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复治肺结核耐药性危险因素分析
迄今为止,结核病仍是影响人类健康的重要传染病之一,而且耐药结核病的治疗效果差,治愈率低[1].全国第四次结核病流行病学调查显示[2],我国是结核病的高耐药国家之一,耐药率27.8%,耐多药率10.7%,获得性耐药率为46.5%.通过对复治病人耐药性和敏感性相关因素的分析,来了解继发性耐药产生的危险因素,从而为本地区的结核病控制措施提供依据,减少耐药的产生,提高治愈率.
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山东省艾滋病病毒感染者抗病毒治疗继发性耐药影响因素的病例对照研究
目的 了解HIV感染者抗病毒治疗发生继发性耐药的影响因素,为提高山东省抗病毒治疗效果提供依据.方法 按照病例对照研究设计,1∶2匹配病例组和对照组,2015年10月进行人户面对面调查.根据山东省级实验室自建的HIV感染者抗病毒治疗耐药数据库和艾滋病综合防治数据信息系统,筛选研究对象.样本量估计为330例(病例110例、对照组220例),研究对象为在山东省存活的HIV感染者、年龄≥15岁、参加抗病毒治疗≥6个月并检测病毒载量(VL).针对VL＞1 000拷贝/ml者进行实验室耐药检测,筛选出继发性耐药者作为病例组,非继发性耐药者为对照组.采用EpiData 3.1软件和SPSS 22.0软件建立数据库,运用非条件逐步logistic回归分析继发性耐药的影响因素.结果 研究对象共288例(病例组103例、对照组185例).病例组年龄为(37.62±1.06)岁,对照组年龄为(37.90±0.74)岁,以男性、已婚/同居者、高中及以下文化程度、汉族为主.多因素logistic回归分析结果显示,与治疗时间＜1年相比,治疗时间1～3年和＞3年的OR值分别为8.80(95％CI:3.69～21.00)、3.00(95％CI:1.20～7.53);与未漏服相比,漏服比例＞25.0％的OR值为15.41(95％CI:4.59 ～ 51.71);本人领药OR直为0.22(95％CI:0.07 ～ 0.74).结论 HIV感染者的治疗时间、漏服比例、本人领药为其抗病毒治疗继发性耐药的影响因素.治疗时间≥1年、漏服药物比例＞25％为继发性耐药的危险因素,本人领药为继发性耐药的保护因素.应加强治疗优化的干预力度,提高HIV感染者本人对服药的认知水平.
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PUMA在胆囊腺癌中的表达及其临床意义
原发性胆囊癌是常见的胆道系统恶性肿瘤之一,占消化道肿瘤的第5～6位[1].近年来流行病学调查资料显示,我国大部分地区胆囊癌发病率呈递增趋势[2].由于早期缺乏特异性症状和体征,且恶性程度高、侵袭力强,病程进展快,且胆囊癌对化疗、放疗敏感性差,常发生原发或继发性耐药,致使其预后极差,病死率高.
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肺腺癌表皮生长因子受体T790M突变裸鼠模型的建立与评价
目的 建立表皮生长因子受体(EGFR) T790M突变的肺腺癌裸鼠模型,为探讨肺腺癌EGFR-TKIs的继发性耐药机制提供工具.方法 建立对吉非替尼耐药的人肺腺癌细胞株RPC-9,以皮下异位移植法建立EGFR T790M突变肺腺癌裸鼠模型.进行组织病理学分析,以基因测序法检测EGFR基因突变;以Western blot法检测EGFR及磷酸化EGFR表达水平.结果 吉非替尼浓度增到10μmol/L时,基因测序法检测显示PC-9细胞EGFR基因E20发生突变,其氨基酸变化为790T＞ T/M.在4周内,PC-9移植组及RPC移植组肿瘤体积明显差异;移植后第5周时,RPC移植组肿瘤体积为944±20mm3,PC移植组肿瘤体积为878±8mm3,RPC移植组肿瘤体积显著大于PC-9移植组(P＜0.05).PC-9移植及RPC移植组肿瘤组织病理均为低分化腺癌.RPC-9移植组肿瘤组织EGFR基因存在E20发生突变,其氨基酸变化为790T＞ T/M.PC-9移植组及RPC移植组肿瘤组织EGFR及Tyr992磷酸化的EGFR表达水平差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 通过皮下移植对吉非替尼继发性耐药的人肺腺癌细胞RPC-9成功建立EGFR T790M突变的肺腺癌裸鼠模型,为研究肺腺癌EGFR-TKIs的继发性耐药提供了有力工具.
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粒状头样蛋白2下调诱导上皮间质转化促进肿瘤细胞对吉非替尼耐药
目的 探讨粒状头样蛋白2(GRHL2)在肿瘤靶向治疗药物表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)吉非替尼获得性耐药中的作用和可能机制.方法 利用吉非替尼浓度逐步递增的体外诱导方法培养人结直肠癌细胞DiFi和人肺腺癌细胞HCC4006,获得吉非替尼耐药细胞株.通过RNA测序方法筛选在耐药细胞株与其亲代细胞中差异表达的基因并进行实时荧光定量PCR验证.使用pcDNA3.1-GRHL2质粒转染耐药细胞株使GRHL2过表达,用CCK-8法检测细胞对吉非替尼的敏感性.采用蛋白质印迹法检测耐药细胞株中上皮标志物E-cadherin和间质标志物Vimentin的表达变化,并通过CellMinerTM数据库分析60株人肿瘤细胞系中GRHL2表达与E-cadherin和Vimentin表达的关系.结果 成功获得DiFi和HCC4006的耐药细胞株.通过RNA测序和实时荧光定量PCR验证发现GRHL2在耐药细胞株中表达下调,而在耐药细胞株中过表达GRHL2后细胞恢复了对吉非替尼的敏感性.蛋白质印迹分析表明耐药细胞株中上皮标志物E-cadherin表达下调,而间质标志物Vimentin表达上调;CellMinerTM数据库分析表明GRHL2的表达与E-cadherin/Vimentin比值高度一致.结论 GRHL2表达下调通过诱导上皮间质转化介导肿瘤细胞对吉非替尼的耐药.
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胰岛素样生长因子1受体在GIST伊马替尼继发耐药中的表达
目的:通过分析胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)在继发性耐药胃肠道间质瘤(GIST)组织标本中的表达,探讨c-kit/PDGFR-α基因二次突变以外的GIST甲磺酸伊马替尼(IM)继发耐药机制.方法:对12例继发性耐药GIST肿瘤标本进行c-kit/PDGFR-α常见突变位点的检测,分为存在c-kit/PDGFR-α二次突变组和无二次突变组,通过定量RT-PCR及免疫组织化学法检测两组的IGF1R的表达水平.结果:12例继发性耐药GIST肿瘤标本中发现5例存在c-kit/PDGFR-α不同位点的二次突变,7例未见新的突变.RT-PCR法检测结果发现未见二次突变的耐药GIST中IGF1R基因表达较存在二次突变组显著性上调(P=0.03),免疫组织化学法检测IGF1R蛋白表达也进一步证实上述结果.结论:证实在无c-kit/PDGFR-α二次突变的继发性耐药GIST组织标本中存在IGF1R基因及蛋白水平的表达上调,说明IGF1R在二次突变以外的GIST继发耐药机制中发挥重要作用,其具体调控机制有待进一步研究.
关键词： 胃肠道间质瘤 继发性耐药 胰岛素样生长因子1受体 -
Imatinib耐药的胃肠道间质瘤细胞系的建立及其生物学特征鉴定
胃肠道间质肿瘤(GIST)是位于胃肠道或腹腔内的表达KIT(CD117)蛋白的间叶源性肿瘤,大多数存在KIT和血小板源性生长因子受体α-多肽(PDGFRA)基因的突变[1].伊马替尼(Imatinib)是一种口服的ATP的竞争性抑制剂,能竞争性地结合于KIT酪氨酸激酶功能区的ATP结合位点,从而阻断了失控的信号传导通路,因此目前已成为治疗GIST的标准药物.然而一般在Imatinib平均治疗24个月后,将产生继发性耐药.关于Imatinib耐药(包括原发和继发)的机制还不是很清楚.目前认为Imatinib发生耐药的大可能是由于KIT和PDGFRA基因的继发突变导致Imatinib耐药性克隆的出现.我们通过建立Imatinib耐药的胃肠道间质瘤细胞系,并对其进行生物学特征的初步探讨,明确其耐药的可能机制,探讨GIST发生耐药后的分子改变事件,为GIST的靶向治疗寻找新的分子靶点.
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表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）继发性耐药的机制及对策
肺癌是常见的恶性肿瘤之一，也是目前癌症死亡的首要原因，其中约80％为非小细胞肺癌（Non-small Cell Lung Cancers，NSCLC）。表皮生长因子受体（Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR）驱动基因在肺癌的发生发展过程中起重要作用，近年来，以吉非替尼和厄洛替尼为代表的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（Epidermal Growth Factor Receptor Tyrosine Kinase Inhibitors，EGFR-TKI）在 NSCLC 的分子靶向治疗中发挥了巨大的作用，给NSCLC 患者带来了福音。然而，无论近期效果如何，终患者都不可避免地产生耐药及病情进展。本文主要对近年来EGFR-TKI 继发性耐药的发生机制及耐药后的对策作一综述，以期更好地指导 NSCLC 的治疗。
关键词： 肺癌 表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂 继发性耐药 -
MiRNAs与EGFR-TKIs继发性耐药机制的研究进展
肺癌是癌症致死率高的疾病，关于这个疾病的发生机制已得到部分阐明，其中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）信号通路研究为深入，在肺癌的发生中起着至关重要的作用。而有效地抑制EGFR信号通路的药物已用于非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）的靶向治疗中，伴有EGFR基因突变的患者使用EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-tyrosine kinase inhibitors, EGFR-TKIs）治疗后获得不错的临床收益，但大部分患者在使用该药治疗10个月后出现耐药现象。MiRNAs（microRNAs）是一种非编码蛋白的RNA，参与转录后水平基因的表达调控。越来越多的研究发现miRNAs与EGFR-TKIs继发性耐药有关，miRNAs可作为逆转EGFR-TKIs耐药及评估EGFR-TKIs有效性的生物指标。本文就NSCLC中miRNAs与EGFR-TKIs继发性耐药机制之间的相关性研究进展做简要的综述。
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非小细胞肺癌中microRNAs与EGFR-TKIs继发性耐药机制的研究进展
近年来，在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）靶向治疗中，尤其是伴有表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因突变的患者，EGFR酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor, TKI）越来越多地进入到临床治疗，但EGFR-TKI耐药的产生不仅影响药物敏感性，甚至出现疾病进展，成为制约其疗效的主要瓶颈。微小RNA（microRNAs, miRNAs）是一种非编码蛋白的RNA，参与转录后水平基因的表达调控，近研究发现，miRNAs参与了EGFR-TKIs耐药，影响肿瘤细胞对吉非替尼的敏感性。本文就NSCLC中miRNAs与EGFR-TKIs继发性耐药之间的相关性研究进展做简要的综述。
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吉非替尼可能通过EGFR启动子甲基化诱导肺腺癌细胞继发性耐药
背景与目的 在肺腺癌靶向治疗中的吉非替尼继发性耐药是临床遇到的重要问题.本研究旨在探讨吉非替尼是否可诱导肺腺癌PC9细胞发生继发性耐药,以及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)启动子甲基化在耐药过程中的作用,拟为肺腺癌耐药提供新的治疗靶点.方法 体外培养肺腺癌吉非替尼敏感细胞株PC9,应用不同浓度吉非替尼进行干预.MTT法检测PC9细胞株对吉非替尼的敏感性.亚硫酸氢盐处理后测序法(bisulfite sequencing polymerase chain reaction, BSP)检测肺腺癌PC9细胞株EGFR启动子甲基化水平.使用5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-dc)对吉非替尼耐药细胞株PC9/GR细胞株进行干预.MTT法检测耐药株PC9/GR对吉非替尼敏感性的变化.结果 经过从0.01 μmol/L逐渐提升吉非替尼诱导浓度至3 μmol/L之后,MTT显示耐药细胞株PC9/GR细胞株半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50)[(3.95±0.23)μmol/L]较之前敏感株PC9[(0.01±0.002)μmol/L]明显升高(P<0.05),BSP显示发生异常甲基化的位点结果比较：PC9/GR甲基化水平明显升高(74% vs59%, P<0.05).RT-PCR显示PC9/GR细胞株较PC9细胞株EGFR mRNA表达量升高(P<0.05).使用5-Aza-dc处理PC9/GR细胞后,PC9/GR细胞株IC50较对照组降低[(2.55±0.14)μmol/L vs (3.87±0.034)μmol/L, P<0.05)].结论 吉非替尼体外浓度递增诱导法可诱导PC9细胞株产生吉非替尼继发性耐药,成功构建PC9/GR耐药细胞株.PC9细胞EGFR启动子甲基化异常可能参与了吉非替尼继发性耐药机制.
