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Slug减轻照射鼠肠上皮细胞损伤及作用机制
目的 研究Slug过表达对照射鼠肠上皮细胞的保护作用及机制.方法 以体外培养的小肠隐窝上皮细胞IEC6和转染了Slug cDNA的IEC6为研究对象,对细胞进行6 Gy剂量γ射线照射,在照射48 h后观察细胞凋亡指数,免疫组化和Weatem blot法检测PUMA蛋白表达.结果 6Gy射线照射IEC6细胞48 h后的细胞凋亡指数为15.60±1.54,明显高于照射联合pcDNA3-Slug cDNA转染组的5.10±1.70(P ＜0.01)和单独pcDNA3-Slug cDNA转染组的2.21±0.36(P ＜0.01).6Gy射线照射IEC6细胞48 h后的PUMA相对表达为0.79±0.12,明显高于照射联合pcDNA3-Slug cDNA转染组的0.16±0.01(P ＜0.01),免疫组化和Weatem blot法检测结果一致.结论 上调Slug抑制射线诱导的细胞PUMA表达上调,抑制IEC6细胞凋亡.
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PUMA与肿瘤的相关性研究
PUMA是BCL-2蛋自家族的促凋亡成员之一,可抑制肿瘤发生,并诱导肿瘤细胞凋亡.PUMA表达增高可提高肿瘤细胞对化学药物及辐射的敏感性,其表达缺失可减轻正常细胞对辐射的损伤.
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PUMA在胆囊腺癌中的表达及其临床意义
原发性胆囊癌是常见的胆道系统恶性肿瘤之一,占消化道肿瘤的第5～6位[1].近年来流行病学调查资料显示,我国大部分地区胆囊癌发病率呈递增趋势[2].由于早期缺乏特异性症状和体征,且恶性程度高、侵袭力强,病程进展快,且胆囊癌对化疗、放疗敏感性差,常发生原发或继发性耐药,致使其预后极差,病死率高.
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PUMA——非常有前景的肿瘤基因治疗靶点
PUMA(p53上调凋亡调控因子)是2001年发现的Bcl-2蛋白家族中的一员,是p53的下游基因,因为具有强大的促凋亡作用而备受关注.肿瘤组织中的PUMA可被化疗药物诱导而表达增加,同时,PUMA诱导多种肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖,而且,PUMA与有化疗和放疗有协同作用,增加肿瘤细胞对放化疗的敏感性.PUMA的作用与p53状态无关,是非常有前景的肿瘤基因治疗靶点.
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靶向Erk/Slug信号上调PUMA表达增强乳腺癌MDA-MB-231细胞对γ射线的敏感性
目的研究Erk/Slug信号通路在乳腺癌细胞MDA-MB-231放射敏感性中的作用.方法 通过以NF-κB p65 siRNA、PUMA siRNA或Slug siRNA转染MDA-MB-231细胞,或以U0126处理该细胞之后,以4Gyγ射线进行照射,在照射后的不同时间点检测细胞内Erk1/2、NF-κB p65、Slug和PUMA蛋白的表达,以MTT比色法检测细胞存活率,以TUNEL法检测细胞凋亡.结果 与单纯照射组相比,NF-κB p65 siRNA/4 Gy组,细胞PUMA表达明显下降;U0126/4 Gy组,细胞Erk1/2和Slug蛋白表达明显降低,PUMA表达明显升高;Slug siRNA/4 Gy组,Erk1/2蛋白表达无变化,但PUMA蛋白表达明显增加;同时,U0126/4 Gy组和Slug siRNA/4 Gy组,细胞照射48 h后存活率降至低点,分别为19.78±2.71(F=11.39,P＜0.05)和17.41±4.58(F=15.31,P＜0.05),细胞凋亡率升至高点,分别为28.61±4.70(F =9.84,P＜0.05)和27.55±6.41(F=10.31,P＜0.05);NF-κBp65 siRNA/4 Gy组和PUMA siRNA/4 Gy组,细胞照射24h后存活率分别为85.65±9.60(F=12.31,P＜0.05)和87.53±11.50(F=13.68,P＜0.05),细胞凋亡率明显下降,分别为3.28±0.78(F=10.83,P＜0.05)和3.46±0.84(F=9.92,P＜0.05).结论 γ射线照射后24 h内,MDA-MB-231细胞敏感性与依赖于NF-κB上调的PUMA表达有关;而照射24 h后,细胞的辐射抵抗性与依赖于Erk1/2上调的Slug表达有关,后者对PUMA表达有明显的抑制作用.
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PUMA基因对HELA的作用及其机制的初步研究
目的 初步探讨PUMA基因对HELA细胞是否具有促凋亡的活性和其参与HELA细胞凋亡的过程线粒体中cyt-c、AIF位置足否发生迁移.方法 倒置相差显微镜、AO/EB染色检测PUMA基因的促凋亡活性;Western blot检测HELA细胞凋亡后线粒体中cyt-c、AIF位置是否发生迁移.结果 ①倒置相差显微镜和荧光显微镜结果显示转染PUMA基因后HELA细胞出现了一系列凋亡形态学改变,这种变化在转染48h比24h更明显;②Western blot结果显示HELA细胞凋亡后线粒体内膜腔隙蛋白cyt-c、AIF向胞质迁移,迁移的蛋白量在转染48h比24h更明显.结论 ①PUMA基因有促进HELA细胞凋亡的作用;②AIF和cyt-c参与PUMA基因促进HELA细胞凋亡的过程,但此过程有无涉及线粒体膜电位的变化还有待进一步的研究.
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促凋亡基因puma与肿瘤治疗
p53上调凋亡调控因子(puma)是Bcl-2蛋白家族的促凋亡成员之一,是p53的下游靶基因,发挥作用却与p53的状态无关,可通过p53依赖和非依赖途径诱导细胞凋亡.puma在多种肿瘤组织中低表达,与肿瘤的发生密切相关.puma与放疗、化疗有协同作用,上调puma可以增强肿瘤细胞对放化疗的敏感性,而puma缺失则可降低放化疗对正常细胞的损伤.随着研究的深入,puma有望成为肿瘤治疗的新靶点.
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puma的研究进展及其与肺癌的关系
大量分子生物学的研究表明凋亡失衡在肿瘤的形成中发挥着重要作用.肺癌的发生发展是一多因子、多步骤的复杂生物学过程,与凋亡失衡有着密切的关系.puma是2001年新发现的凋亡相关基因领域新成员之一,是p53的下游靶基因,可通过p53依赖和p53非依赖途径促进细胞凋亡,其介导的凋亡机制在肿瘤包括肺癌发展的多阶段中都起到重要的作用.
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对沙眼衣原体感染细胞促凋亡蛋白表达的影响
目的:研究蛋白酶体抑制剂MG132对沙眼衣原体感染细胞促凋亡蛋白Bim、Puma表达的影响,探讨沙眼衣原体抑制宿主细胞凋亡的可能机制.方法:以沙眼衣原体(D 血清型)感染Hela229细胞,用不同浓度MG132作用后,Western-blot检测Bim、Puma蛋白质表达水平的变化.结果:沙眼衣原体感染12 h后Bim、Puma的表达降低;24 h后完全消失.MG132能抑制Bim、Puma的表达下降.结论:沙眼衣原体感染Hela229细胞后可降低促凋亡蛋白Bim、Puma蛋白质的表达;MG132可阻止这一作用,Bim和Puma的降解依赖蛋白酶体的活性.
关键词： 沙眼衣原体(D血清型) Hela229细胞 BIM PUMA 细胞凋亡 -
PUMA和caspase-3在结直肠癌中的表达及意义
目的:检测PUMA和caspase-3在结直肠癌和腺瘤中的表达情况,探讨其在结直肠癌发生、发展中的意义.方法:免疫组化方法检测44例正常结直肠黏膜、20例结直肠腺瘤、60例结直肠癌组织中PUMA和caspase-3的表达水平,分析其表达情况及其与结直肠癌临床病理参数之间的关系.结果:PUMA在正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤、结直肠癌组织的表达率分别为63.6%、30.0%、31.7%,正常黏膜PUMA的表达高于腺瘤和癌(P＜0.05),结直肠癌中PUMA的表达与肿瘤的大小相关(P＜0.05),与其它临床病理参数无关(P＞0.05);caspase-3在正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤、结直肠癌组织的表达率分别为95.5%、70%、66.7%,正常黏膜caspase-3的表达高于腺瘤和癌(P＜0.05),caspase-3的表达与结直肠癌临床病理参数无关(P＞0.05).结直肠癌中PUMA与caspase-3的表达呈正相关(r=0.329,P＜0.05).结论:PUMA、caspase-3的表达下调可能参与结直肠癌的发生.
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透骨草提取物通过p53正向细胞凋亡调控因子诱导人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡
目的：观察透骨草提取物对人卵巢癌 SKOV-3细胞凋亡和 p53正向细胞凋亡调控因子（PUMA）表达的影响，探讨 PUMA 蛋白和 mRNA 表达在透骨草提取物诱导 SKOV-3细胞凋亡中的作用。方法采用透射电镜观察透骨草提取物对 SKOV-3细胞超微结构的影响，采用免疫组织化学方法检测透骨草提取物对 SKOV-3细胞 PUMA 蛋白表达水平的影响：采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测透骨草提取物对 SKOV-3细胞PUMA mRNA 表达水平的影响。结果透射电镜观察结果显示，37.8μg/mL 透骨草提取物作用24 h 的 SKOV-3细胞胞膜皱缩，表面突起和微绒毛减少，染色质凝聚、边缘化，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体；免疫组织化学染色结果显示，37．8μg/mL 透骨草提取物作用的 SKOV-3细胞 PUMA 蛋白表达明显高于对照组（ P ＜0．05）；RT-PCR 方法检测结果显示，37．8μg/mL 透骨草提取物作用的 SKOV-3细胞 PUMA mRNA 表达明显高于对照组 P ＜0．05）。结论透骨草提取物可以诱导 SKOV-3细胞凋亡，PUMA 在透骨草提取物诱导 SKOV-3细胞凋亡的过程中具有一定作用，诱导 PUMA 表达可能是透骨草提取物抗卵巢癌作用的机制之一。
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宁夏密点麻蜥对胃癌前病变模型大鼠P53及PUMA表达的影响
目的:研究宁夏密点麻蜥不同剂量对胃癌前病变(PLGC)模型大鼠胃黏膜细胞增殖、凋亡以及P53和PUMA水平的影响,探讨宁夏密点麻蜥对PLGC的干预机制.方法:60只SPF级雄性SD大鼠,随机分为空白对照组,模型组,宁夏密点麻蜥高、中、低剂量组,维霉素对照组,共6组,每组10只.除空白组外,余均以0.02 mmol/L的MNNG联合40％乙醇、饥饱失常等综合因素共24周制备PLGC大鼠模型.分别用宁夏密点麻蜥高、中、低剂量、维酶素连续治疗12周,观察PLGC模型大鼠胃黏膜病理组织学变化,应用免疫组化法分别观察给药前和停药后胃体组织P53和PUMA蛋白变化,并进行统计分析.结果:通过Image-Pro Plus 6.0图像分析系统对免疫组化图像进行光密度的测算,各模型组与空白对照组P53和PUMA水平比较,AOD值明显降低,P＜0.05;各治疗组与模型组P53和PUMA水平比较,AOD值明显降低,P＜0.05;宁夏密点麻蜥高、中、低剂量治疗组P53和PUMA阳性表达率低于维酶素治疗组,P＜0.05,其中以高剂量组AOD值小.结论:宁夏密点麻蜥能抑制凋亡相关蛋白P53、PUMA的表达,促进细胞凋亡,逆转PLGC模型大鼠胃黏膜病理改变,阻断癌变发展.
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pifithrin-α抑制大鼠肝缺血再灌注早期PUMA蛋白的表达
背景:pifithrin-α是一种可逆性p53抑制剂,应用pifithrin-α抑制p53通路对肝脏缺血再灌注损伤的影响尚不清楚.目的:探讨核转录因子p53抑制剂对大鼠肝缺血再灌注后PUMA蛋白表达的影响.方法:96只雄性Wistar大鼠随机分为对照组,缺血再灌注组,缺血再灌注+二甲亚砜溶媒对照组(二甲亚砜组),缺血再灌注+p53抑制剂pifithrin组(PFT组).建立70%肝缺血模型,PFT组于60 min的肝血流阻断结束时立即给予pifithrin-α,二甲亚砜组给予等量二甲亚砜溶液,对照组和缺血再灌注组给予等量生理盐水.结果与结论:大鼠肝缺血再灌注后1,3,6 h肝组织PUMA蛋白表达明显,PFT组可以明显抑制PUMA蛋白的表达,但缺血再灌注24 h PFT组PUMA蛋白的表达高于其他3组.结果可见pifithrin-α对肝脏缺血再灌注损伤有一定保护作用,其通过抑制p53从而诱导PUMA蛋白表达下调主要是在缺血再灌注早期.
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外源性PUMA表达对人乳头瘤病毒阳性宫颈癌放疗敏感性的影响
目的 探讨外源性PUMA(p53 up-regulated modulator of apoptosis)基因对人乳头瘤病毒(HPV)阳性宫颈癌放疗敏感性的影响.方法 以重组腺病毒为载体,将PUMA基因导入HPV阳性宫颈癌细胞HeLa和caSki.应用MTT法比较携带PUMA的复制缺陷型重组腺病毒(Ad-PUMA)和携带野生型p53基因的复制缺陷型重组腺病毒(Ad-p53)对HeLa和Caski细胞增殖的影响,平板克隆方法检测Ad-PUMA与X射线联合应用后对细胞生长的影响,并通过DAPI染色、流式细胞检术检测细胞凋亡情况.Western Blot法检测x射线处理后HeLa细胞PUMA表达.结果 (1)Ad-PUMA能够明显抑制HeLa和CaSki细胞增殖,增加细胞凋亡,而Ad-p53对细胞生长无明显抑制作用.(2)X射线能够诱导HeLa细胞PUMA表达升高,具有时间和剂量效应.(3)Ad-PUMA与X射线联合应用后可显著增加细胞凋亡,减少平板克隆形成数,但Ad-PUMA对X射线引起的G2期阻滞无明显影响.结论 PUMA在放射线诱导肿瘤细胞凋亡的过程中发挥作用.Ad-PUMA抑制宫颈癌细胞增殖,诱导细胞凋亡.Ad-PUMA与X射线联合应用后显著提高宫颈癌细胞放疗敏感性.
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PUMA基因在水飞蓟宾诱导乳腺癌细胞凋亡的作用
目的:探讨凋亡相关基因PUMA在体外水飞蓟宾(silybin,SIL)诱导乳腺癌MCF7细胞凋亡过程中的作用.方法:MCF7细胞分为二组:对照组和SIL组,SIL组处理浓度分别为10、20、40 mg/L,各组细胞分别培养24、48及72 h.MTT法检测SIL对乳腺癌MCF7杀伤率,TUNEL法(DNA断裂的原位末端标记法)测定各组细胞凋亡率,Caspase-Glo⑧3/7定量试剂盒测定细胞Caspase3/7的表达情况,Western blot法检测PUMA蛋白表达水平.结果:上述浓度下的SIL对MCF7细胞增殖均具有抑制作用(P<0.01),其中浓度为40mg/LSIL处理的MCF7细胞在72h时抑制效果明显,结果呈药物浓度及时间依赖效应;TUNEL法检测显示(48h) SIL可以显著增加MCF7细胞的凋亡率(P<0.01);Caspase3/7检测显示SIL可以使Caspase3/7活性显著升高(P<0.01);Western blot法检测显示SIL可以诱导PUMA蛋白的表达升高.结论:凋亡相关基因PUMA在水飞蓟宾诱导乳腺癌MCF7细胞凋亡过程中具有显著作用,诱导PUMA蛋白表达可能是水飞蓟宾抗癌作用的机制之一.
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PUMA在大肠癌中的作用及临床意义
PUMA具有强大的促凋亡功能,其分子结构、转录机制的深入研究,使其有望成为肿瘤治疗新靶点,现对其特点、结构、分子机制以及在大肠癌中研究进展作一综述.
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PUMA的研究进展
PUMA(p53 up-regulated modulator of apoptosis)是近年发现的可被内外源性p53快速诱导、具有强大促凋亡作用的Bcl-2蛋白家族一员.它通过BH3结构域与其他Bcl-2家族蛋白相互作用,诱导细胞色素c释放,引起凋亡.PUMA引起的凋亡有两种(p53依赖的和p53不依赖的)调控通路,已有研究表明PUMA敲除可显著抑制细胞凋亡.对于该基因的调控机制、作用机制及在肿瘤治疗中的应用等方面的问题,正待深入研究.
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PUMA在结肠癌细胞中的表达及诱导细胞凋亡中的作用
目的:通过5-Fu诱导携带有野生型p53基因的HCT116和携带有突变性p53基因的HT-29两种结肠癌细胞系,比较两株细胞在各时间点凋亡水平和PUMA mRNA表达情况的差异,探讨PUMA对细胞凋亡的作用及诱导其表达的基本途径.方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同结肠癌细胞株HT-29、HCT116在抗肿瘤药物5-Fu作用下不同时间点结肠癌细胞株内PUMA mRNA表达水平的差异,用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光染色检测各时间点细胞的凋亡水平,分析其与PUMAmRNA表达水平之间的关系.结果:携带有野生型P53基因的结肠癌细胞株HCT116在5-Fu作用下6h即可出现PUMA mRNA的表达,随着药物作用时间的延长其表达强度增加,并且与细胞凋亡水平呈正相关;含有突变型P53基因的结肠癌细胞株HT-29在5-Fu作用下无PUMA的表达.结论:通过5-Fu诱导细胞凋亡出现的PUMA表达需要野生型P53基因,突变型P53基因无法诱导PUMA的表达.PUMA与结肠癌细胞凋亡水平呈正相关,是一种促凋亡蛋白.
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Puma基因对HeLa细胞凋亡的作用及机制的初步研究
目的 研究外源性puma基因表达对HeLa细胞的作用以及线粒体释放的细胞色素C(Cyt c)和凋亡诱导因子(AIF)是否参与了凋亡过程.方法 脂质体转染HeLa细胞;RT-PCT鉴定表达效果;AO/EB染色检测puma基因的促凋亡活性;Western blot检测细胞凋亡发生后线粒体中Cyt c和AIF位置是否发生迁移.结果 脂质体介导下成功实现了外源性puma基因在HeLa细胞中高表达,AO/EB染色显示转染puma基因后HeLa细胞出现了一系列凋亡形态学改变,这种变化转染48h比24h时更明显;Western blot结果显示,puma基因表达后HeLa细胞的线粒体膜间隙蛋白Cyt c、AIF向胞浆迁移,迁移的蛋白量在转染48h比24h更明显.结论 Puma基因表达有促进HeLa细胞凋亡的作用,且Cyt c和AIF参与puma基因促进HeLa细胞凋亡的过程.
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PUMA在喉鳞癌中的表达及临床意义
目的:探讨P53上调凋亡因子(P53 up-regulated modulator of apoptosis PUMA)在喉鳞癌中的表达及其与临床的关系.方法:采用免疫组织化学法检测35例喉鳞状细胞癌正常组织中PUMA的表达情况,并结合临床,分析其与临床病理特征及预后的关系.结果:PUMA蛋白在喉鳞癌中的表达明显低于正常组织,二者之间的比较差异有统计学意义(P<0.05);在喉鳞癌中PUMA与不同临床分期、病理组织学分级、淋巴结转移情况有相关性.结论:PUMA在喉鳞癌组织中呈低表达,PUMA阳性表达组的喉鳞癌患者中,生存率及生存时间明显高于阴性表达者.
