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下调G3BP对抑制肿瘤细胞迁移能力的研究
目的：探讨利用 siRNA和靶向 G3BP的多肽药物下调 G3BP后对多种肿瘤细胞迁移能力的影响。方法采用人纤维肉瘤 HT1080细胞、乳腺癌 MCF-7细胞以及人非小细胞肺癌 H1299细胞，应用 siRNA特异性干扰 G3BP后，通过划痕实验观察其对肿瘤细胞迁移能力的影响；用多肽药物 GAP161作用于肿瘤细胞后，利用划痕实验以及 Transwell迁移实验观察其对肿瘤细胞迁移能力的影响；在 MCF-7细胞中高表达 G3BP1，在 MDA-MB-231细胞中用 siRNA下调 G3BP1后，采用人全基因芯片分析 G3BP1高表达和低表达后的基因表达谱，并进行信号通路分析。结果 siRNA特异性下敲 G3BP1和 G3BP2后，HT1080、MCF-7和 H1299细胞的迁移能力显著降低。利用靶向 G3BP的特异性多肽药物 GAP161作用于多种肿瘤细胞后，肿瘤细胞的迁移能力显著下调。全基因组芯片分析表明：多个基因同时在 G3BP1高表达和低表达组中发生变化，该变化与细胞迁移相关的细胞黏附、整合素、MAPK 等信号通路有关。结论 G3BP下调后能够显著降低肿瘤细胞的迁移能力。靶向 G3BP的多肽药物具有显著抑制肿瘤细胞迁移的作用。下调或者高表达 G3BP后可通过下调或者上调多种与细胞黏附、整合素、MAPK 等信号通路相关基因发挥作用。
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胰岛素抵抗和多囊卵巢综合征
多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)是育龄期妇女不孕的常见原因,发病率为6%～8%,临床表现为高雄激素血症或雄激素过多症伴排卵过少.国外研究显示PCOS患者胰岛素抵抗(IR)发生率为50%～70%,提示IR在PCOS的发病中扮演了重要角色[1].本文总结就胰岛素抵抗与多囊卵巢综合征的关系进行综述.
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CD40/CD40L信号系统与缺血性冠状动脉疾病的关系
在过去10年里,作为炎症的参与者CD40/CD40L信号系统,引起医学界广泛关注,尤其在动脉粥样硬化的形成、进展及斑块的不稳定病理过程中起着重要作用.急性冠状动脉综合征的发生主要是粥样斑块的破裂或糜烂继发血小板活化,血栓形成所致.可溶性CD40L水平升高预示着心血管不良事件的发生增加.
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吡格列酮对载脂蛋白E-/-小鼠动脉粥样硬化中Toll样受体4/丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响
目的：探讨吡格列酮对载脂蛋白E( ApoE)-/-小鼠主动脉粥样硬化病变中Toll样受体4/丝裂原活化蛋白激酶(TLR4/MAPKs)信号通路的影响。方法取8只10周龄雄性C3H小鼠作为对照组,用普通饲料喂养；另取24只同周龄雄性ApoE-/-小鼠用高脂饲料喂养,复制动脉粥样硬化模型成功后按随机数表法分成3组：模型组、吡格列酮低剂量(5 mg·kg-1·d-1)组和高剂量(10 mg·kg-1·d-1)组各8只。干预4周后,HE染色观察主动脉粥样硬化病变情况。应用Western Blot技术检测对照组和干预组动脉粥样硬化中丝裂原活化蛋白激酶ERK1/2、JNK1/2及p38MAPK磷酸化水平。结果与对照组比较,各组ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块中TLR4表达增强,其中ERK1/2与JNK磷酸化水平明显升高(均为P﹤0.05),但p38MAPK水平变化不明显(均为P＞0.05)；与模型组比较,吡咯列酮低剂量组和高剂量组小鼠动脉粥样硬化斑块中ERK1/2与JNK磷酸化水平均降低( ERK1/2：吡咯列酮低剂量组比模型组：0.5037±0.0438比0.8800±0.0436,吡咯列酮高剂量组比模型组：0.3843±0.0236比0.8800±0.0436；JNK：吡咯列酮低剂量组比模型组：0.5037±0.0437比0.7900±0.0308,吡咯列酮高剂量组比模型组：0.3843±0.0237比0.7900±0.0308,均为P﹤0.05)。结论吡格列酮可能通过影响TLR4/MAPKs/ERK1/2与TLR4/MAPKs/JNK信号通路,延缓动脉粥样硬化的发生与发展。
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丁基苯酞通过p38丝裂原活化蛋白激酶通路拮抗β淀粉样蛋白致皮质神经元凋亡
目的 研究丁基苯酞是否可以通过p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路,抑制β淀粉样蛋白(Aβ) 1-42致原代培养皮质神经元凋亡.方法 将原代培养的皮质神经元随机分为对照组、Aβ1-42干预组(干预组)、Aβ1-42+丁基苯酞0.1 μmol/L组(A组)、Aβ1-42+丁基苯酞1 μmol/L组(B组)、Aβ1-42+丁基苯酞10 μmol/L组(C组).Aβ1-42作用24 h后,采用免疫荧光法染色观察细胞形态及凋亡比率,Western blot定量检测总p38、p-p38、caspase-3蛋白表达水平.结果 免疫荧光双染显示,对照组神经元细胞体边缘光滑,突触长,细胞核完整;干预组细胞边缘塌陷,突触缩短,细胞核碎裂.与对照组比较,干预组、A、B、C组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),干预组p-p38和caspase-3蛋白表达明显增加(P<0.05);与干预组比较,A、B、C组caspase-3蛋白表达及B、C组p-p38蛋白表达明显减少(P<0.05).结论 丁基苯酞可以通过p38蛋白磷酸化拮抗Aβ1-42致原代培养皮质神经元凋亡.
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p38信号通路与缺血性脑卒中
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)广泛存在于各种动物细胞中,是细胞内信号传递的交汇点,可将细胞外信息传递至细胞核,直接调节转录因子活性,调控基因表达.p38是MAPK信号通路的重要成员,在全身性炎性反应、休克、细胞迁移、细胞凋亡、心血管疾病等方面发挥着重要作用[1-2].近研究发现,p38信号通路与脑缺血性损伤有密切关系[3].本研究就p38信号通路,在脑缺血再灌注损伤中的作用机制作一综述.
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活血补肾方含药血清对人脐静脉内皮细胞增殖作用及对丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响
目的 用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为模型观察活血补肾含药血清对增殖作用及对p42/44丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响. 方法 噻唑蓝染色观察20％、10％、5％含药血清对HUVEC细胞的增殖作用.检测一氧化氮合酶(eNOS)活力和NO含量.反转录PCR法检测eNOSmRNA表达,免疫印迹法检测蛋变化. 结果 含药血清有效促进HUVEC细胞的增殖,经过24 h含药血清处理,含药血清呈现浓度依耐性促进HUVEC细胞增殖,增殖率分别为10.8％(t=6.82,P＜0.05)、14.7％(t=6.25,P＜0.05)、33.3％(t=12.16,P＜0.01).含药血清处理组eNOS活力增强,明显高于未含药血清;20％含药组NO含量与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);20％和10％含药对eNOS mRNA的表达有促进作用(P＜0.05).活血补肾方能提高P-p42／44蛋白表达水平(P＜0.01). 结论 补肾活血方促进内皮细胞的增殖,提高内皮细胞NO分泌,其机制是通过p42/44丝裂原活化蛋白激酶信号通路增加eNOS活力和mRNA的表达.
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白藜芦醇可通过抑制核因子κB和丝裂原活化蛋白激酶信号通路抗兔动脉粥样硬化
目的 探讨白藜芦醇对动脉粥样硬化兔血清中炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),以及核因子-κB(NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响,明确白藜芦醇抗动脉粥样硬化的机制.方法 将雄性纯种日本大耳白兔以完全随机区组法分为6组,即正常对照组(对照组,n=10),高脂模型组(高脂组,n=10),白藜芦醇低、中、高剂量组(n均为10),白藜芦醇预防组(预防组,n=10).酶联免疫分析(ELISA)法检测血清炎性指标IL-1 β、IL-6、TNF-α的表达水平,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测主动脉组织中NF-κB、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、细胞外调解激酶(ERK 1/2)和应激活化蛋白激酶(JNK)的蛋白表达水平.结果 高脂组IL-1β、IL-6、TNF-α浓度均显著高于对照组(P均＜0.05).白藜芦醇低、中、高剂量组及预防组IL-1β、IL-6、TNF-α浓度则均低于高脂组(P均＜0.01),且此作用呈剂量依赖性.此外,高脂组主动脉组织中NF-κB、p38MAPK、JNK、ERK1/2蛋白磷酸化水平均高于对照组(P均＜0.05).白藜芦醇低、中、高剂量组及预防组NF-κB、p38MAPK、JNK蛋白磷酸化水平则均低于高脂组(P均＜0.05),ERK1/2蛋白磷酸化水平与高脂组比较差异无统计学意义.结论 白藜芦醇可以降低动脉粥样硬化兔血清炎症因子水平,其作用机制可能与抑制NF-κB、MAPK信号通路的激活有关.
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BANCR对甲状腺乳头状癌TSHR表达调控的研究进展
目的：本文通过综述相关文献并分析甲状腺乳头状癌（ PTC ）发生发展过程中TSH／TSHR／cAMP和Ras／Raf／MEK／ERK（ MAPK通路）两条信号通路，探讨了BRAF激活的长链非编码RNA（BANCR）对PTC组织中促甲状腺激素受体（TSHR）表达调节表达调控的意义。 BANCR表达上调可能会使PTC组织中TSHR的表达降低，从而促进了PTC的发生发展，并可能影响患者预后。因此，明确BANCR对PTC组织TSHR表达调控的作用机制，有助于进一步明确PTC的发生机制，并可能会为PTC的临床诊断和治疗提供新的靶标。
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丝裂原活化蛋白激酶信号通路在乳腺癌中的作用机制
丝裂原活化蛋白激酶( mitogen-activated protein kinase, MAPK)信号通路是真核生物信号传递网络中的重要途径之一,在多种细胞过程中发挥关键性的作用,包括细胞的恶性转化、肿瘤的发生发展、肿瘤的耐药等方面。乳腺癌是女性群体中常见的恶性肿瘤。据估计,妇女的一生中,每8人就有1人会被诊断为乳腺癌,并且,其发病率呈逐年上升趋势[1]。乳腺癌是一类高度异质性的恶性肿瘤,根据免疫组织化学特征可分为：(1) ER阳性的肿瘤；(2) HER-2阳性的肿瘤；(3)ER、PR、HER-2受体均阴性的肿瘤。本文将MAPK信号通路在乳腺癌各亚型中的研究进展作一综述。
关键词： 乳腺肿瘤 MAP激酶信号系统 丝裂原激活蛋白激酶类 -
多发性硬化及EAE动物模型相关信号通路研究进展
多发性硬化（multiple sclerosis ，MS）是一种以中枢神经系统（central nervous system ，CNS）白质脱髓鞘为主要病理特点的慢性炎性自身免疫性疾病。CD4＋ T淋巴细胞介导的对自身髓鞘抗原产生的免疫应答为其可能的发病机制。目前公认小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis ， EAE）为研究MS的动物模型。目前关于MS的治疗尚缺乏有效方法，近年研究发现多种信号通路在MS／EAE中发挥调控作用，通过研究MS／EAE中的相关信号通路及相关通路靶点药物的干预效果，将对MS的治疗起到启示性作用。本文就有关M S／EA E相关信号通路的研究进展做一综述。
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左旋多巴活化NMDAR1/ERK1/2信号对单眼剥夺弱视大鼠视皮质神经细胞保护作用的研究
目的 探讨左旋多巴活化NMDA受体1(NMDAR1)/ERK1/2(丝裂原活化蛋白激酶)信号对单眼剥夺弱视大鼠视皮质神经细胞的保护作用.方法 实验研究.54只SD大鼠根据随机数字表分为9组:正常对照组、弱视模型(MD)组、低剂量左旋多巴治疗组、高剂量左旋多巴治疗(H-左旋多巴+MD)组、高剂量左旋多巴+MK801组、高剂量左旋多巴+PD98059组、MK801组、PD98059组、二甲基亚砜溶剂对照组,每组6只.通过右眼缝合制备弱视大鼠模型,左旋多巴灌胃治疗,MK801、PD98059通过侧脑室注射,免疫印迹法检测N-甲基-D-天冬氨酸受体(NR1)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-ERKI/2)、丝裂原活化蛋白激酶(ERK1/2)、神经生长因子(NGF)、即刻早期基因c-FOS的表达,Nissl染色检测神经元细胞形态学变化,核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口标记(TUNEL)法检测神经元细胞凋亡,免疫组织化学法检测神经元细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、NGF和c-FOS的表达.采用单因素或双因素方差分析联合LSD-t检验进行组间比较.结果 正常对照组小鼠神经元尼氏小体完整,形态清晰;MD组视皮质区神经元尼氏小体体积缩小,神经元丢失和核固缩.与对照组相比,MD组神经细胞凋亡显著增多(23.09±2.00、2.20±0.35,t=12.120,P=0.000),Caspase-3阳性细胞增多(22.70±1.50、3.30±0.54,t=12.120,P=0.000),NGF (0.31 ±0.04、0.74±0.09,t=7.674,P=0.000)和c-FOS (0.25±0.03、0.57±0.07,t=5.919,P=0.000)表达降低,NGF(8.30±0.82、35.18±2.01,t=12.370,P=0.0000)和c-FOS (10.84±1.02、35.68±2.55,t=9.056,P=0.0001)阳性细胞数减少,视皮质区NR1 (0.40±0.05、0.55±0.07,t=4.533,P=0.001)、p-ERK1/2(0.68±0.17、0.88±0.11,t=0.920,P=0.142)的表达降低;左旋多巴治疗后,神经细胞形态恢复正常,尼氏小体染色清晰;有效缓解神经细胞凋亡(13.07±1.47、23.09±2.00,t=8.698,P=0.000),减少Caspase-3阳性细胞率(17.05±1.11、22.70±1.50,t=3.019,P=0.015);NR1 (0.75±0.09、0.40±0.05,t=8.528,P=0.001)、p-ERK1/2(2.13±0.26、0.68±0.17,t=3.488,P=0.008)的表达显著升高;NGF(18.07±0.87、8.30±0.82,t=8.18,P=0.0000)和c-FOS(19.78±0.91、10.84±1.02,t=6.543,P=0.0001)阳性细胞率增加.MK-801或PD98059干预处理后,有效拮抗左旋多巴治疗作用.MK801、PD98059处理下调NR1(0.53±0.06、0.95±-0.12,t=5.647,P=0.005)及下游p-ERK1/2 (1.52±0.18,2.58±0.30,t=3.091,P=0.013)的表达,并进一步促进MD小鼠尼氏小体体积缩小、细胞核固缩、神经元凋亡、Caspase-3表达,并抑制NGF和c-FOS的表达;二甲基亚砜溶剂未见明显作用.结论 左旋多巴通过活化NMDA-ERK1/2 MAPK信号对大鼠视皮质神经元细胞的保护作用.
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RAS信号通路相关综合征的口腔颅颌面部特征
RAS信号通路相关综合征是由编码RAS-丝裂原激活蛋白激酶(RAS/mitogen-activated protein kinase,RAS/MAPK)信号通路的基因组突变而引起的一组综合征的统称.这些综合征包括努南综合征(Noonan syndrome,NS)、NS伴多发性雀斑(NS with multiple lentigines,NSML)、1型神经纤维瘤病(neurofibromatosis type 1,NF1)、科斯特罗综合征(Csotello syndrome,CS)、心-面-皮肤综合征(cardio-facio-cutaneous syndrome,CFC)、类1型神经纤维瘤病(NF1-like syndrome,NFLS)、毛细血管畸形-动静脉畸形综合征(capillary malformation-arteriovenous malformation syndrome,CM-AVM).RAS信号通路相关综合征以颅颌面畸形和全身多系统畸形、功能障碍为特征.本文总结RAS信号通路相关综合征的颅颌面、口腔病变特征,以期了解RAS信号在颅颌面发育中的作用,为临床提供参考.
关键词： MAP激酶信号系统 RAS信号通路相关综合征 颅颌面发育 -
周期性张应变对人牙周膜细胞迁移的影响
目的 探讨周期性张应变对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)迁移的影响及其相关机制,为进一步了解机械力对hPDLC功能的影响提供资料.方法 应用FX-4000T细胞应变加载系统,对体外培养的hPDLC施加周期性张应变,牵张幅度分别为10%和20%,加载时间为6 h和24 h,频率均为0.1 Hz,以未加载的静态细胞作为对照组,应用划痕法观察hPDLC的迁移,蛋白质印迹法检测hPDLC的基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)的表达变化;用细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)的特异性抑制剂PD98059预处理hPDLC后,在0.1 Hz、10%幅度条件下,加载6 h,检测细胞p-ERK1/2和MMP-9表达的变化.用细胞迁移划痕法观察加载10%和20%幅度张应变,观察24 h后PD98059和MMP家族的抑制剂强力霉素(doxycycline,DOX)对hPDLC迁移的影响.结果 细胞迁移划痕实验结果显示,牵张幅度和加载时间均可显著促进细胞迁移.与静态组相比,施加牵张幅度分别为10%和20%的张应变6 h后,hPDLC迁移变化不明显,但加载24 h后,10%和20%幅度的张应变均显著促进了hPDLC迁移(P<0.05),细胞迁移率分别为(45 ±8)%和(66±14)%,且20%比10%幅度牵张对细胞迁移的促进作用更显著(P<0.05).蛋白印迹法结果显示,周期性张应变促进了hPDLC的MMP-9表达.牵张幅度对细胞MMP-9的表达有显著影响(P<0.05),但加载时间对细胞MMP-9的表达无显著影响.ERK1/2的抑制剂PD98059不仅可以明显抑制张应变诱导的p-ERK1/2活化,而且可通过ERK信号通路明显抑制张应变诱导的细胞MMP-9表达.细胞迁移划痕实验还证实,加载幅度分别10%和20%的张应变24 h后,抑制剂PD98059和DOX均能有效抑制周期性张应变诱导的hPDLC迁移.结论 周期性张应变可通过激活hPDLC的ERK信号通路,促进细胞的MMP-9表达,从而诱导体外培养的hPDLC迁移.
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布洛芬对淀粉样β蛋白片段1～40引起的大鼠海马p38 MAP激酶信号传导通路及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶级联的影响
目的 研究布洛芬对淀粉样β蛋白片段1-40 (Aβ1-40)所致大鼠海马损伤的保护作用及作用机制.方法 大鼠ig给予布洛芬15 mg·kg-1,连续应用3 周,脑室内一次性注射Aβ1-40 (5 μL,1 mmol·L-1),注射后6 h快速取海马CA1区,Western免疫印迹法观察磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶的激酶3/6(MKK3/MKK6)、磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶p38(p38 MAP 激酶)、磷酸化MAPK活化的蛋白激酶2(MAPKAPK2)、磷酸化热休克蛋白p27(Hsp27)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)9,3,7以及ADP-核糖聚合酶(PARP)的蛋白表达水平的改变.结果 脑室内注射Aβ1-40可引起海马CA1区磷酸化的MKK3/MKK6和磷酸化p38 MAP激酶表达明显增加,但可使磷酸化MAPKAPK2和磷酸化的Hsp27表达降低,这些改变伴随有caspase级联的激活.此外,也发现Aβ1-40可使海马CA1区完整的PARP蛋白表达明显减少,而劈切PARP(分子量为89 ku)表达明显增加.布洛芬可明显对抗Aβ1-40引起的磷酸化的MKK3/MKK6和磷酸化p38 MAP 激酶表达增加,上调磷酸化MAPKAPK2和磷酸化的Hsp27表达水平,同时抑制Aβ1-40引起的caspase级联激活和PARP的劈切.结论 布洛芬通过抑制Aβ1-40引起的磷酸化的MKK3/MKK6和磷酸化p38 MAP 激酶表达,明显增加以及上调磷酸化的Hsp27表达水平,对抗Aβ1-40引起的海马的神经细胞损伤.
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吡格列酮对谷氨酸诱导的皮质神经元损伤的保护作用
目的 观察吡格列酮对谷氨酸所致培养皮质神经元损伤的保护作用及其机制.方法 乳大鼠大脑皮质神经元,培养7 d后用于实验.实验分为对照组,加入0.1%二甲亚砜;谷氨酸损伤组,加入谷氨酸100 μmol·L-1作用2 h或24 h;吡格列酮组,先分别加入吡格列酮0.01,0.1和1 μmol·L-1作用1 h,然后加入谷氨酸;谷氨酸 + 吡格列酮+GW9662组,先加入GW9662 10 μmol·L-1作用30 min,然后加入吡格列酮1 μmo·L-1, 作用1 h后加入谷氨酸.MTT法测定细胞存活率;Hoechst 33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;Western印迹法检测Bcl-2蛋白、钙蛋白酶Ⅰ蛋白和磷酸化c-Jun氨基端激酶1(JNK1)表达水平;免疫荧光染色法检测钙蛋白酶Ⅰ及磷酸化活化转录因子2(ATF2)表达.结果 谷氨酸作用24 h可使体外培养神经元细胞存活率明显下降,从对照组的(100.0±15.4)%降低至(71.5±6.1)%;细胞凋亡百分率明显加,从对照组的(8.7±1.3)%增加至(35.4±6.9)%;磷酸化JNK1、钙蛋白酶Ⅰ蛋白和磷酸化ATF2表达增加,Bcl-2蛋白表达水平降低.吡格列酮0.1及1 μmol·L-1明显对抗谷氨酸引起的神经元损伤,神经元细胞存活率分别为(91.1±4.7)%和(96.6±3.4)%;细胞凋亡百分率分别为(15.5±3.8)%和(9.2±0.9)%.过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的特异性阻断剂GW9662不能拮抗吡格列酮对神经元的保护用,谷氨酸+吡格列酮+ GW9662组细胞存活率为(91.3±6.7)%,细胞凋亡百分率为(10.2±1.8)%.单独应用GW9662 10 μmol·L-1对细胞存活率和细胞凋亡百分率没有影响.吡格列酮也可抑制谷氨酸引起的磷酸化JNK1、磷酸化ATF2、钙蛋白酶Ⅰ表达增多及Bcl-2蛋白表达减少.结论 吡格列酮对谷氨酸引起的培养皮质神经元损伤具有明显的保护作用,可能与吡格列酮抑制磷酸化JNK1和钙蛋白酶Ⅰ表达,以及强Bcl-2蛋白表达有关,与PPARγ激活无关.
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MAP激酶家族在淀粉样β蛋白片段25～35引起的大鼠海马炎症反应及细胞凋亡中的作用
目的研究淀粉样β蛋白片段25～35(Aβ25～35)引起的大鼠海马炎症反应、细胞凋亡机制及抗炎药物布洛芬的保护作用.方法大鼠灌胃给予布洛芬7.5 mg·kg-1,连续应用3 周,脑室内单次注射Aβ25～35(10 μL, 1 mmol·L-1),注射后继续应用布洛芬1周后,取脑,进行尼氏染色和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色,研究海马CA1区锥体神经元形态学改变和星形胶质细胞激活.Western印迹观察白细胞介素-1β(IL-1β), 胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2),有丝分裂原活化蛋白激酶p38(p38 MAPK),蛋白激酶C(PKC) 和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达.RT-PCR分析IL-1β mRNA表达水平.结果脑室内注射Aβ25～35可引起海马CA1区星形胶质细胞激活和浸润,IL-1β蛋白表达和IL-1β mRNA表达水平明显增加,这种炎症反应伴有海马CA1区锥体神经元损伤.另外,Aβ25～35也能引起磷酸化的p38 MAPK蛋白表达较对照组明显增加,从对照组0.167±0.091增加到0.497±0.059(P<0.01, n=4).使磷酸化的ERK1/2蛋白表达下调, ERK1的表达从对照组0.146±0.010下降到0(P<0.01, n=4).ERK2表达从对照组的0.412±0.054下降到0.131±0.038(P<0.01, n=4).这些改变伴随有caspase-3蛋白表达的增加.但Aβ25～35对PKC的蛋白表达没有影响.布洛芬(7.5 mg·kg-1,连续应用4 周)能明显抑制Aβ25～35引起的IL-1β, p38 MAPK和caspase-3蛋白表达增加.海马CA1区锥体神经元的损伤和星形胶质细胞激活和浸润也被明显减轻.结论 p38 MAPK的激活和磷酸化的ERK1/2的下调在Aβ25～35引起的海马炎症反应及细胞凋亡中起关键性作用,布洛芬能阻止这种炎症反应和细胞凋亡.
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氯沙坦对自发性高血压大鼠细胞外信号调节激酶活性和B型利钠肽表达的影响
目的探讨氯沙坦治疗高血压心肌肥厚的作用机制.方法选择同周龄Wistar Kyoto(WKY)大鼠作正常对照,将21只14周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)随机分成3组:模型组、肼屈嗪组(10 mg·kg-1·d-1)和氯沙坦组(10 mg·kg-1·d-1).用Western印迹方法检测大鼠心肌总细胞外信号调节激酶(t-ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)及有丝分裂素激活蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)水平;用RT-PCR法半定量测定大鼠心肌中B型利钠肽(BNP)mRNA的含量;酶联免疫吸附法检测大鼠血浆BNP水平.结果喂药10周后,氯沙坦组和肼屈嗪组血压相似,均显著低于模型组(n=7, P<0.01).氯沙坦组心肌肥厚指数显著低于肼屈嗪组和模型组(n=7, P<0.01),与WKY组无差异(n=7, P>0.05);肼屈嗪组和模型组心肌肥厚指数无差异(n=7, P>0.05).4组大鼠t-ERK水平无显著性差异(n=7, P>0.05);氯沙坦组心肌p-ERK, p-ERK/t-ERK及MKP-1水平均显著低于SHR肼屈嗪组和SHR模型组(n=7, P<0.05),与WKY组无差异(n=7, P>0.05).肼屈嗪组和模型组心肌p-ERK, p-ERK/t-ERK及MKP-1水平无差异(n=7, P>0.05).氯沙坦组大鼠心肌BNP mRNA和血浆BNP水平显著低于SHR肼屈嗪组和模型组(n=7, P<0.05),与WKY组无差异(n=7, P>0.05) ;肼屈嗪组和SHR模型组大鼠心肌BNP mRNA和血浆BNP水平无差异(n=7, P>0.05).结论氯沙坦能通过抑制ERK活性逆转心肌肥厚,伴随BNP水平下降;肼屈嗪却不能,提示BNP的变化可反映降压药物逆转心肌肥厚的疗效.
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转化生长因子β1和丝裂原活化激酶通路调控人肺成纤维细胞表型
目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞表型分化中的作用.方法以人肺成纤维细胞HLF-02细胞系为研究对象,给予10 ng/ml TGF-β1刺激不同时间;阻断实验以SB203580、PD98059分别阻断p38通路和细胞外调控激酶(Erk)通路;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内表型分化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达;运用Western印迹检测细胞内p38、Erk、c-jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化以及α-SMA蛋白表达的强度.结果(1)TGF-β1刺激HLF-02细胞24h组、48 h组、72 h组的α-SMA mRNA表达水平分别为:1.87±0.11、2.49±0.10、3.02±0.15;α-SMA蛋白表达水平分别为:3.20±0.14、3.96±0.21、4.57±0.13.(2)TGF-β1可以激活HLF-02细胞内p38和Erk通路,对JNK没有活化作用.(3)SB203580、PD98059各自抑制了TGF-β1诱导的p38、Erk激酶的磷酸化.(4)SB203580抑制了TGF-β1诱导的α-SMAmRNA和蛋白表达(抑制率分别为30%和40%);PD98059同样抑制了TGF-β1诱导的α-SMA mRNA和蛋白表达(抑制率分别为10%和20%).结论TGF-β1可诱导HLF-02细胞表型的分化,p38、Erk激酶参与了调控TGF-β1的促表型分化作用.
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Piezo1蛋白经MAPK/ERK5信号通路介导软骨细胞凋亡的机制研究
目的 探讨骨关节炎患者软骨细胞中机械敏感性离子通道Piezo1蛋白经MAPK/ERK5信号通路介导软骨细胞凋亡的机制.方法 体外培养骨关节炎患者软骨细胞,应用细胞牵张应力加载系统对软骨细胞分别加载0 h、2 h、12 h、24 h和48 h的周期性牵张应力,在各加力组加入Piezo1的特异性拮抗剂GsMTx4和ERK5的特异性抑制剂BIX02188作为抑制剂组.用免疫荧光激光共聚焦显微镜观察定位Piezo1蛋白在软骨细胞中的表达位置;用RT-PCR检测细胞Piezo1、ERK5、凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-associated X protein,Bax)及Bcl-2相关促凋亡蛋白(Bcl-associated death promoter,BAD)的mRNA相对表达量;用AV-PI凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况.结果 激光共聚焦显微镜观察Piezo1蛋白可以在细胞核和细胞质表达.RT-PCR检测Pizeo1 mRNA在骨关节炎退变软骨中有少量表达,12 h加力组Pizeo1、ERK5、BAD和Bax mRNA的相对表达量增加,24 h达到峰值,48 h表达量下降.而Bcl-2 mRNA的相对表达量自2 h开始下降,12 h降到低值,24 h开始升高.Piezol蛋白特异性抑制剂GsMTx4组Pizeo1、ERK5、BAD、Bax mRNA的相对表达量均下降,Bcl-2表达量升高.ERK5特异性抑制剂BIX02188组ERK5、BAD、Bax mRNA的相对表达量均下降,Bcl-2表达量升高,Piezo1表达量不变.2 h加力组细胞凋亡率于早期开始增加,晚期凋亡率无明显增加;12 h加力组调亡率于晚期开始增加;24 h加力组晚期细胞凋亡率高;48 h加力组晚期凋亡率较24 h加力组降低.RT-PCR检测结果显示Piezo1、ERK5、Bcl-2、BAD和Bax mRNA的表达量与晚期凋亡具有相似的表达趋势.结论 Piezo1参与骨关节炎的软骨细胞晚期凋亡过程,且通过MAPK/ERK5信号通路启动细胞凋亡.
