成三个同心圆区带,即凝固带、淤滞带和充血带.凝固带为烧伤的坏死组织,充血带表现为炎性细胞浸润.而淤滞带为受损的间生态组织,其病理生理改变为血流缓慢,血管内红细胞堆积,内皮细胞肿胀,细胞功能受损.如果能迅速改善淤滞带的血运,可使间生态组织恢复生机.如果淤滞带组织中血管逐渐被形成的血栓堵塞,转化为凝固带,创面加深,Ⅲ度创面扩大,就表现出烧伤创面早期的进行性损害过程.临床上常应用肝素(heparin,HP)催化抗凝血酶Ⅲ以及凝血因子Ⅹa、Ⅸa、Ⅺa、Ⅻa,从而发挥抗凝和抗栓作用.HP与抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)相互作用,可以改变AT-Ⅲ的三维空间构象,有效地抑制凝血过程[1].
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热休克蛋白27与口腔鳞状细胞癌相关性研究现状
热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是一个进化上高度保守的蛋白家族,广泛存在于原核和真核细胞中.其产生可被多种因素诱导,包括高温、缺氧、重金属、氧化剂、乙醇、蛋白变性等.根据分子量的大小可以将热休克蛋白分为五大家族:HSP110、HSP90、HSP70、HSP60及小分子量HSP(12 000 ~ 43 000),如HSP27.HSP生物学功能主要有在应激状态下维持细胞必需的蛋白质空间构象,维护细胞生命;参与蛋白质的跨膜运输、折叠;影响细胞骨架的形成;参与翻译的调节;维持细胞内氧化还原的稳态;抵抗细胞的程序化死亡等.HSP本身并不能直接发挥作用,而是通过影响或调节其他的功能性蛋白来间接发挥作用,因此又称分子伴侣.近年来关于HSP27与恶性肿瘤关系的研究引人注目,本文对HSP27与口腔癌的关系作一综述.
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反式脂肪酸与心血管病的关系
脂肪酸是构成脂肪的主要成分,可分为饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸,后者是指在脂肪酸链上至少有一个碳碳双键的不饱和结构.如果双键上两个与碳原子结合的氢原子是在碳链的同侧,空间构象呈弯曲状,则称为顺式不饱和脂肪酸,这也是自然界绝大多数不饱和脂肪酸的存在构型.反之,如果双键上两个与碳原子结合的氢原子分别在碳链的两侧,空间构象呈线性,则称为反式不饱和脂肪酸.
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多不饱和脂肪酸对小鼠血脂和免疫功能的影响
膳食脂肪酸包括饱和脂肪酸(saturated fatty acids,SFA,S)、单不饱和脂肪酸(monounsaturated fatty acids,MUFA,M)和多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFA,P),而PUFA又包括n-6和n-3PUFA.大量研究表明,膳食脂肪酸的结构如碳链长度、饱和程度、空间构象及衍生物的不同对血脂水平、细胞膜功能及细胞因子等均有不同作用,从而对心血管疾病、动脉粥样硬化以及机体的免疫功能产生影响.膳食脂肪酸构成比,尤其是n-6与n-3比值对血脂代谢及免疫功能有不同影响.也有从脂肪酸的构成对血脂代谢的影响进行了探讨[1~3].目前关于n-6/n-3的推荐比值也存在较大的差异.本研究以膳食正常脂肪摄入量为前提,模拟我国居民膳食脂肪酸构成比现状(SFA:MUFA:PUFA为1∶1.7∶1.2)[4,5],对不同n-6/n-3比值的膳食对小鼠血脂代谢及免疫功能的影响进行了实验研究.
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抗原表位预测的免疫信息学方法研究进展
表位是抗原分子中由特殊的化学基团组成的结构,根据与抗原受体结合的不同可分为B细胞表位和T细胞表位.B细胞表位是抗原中可被B细胞抗原受体或抗体特异性识别并结合的线性片段或空间构象性结构.B细胞表位只有很少的一部分是线性表位,而绝大部分(约90%)是构象性表位.
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蛋白质结构"教" 与"学"的体会
蛋白质的分子抽象而难于理解,而学生学习生物化学首先接触的就是这部分内容,若不能真正理会其知识点,学生就失去对生物化学的学习兴趣,给"教"与"学"带来不便.蛋白质的分子结构分成一级、二级、三级、四级4个层次,后三者统称为高级结构或空间构象.一级结构是高级结构的基础,高级结构的形成依赖于一级结构.我们在蛋白质分子一、二级结构教学方面略有体会,愿与各位同仁进行交流.
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血管基膜衍生多功能肽基因克隆、表达及空间构象分析
目的:构建血管基膜衍生多功能肽克隆和原核表达载体,并对血管基膜衍生多功能肽氨基酸序列进行空间结构分析预测.方法:用人源性IgG3上游铰链区连接肽连接的Tumstatin的2个功能区片段,即血管基膜衍生多功能肽(VBM-DMP),利用合成的3条长引物片段,进行PCR扩增.克隆到pUC19载体,酶切和测序鉴定.亚克隆构建原核表达载体pGEX-4T-1-VBMDMP,IPTG诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定表达产物.用Glutathione Sepharose4B层析柱进行了亲和层析鉴定.将VBMDMP序列输入计算机,利用Antheprot软件分析.结果:血管基膜衍生多功能肽(VBMDMP)基因经限制性内切酶酶切和测序鉴定,其大小和核苷酸序列正确,与设计完全一致.获得了原核表达融合蛋白GST-VBMDMP.Antheprot分析显示,人IgG3上游铰链区连接后的Tumstatin的2个功能区域能自由伸展.结论:成功构建了血管基膜衍生多功能肽克隆和原核表达载体,并对其进行了空间结构分析.
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B细胞表位预测的研究进展
表位,又称抗原决定簇,是指免疫应答中被特异的效应分子或T、B淋巴细胞识别的抗原分子的特定结构位点.B细胞表位是指抗原中可被B细胞抗原受体(BCR)或抗体特异性识别并相互结合的线性片段或空间构象型结构.B细胞表位的预测对免疫原性多肽和新型疫苗分子的设计都有很大的帮助,并有利于诊断试剂的开发以及临床疾病的诊断.
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异常朊蛋白检测研究进展
Prion病是一组致死性神经变性疾病.其病因主要是在人或动物脑组织内出现并沉积大量异常的Prion蛋白,而导致神经细胞死亡.临床表现为迅速进展的痴呆.诊断Prion病的金标准是检测到异常朊蛋白.但是,因为正常人体内也存在朊蛋白(normal cellular prion protein, PrPsc),与致病的异常朊蛋白(PrPSc或PrPCJD)相比,仅在空间构象上不同[1-2],所以异常朊蛋白的检测并不容易.近10年来,异常朊蛋白的检测水平不断提高,本文仅就此方面简述之,希望对提高朊蛋白病诊断水平和杜绝医源性传播有所帮助.
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三维重建成像技术在肝胆外科中的应用
肝脏管道结构解剖研究是肝脏外科学发展的基础,其进展影响着肝脏外科的发展.但传统的肝脏解剖学研究由于肝脏管道塌陷,肝脏本身的立体和空间构象的改变,获得的管道数据与活体肝脏管道结构不符.
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一个ALS家系突变SOD1的表达及其空间构象的分析
目的:对一个肌萎缩侧索硬化症(Amyotrophic lateral sclerosis,ALS)家系的突变铜、锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide dismutase,SOD1)基因进行研究,了解其与野生型SOD1在不同部位神经组织中表达的差异性.采用软件进行模建,对突变SOD1蛋白质的二、三级结构进行预测和分析.方法:采用Northern杂交对突变SOD1 mRNA进行分析;克隆出突变SOD1 cDNA和野生型SOD1 cDNA,采用含有人多种神经组织mRNA的预制Northern杂交膜,了解突变SOD1与野生型SOD1在不同部位神经组织中表达的差异性;采用软件对突变蛋白质的二、三级结构进行模建分析.结果:Northern blot分析证实2号外显子mRNA缩短.野生型和突变的SOD1基因具有相似的组织表达差异性,在大脑皮层表达高,在脊髓表达弱.突变后的SOD1蛋白质二级、三级结构与野生型SOD1基本相似.结论:突变后SOD1酶活性的功能下降可能是引起该家系发病的原因,SOD1基因在不同神经组织表达的差异性,可能是该家系ALS患者临床表现以下运动神经元损害为主的原因.
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EGFR-L861Q突变对TKI类药物敏感性预测分析及病例报道
背景与目的对于伴表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)敏感型突变的晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者,小分子酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor, TKI)的显著疗效众所周知。但对于晚期NSCLC伴EGFR-L861Q突变的患者,TKIs治疗是否敏感,治疗时机和治疗方案该如何选择,至今尚无确切的循证医学证据。本研究旨在通过分析EGFR-L861Q与敏感突变型EGFR-L858R及野生型EGFR蛋白质空间构象的差异,结合临床实例探讨晚期NSCLC伴EGFR-L861Q突变患者的佳治疗方案。方法利用同源模建重建野生型EGFR、敏感突变型EGFR-L858R及突变型EGFR-L861Q蛋白质的空间构象,并分析这三种空间构象之间的差异。结果敏感突变型EGFR-L858R与野生型EGFR蛋白质的空间构象差异显著。突变型EGFR-L861Q与敏感突变型EGFR-L858R及野生型EGFR的蛋白质空间构象均不完全相同。在临床中,我们总结了1例晚期NSCLC伴EGFR-L861Q突变的患者,应用化疗作为一线治疗,当肿瘤不再缩小时,换用TKIs维持治疗,复查肺部计算机断层扫描(computed tomography, CT),肿瘤较前相比进一步缩小。结论通过对突变型EGFR-L861Q的蛋白质空间构象进行分析比对,结合临床实例,对于晚期NSCLC伴EGFR-L861Q突变的患者,一线化疗后达到疾病控制时,换用TKIs维持治疗,可能获得令人满意的临床疗效。
关键词: 肺肿瘤 EGFR-L861Q突变 空间构象 酪氨酸激酶抑制剂 -
人促甲状腺激素受体胞外段的体外重组、蛋白高效表达及其与构象功能的关系
关键词: TSH受体(TSHR) 基因重组 空间构象 自身免疫性甲状腺病