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哮喘大鼠肺组织TGF-β1与Smad3、Smad7蛋白的变化及不同中医治法对其的影响
目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)和Smads蛋白在哮喘大鼠肺组织中的变化及宣肺、固本、宣肺固本三种中医治法(宣肺方、固本方、宣肺固本方)对其的影响.方法 以卵蛋白复制大鼠哮喘模型,并用不同中医治法(宣肺方、固本方、宣肺固本方)对其进行干预.在激发哮喘并治疗4周后处死,观察各组大鼠肺系数的变化,并用免疫组化法检测大鼠支气管肺组织中TGF-β1和Smad3、Smad7蛋白的表达.结果 经治疗后,(1)哮喘大鼠的肺系数有不同程度的升高,中药治疗组与地塞米松组间的差异有统计学意义;(2)哮喘大鼠支气管肺组织TGF-β1、Smad3蛋白的表达水平升高,而Smad7蛋白的表达下降,三种中医治法对其均有影响,宣肺固本治法优于其他治法,有统计学意义.结论 哮喘大鼠气道重建模型中TGF-β1、Smad3蛋白与气道重塑呈正相关,而Smad7蛋白则与气道重塑呈负相关;中医宣肺固本法治疗哮喘气道重建可能与调节TGF-β1和Smad3、Smad7蛋白的表达水平有关.
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健脾化瘀法方药对肝癌细胞Smad7蛋白及上皮间质转化的影响
目的:探讨健脾化瘀方对肝癌细胞Smad7蛋白及上皮间质转移标志蛋白E-cadherin/N-cadherin表达水平及侵袭转移能力的影响.方法:分别以不同浓度(20％,高浓度组;10％,低浓度组)健脾化瘀法中药含药血清及空白对照血清(空白对照组)培养肝癌细胞MHCC97-H,qPCR检测细胞Smad7、Snail、Zeb1、Zeb2 mRNA水平,Western blot检测Smad7、Snail、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达水平.划痕法和Transwell小室检测肝癌细胞侵袭/迁移能力.结果:高浓度组Smad7 mRNA水平高于空白对照组(P＜0.05),Snail、Zeb2 mRNA水平低于空白对照组(P＜0.05).与空白对照组比较,高浓度组48h的Snail、N-cadherin蛋白表达量明显降低,Smad7、E-cadherin蛋白表达量明显升高(P＜0.05).低浓度组48h的E-cadherin升高,N-cadherin降低(P＜0.05).划痕法结果显示,与空白对照组比较,高、低浓度组肝癌细胞的划痕愈合较慢(P＜0.05,P＜0.01).Transwell显示,与空白对照组比较,高、低浓度组MHCC97-H细胞的迁移受抑制(P＜0.05).结论:健脾化瘀法中药能抑制肝癌细胞侵袭转移,可能与上调Smad7蛋白含量及抑制上皮间质转化有关.
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ERK促进大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞Smad7表达
研究表明,在多种细胞,转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad与细胞外信号调节蛋白激酶(extra cellalar signal regulated protein,ERK)信号传导通路可在多个环节存在相互调节[1].但在血管平滑肌细胞(vascu-lar smooth muscle cells,VSMCs),这两条通路是否存在类似关系,作为抑制性分子Smad7的作用目前还不清楚.本研究观察大鼠胸主动脉VSMCs内ERK通路对Smad7蛋白及其mRNA表达的影响.
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下调miR-25对高糖诱导视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞Smad7和VEGF表达的影响
目的 研究miR-25在高糖条件下人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞中表达情况,及下调miR-25对ARPE-19细胞中Smad7和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 体外培养ARPE-19细胞,采用葡萄糖(30 mmol/L)处理细胞模拟高糖状态,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-25表达水平;采用Lipo-fectamineTM3000试剂盒进行转染,将ARPE-19细胞分为miR-25低表达(antagomir)组、阴性对照(NC)组、高糖(HG)组及正常葡萄糖(NG)组.转染后48 h,光学显微镜观察细胞形态,CKK-8法检测细胞增殖情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ARPE-19细胞E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)mR-NA表达;蛋白免疫印记(WB)检测E-cad、α-SMA、COL-Ⅰ、VEGF、Smad7蛋白表达情况.结果 与NG组比较,HG组ARPE-1细胞miR-25表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);转染miR-25 antagomir后,与HG组和NC组比较,ARPE-19细胞miR-25表达显著下调(P<0.05).与NG组比较,HG组、NC组ARPE-19细胞变长呈纺锤形细胞,细胞中 α-SMA、COL-Ⅰ、VEGF表达上调(P<0.05),E-cad、Smad7表达下调(P<0.05);与HG组、NC组比较,antagomir组纺锤形ARPE-19细胞数量减少,细胞中 α-SMA、COL-Ⅰ、VEGF表达下调(P<0.05),E-cad、Smad7表达上调(P<0.05).结论 高糖条件下,下调miR-25可抑制VEGF表达,促进Smad7表达,抑制人视网膜色素上皮细胞纤维化.
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转染Smad7基因的人眼球筋膜囊成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白及纤维连结蛋白表达的改变
目的 观察转染Smad7基因的人眼球筋膜囊成纤维细胞(HTFs)Ⅰ型胶原蛋白和纤维连结蛋白表达的改变.方法 用NucleofectorTM核酸转染仪将含有Smad7的真核表达质粒转染至HTFs.采用实时定量逆转录聚合酶链反应法检测Ⅰ型胶原蛋白及纤维连结蛋白mRNA表达的改变.采用放射免疫法检测Ⅰ型前胶原羧端肽原(PICP)在培养液中浓度的改变,检测经转化生长因子β2(TGF-β2,10 ng/ml)作用后以上指标的改变.以未转染HTFs和转染空质粒的HTFs作为对照.结果 成功将含有Smad7基因的质粒转染至HTFs,并证明其Smad7基因mRNA表达明显升高.转染Smad7的HTFs Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达率为(89.53±9.37)%,分别是对照组HTFs的40.47%和pCMV5-HTFs的37.94%.培养液中PICP浓度为(15.29±2.18)μg/L,分别是对照组HTFs的52.10%和pcMV5-HTFs的57.35%.转染Smad7的HTFs能够明显拮抗由TGF-β2作用引起的Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达和PICP浓度升高(P＜0.01);无论是否有TGF-β2作用,转染Smad7的HTFs纤维连结蛋白mRNA的表达与对照组相比,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 Smad7能降低HTFsⅠ型胶原蛋白mRNA表达和Ⅰ型胶原蛋白的合成,但对纤维连结蛋白mRNA表达无明显作用.(中华眼科杂志,2007,43:124-128)
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复荣通脉胶囊对糖尿病大鼠心肌Smad7蛋白表达的影响
目的 探讨复荣通脉胶囊对糖尿病大鼠心肌Smad7蛋白表达的影响.方法 采用随机数字表法将60只大鼠分为正常组(10只)、造模组(50只).成模后,将40只糖尿病大鼠随机分为糖尿病组和复荣通脉低、中、高剂量组,每组各10只.复荣通脉低、中、高剂量组分别给予复荣通脉胶囊0.7、1.4、2.8 g/kg灌胃,正常组和糖尿病组给予等量纯净水灌胃.8周后,留取大鼠心肌制备病理切片,观察各组血糖、血脂及Smad7蛋白的阳性表达.结果 治疗前、治疗8周后,糖尿病组和复荣通脉低、中、高剂量组血糖水平均明显高于正常组(P＜0.05),各组大鼠组内治疗前后血糖差异无统计学意义(P＞0.05).治疗8周后,糖尿病组和复荣通脉低、中、高剂量组总胆固醇、三酰甘油水平均明显高于正常组(P＜0.05).正常组Smad7蛋白表达呈强阳性,糖尿病组和复荣通脉低、中、高剂量组Smad7蛋白表达均明显下降(P＜0.05);与糖尿病组、复荣通脉低剂量组比较,复荣通脉中、高剂量组Smad7蛋白高表达(P＜0.05).结论 复荣通脉胶囊具有上调糖尿病大鼠心肌Smad7蛋白表达、抑制糖尿病心肌细胞损伤的作用.
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不同剂量阿托伐他汀对肺纤维化小鼠Smad3/7蛋白表达的影响
目的：研究不同剂量阿托伐他汀对肺纤维化小鼠肺组织中smad3，smad7蛋白表达影响。方法小鼠随机分为对照组，模型组，阿托伐他汀（10 mg/kg，20 mg/kg，40 mg/kg）治疗组。对照组小鼠气管内灌注生理盐水，其余小鼠气管内灌注博来霉素制备肺纤维化模型。给药后第2天开始阿托伐他汀组给予不同剂量阿托伐他汀灌胃，其余两组给予等量生理盐水灌胃，于第7，14，28天分别处死各组小鼠4只，取肺组织进行HE染色观察病理变化，免疫组化法测定肺组织smad3，smad7蛋白表达情况。结果与模型组比较，阿托伐他汀治疗组smad3蛋白表达均降低，smad7蛋白表达升高，且降低及升高程度均与阿托伐他汀剂量呈正相关。结论阿托伐他汀可减轻小鼠肺纤维化程度，其减轻与Smad3/7通路密切相关，且具有剂量依赖性。
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糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转化与肝细胞生长因子和Smad7蛋白的表达
目的探讨糖尿病肾病(DN)时肾小管上皮细胞转化以及肝细胞生长因子(HGF)、Smad7蛋白在其中可能发挥的作用.方法 60只Wistar大鼠均行右肾切除术,伤口愈合后随机分为右肾切除对照组和糖尿病组.腹腔注射链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病模型.采用免疫组化法检测角蛋白18(CK18)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、HGF和Smad7蛋白的表达;流式细胞术检测α-SMA和HGF的表达;蛋白质免疫印迹法检测Smad7蛋白的表达.结果糖尿病组较对照组CK18的表达降低,α-SMA的表达上升,HGF和Smad7蛋白的表达表现为先上升后下降.结论糖尿病时,肾小管上皮细胞可发生表型转化,转化为肌成纤维细胞.HGF和Smad7蛋白表达下降可能与该模型中肾小管上皮细胞转化有关.
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消渴平合剂对STZ诱导的糖尿病肾病大鼠TGF-β1/Smad7信号转导通路的影响研究
目的:观察消渴平合剂对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病(DN)大鼠TGF-β1/Smad7信号转导通路的影响,探讨其对DN的防治作用及机制.方法:复制DN大鼠模型,随机分为正常组10只,模型组10只、尼贝沙坦组10只和消渴平合剂组10只.12周时处死大鼠,观察各组大鼠24 h尿蛋白变化情况,检测血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、甘油三酯(TG)、一氧化氮(NO),大鼠肾组织行HE染色,免疫组化检测肾组织TGF-β1及Smad7蛋白.结果:消渴平合剂可以改善DN大鼠的一般状况,明显降低24 h尿蛋白定量(P＜0.01),减轻肾组织病理性损害.与模型组比较,消渴平合剂组BUN、Scr、TG含量显著降低(P＜0.01),NO含量明显升高(P＜0.01);肾组织TGF-β1蛋白表达明显降低(P＜0.01),Smad7蛋白表达显著升高(P＜0.01).结论:消渴平合剂可用于治疗糖尿病肾病,其机制可能与抑制DN大鼠肾脏TGF-β1/Smad7信号转导通路的激活有关.
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TGF-βⅡ型受体、Smad4与Smad7蛋白在胃癌中的表达
目的 通过检测转化生长因子TGF-βⅡ型受体(TβR-Ⅱ)、Smad4与Smad7蛋白在胃癌组织中的表达,研究它们与胃癌发生、发展的关系.方法 应用S-P免疫组化检测方法,对10例正常胃黏膜、10例早期胃癌与45例进展期胃癌组织的TβR-Ⅱ、Smad4与Smad7蛋白的表达进行检测.结果 TβR-Ⅱ与Smad4蛋白在正常胃黏膜和早期胃癌中的表达明显高于进展期胃癌,且胃癌分化程度越低,阳性表达率越低(P＜0.05).Smad7蛋白在进展期胃癌中的表达明显高于正常胃黏膜和早期胃癌(P＜0.05).TβR-Ⅱ、Smad4及Smad7蛋白的表达均与淋巴结转移相关.结论 TβR-Ⅱ、Smad4与Smad7蛋白三者表达的异常可能与胃癌的发生、发展和转移相关,可能成为研究胃癌分化与转移的生物学标记物.
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Smad7蛋白在口腔鳞癌组织中的表达及其对口腔鳞癌细胞增殖和迁移能力的影响
目的:检测Smad7蛋白在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达及临床意义,探讨其在口腔鳞癌细胞增殖和迁移中的作用.方法:利用免疫组织化学染色,检测31例原发性口腔鳞癌患者肿瘤组织及癌旁标本中Smad7的表达,并分析其与淋巴结转移之间的关系;利用CCK-8及细胞划痕实验检测Smad7基因沉默对肿瘤细胞增殖及迁移能力的影响;通过Smad7 siRNA干扰HN4细胞,影响Smad7蛋白的表达,利用免疫印迹及qRT-PCR检测其对上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关指标蛋白及RNA表达的影响.采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析.结果:在口腔鳞癌肿瘤组织中,Smad7蛋白在细胞核和细胞质的表达均显著高于对应的癌旁组织.Smad7的表达与患者颈淋巴结转移显著相关.Smad7 siRNA干扰HN4细胞后,细胞的增殖能力减弱,迁移能力增强.Smad7 siRNA干扰使得HN4细胞神经钙黏附素(N-cadherin)蛋白的表达量升高,而上皮钙黏蛋白(E-cadherin)的表达量下降,N-cadherin蛋白及波形蛋白(Vimentin)RNA表达量显著升高,与对照组相比有显著差异.结论:Smad7的表达与口腔鳞癌患者颈淋巴结转移相关,且Smad7在口腔鳞癌肿瘤细胞的增殖及侵袭转移中发挥重要作用.
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miRNA-10a对小鼠肝纤维化细胞增殖及TGFβ1/Smads信号转导通路表达的影响
目的 通过观察肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)小鼠肝组织TGFβ1/Smads信号转导通路的表达与HF进展的关系,探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-10a对于HF的作用机制.方法 选用9周龄健康雄性小鼠(C57 BL6/J) 40只,按照数字表法随机分为对照组和HF模型组(观察组),对照组生理盐水5μl/g腹腔注射,每周2次,注射8周;观察组10％ CCL4橄榄油5 μl/g腹腔注射,每周2次,注射8周,制作小鼠HF模型.RT-PCR法检测HF细胞中miRNA-10a表达后,将观察组HF细胞进行培养及miRNA-10a模拟物转染(转染组),CCK-8法检测HF细胞增殖能力,Western blotting检测HF细胞中TGFβ1、Smad7的表达水平.结果 与对照组比较,观察组miRNA-10a表达水平明显增加(P＜0.05);与对照组比较,转染组肝细胞miRNA-10a表达水平明显降低(P＜0.05);与对照组相比,低表达miRNA-10a明显降低观察组TGFβ1的表达水平,提高Smad7的表达水平(均P＜0.05).结论 小鼠HF细胞中低表达miRNA-10a,转染miRNA-10a模拟物可明显促进小鼠HF细胞增殖,其作用机制是通过miRNA-10a调控TGFβ1/Smads信号转导通路促进小鼠HF.
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内源性硫化氢对二乙基二硫代氨基甲酸盐诱导的大鼠慢性胰腺纤维化的影响
目的 探讨内源性硫化氢(hydrogensulfide, H 2S)对二乙基二硫代氨基甲酸盐(diethyldithiocarbamate, DDC)诱导的大鼠胰腺纤维化模型的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠48只,随机分成对照组、模型组、NaHS组和PAG组,每组各12只.其中模型组间大鼠腹腔内注射10%DDC溶液(700mg/kg),隔日1次,共注射15次;NaHS组于造模的同时再注射H 2S供体硫氢化钠(sodium hydrosulfide, NaHS)(56μmol/L),1次/d;PAG组于造模的同时再注射DL-炔丙基甘氨酸(DL-propargylglycine, PAG)(45μmol/L),1次/d;对照组和模型组则注射同等体积的生理盐水,1次/d.实验后第30天,处死各组大鼠,留取动脉血和胰腺组织;采用H-E染色,在光学显微镜下观察胰腺组织学变化;采用Masson染色,测胶原纤维含量并进行病理学评分;采用ELISA法检测胰腺组织中Ⅰ型胶原、TGF-β1含量;采用Western印迹法检测胰腺组织中Smad7蛋白的表达,并检测血浆H 2S含量.结果模型组、NaHS组和PAG组大鼠胰腺组织病理学评分、胶原纤维含量、Ⅰ型胶原和TGF-β1明显高于对照组( P <0.05),而模型组明显高于NaHS组( P <0.05),PAG组明显高于模型组、NaHS组( P <0.05).对照组、模型组和PAG组血浆H 2S含量明显低于NaHS组( P <0.05),模型组明显低于对照组( P <0.05),PAG组明显低于模型组( P <0.05).模型组、NaHS组和PAG组胰腺组织中Smad7蛋白表达明显低于对照组( P <0.05),NaHS组、模型组明显高于PAG组( P <0.05),NaHS组明显高于模型组( P <0.05).结论 在DDC诱导的大鼠胰腺纤维化模型中,内源性H 2S能够有效抑制实验性大鼠胰腺纤维化,其机制可能是通过TGF-β1/Smad信号通路上调胰腺组织中Smad7蛋白的表达及下调TGF-β1的表达.
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化瘀理肺方对大鼠肺间质纤维化时Smad7和TGF-β表达的影响
目的 探讨化瘀理肺方对博莱霉素致大鼠肺间质纤维化的治疗作用及机制.方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、激素组,采用博莱霉素经气管内插管注入方法(5mg/kg)建立肺间质纤维化模型,对照组注入生理盐水(0.25 mL/只),从造模后的第2天起中药组给予化瘀理肺方药物灌胃(13410 mg/kg);对照组、模型组给予生理盐水灌胃(2 mL/只);激素组给予氢化可的松琥珀酸钠腹腔注射(25mg/kg),于给药后的第14、28天分别处死,称取肺重计算肺系数;取肺组织行苏木素-伊红(HE)染色观察病理变化情况;免疫组化法测定肺组织中TGF-β、Smad7蛋白的表达情况.结果 进入结果分析的大鼠44只:①大鼠纤维化程度比较:模型组肺泡炎和肺纤维化程度较重,且胶原纤维沉积较多;中药组可见炎性细胞较少,肺泡结构基本正常,肺泡炎与肺纤维化较轻;激素组肺泡炎及纤维化减轻不明显.②TGF-β、Smad7蛋白表达量比较:中药组TGF-β蛋白表达明显低于模型组和激素组;Smad7蛋白表达明显高于模型组和激素组.结论 化瘀理肺方可明显减轻大鼠肺泡炎和肺纤维化的程度,可能通过促进Smad7蛋白的表达从而反馈抑制TGF-β蛋白的表达发挥作用.
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头颈部鳞状细胞癌组织中 Smad7、Smad4蛋白的表达变化及意义
目的：观察Smad7及Smad4蛋白在头颈部鳞状细胞癌组织中的表达变化，并探讨其意义。方法采用免疫组化SP法分别对头颈部鳞状细胞癌组织、癌旁组织、活检留取的正常头颈部组织中的Smad7蛋白、Smad4蛋白、TGF-β1表达进行检测，分析三者间表达及其与肿瘤临床病理参数的关系。结果①TGF-β1和Smad7蛋白在肿瘤组织中的表达水平明显高于癌旁组织和正常组织（F分别为5．71、7．31），而Smad4蛋白在肿瘤组织中的表达明显低于癌旁组织和正常组织（F为14．92），P均＜0．05。②随肿瘤分化程度增高，TGF-β1及Smad7蛋白表达呈降低趋势（F分别为11．2、12．8）、Smad4蛋白呈升高趋势（F为7．91），P均＜0．05；Smad4蛋白表达与肿瘤直径呈负相关、Smad7蛋白表达与肿瘤直径呈正相关（P均＜0．05），TGF-β1表达与肿瘤直径无明显相关（P＞0．05）；Smad4蛋白表达在淋巴结转移者明显低于无转移者（P＜0．05），有无淋巴结转移者Smad7蛋白及TGF-β1表达无显著差异（P＞0．05）。③Smad4蛋白表达与TGF-β1呈负相关（r＝-0．32），与Smad7蛋白呈正相关（r＝0．39），P均＜0．05。结论头颈部鳞状细胞癌组织中Smad7、Smad4蛋白表达异常，且可能通过调控上皮-间质转化参与肿瘤的侵袭、分化；检测两者（尤其是Smad4蛋白）可为临床分期、预后评估提供依据。
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外源性硫化氢对糖尿病肾病大鼠肾纤维化的影响及机制
目的 探讨外源性硫化氢(H2 S)对糖尿病肾病大鼠肾纤维化的影响及其机制.方法 将27只健康雄性SD大鼠腹腔注射链尿佐菌素(STZ)建立2型糖尿病模型,8周后建立糖尿病肾病模型.选取糖尿病肾病模型大鼠20只,另选取正常大鼠20只,分为正常对照组(Control+saline组)、H2 S对照组(Control+NaHS组)、模型组(DN+saline组)、H2 S治疗组(DN+NaHS组),每组10只.予以DN+saline组和Control+NaHS组大鼠腹腔注射NaHS溶液100μmol/(kg·d),予以Control+saline组和DN+saline组腹腔注射等量生理盐水.持续8周后,收集24 h尿液,采用考马斯亮蓝G-250法检测24 h尿蛋白定量(24 h Upro);心脏采血、留取血清,采用全自动生化分析仪检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)水平;取肾脏组织,采用HE染色法观察肾脏组织病理学表现,Western blotting法检测肾脏组织转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad7蛋白表达,免疫组化法检测肾脏纤维化相关蛋白纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)、ɑ-平滑肌肌动蛋白(ɑ-SMA)表达.结果 与Control+saline组相比,DN+saline组大鼠BUN、SCr和24 h Upro升高(P均<0.05),肾脏病理损伤明显加重,肾脏组织FN、LN、ɑ-SMA、TGF-β1蛋白表达上调(P均<0.05),Smad7蛋白表达下调(P<0.05);与DN+saline组相比,DN+NaHS组大鼠BUN、SCr、24 h Upro降低(P均<0.05),肾脏病理损伤明显减轻,肾脏组织FN、LN、ɑ-SMA、和TGF-β1蛋白表达下调(P均<0.05),Smad7蛋白上调(P均<0.05).结论 外源性H2 S可明显改善糖尿病肾病大鼠的肾纤维化,其机制可能与调控TGF-β1/Smad7信号通路有关.
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B7-H3和Smad7蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨B7-H3和Smad7蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达水平及临床意义.方法 收集82例ESCC组织标本及其癌旁正常组织石蜡标本,运用免疫组织化学方法检测B7-H3及Smad7蛋白的表达.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织中B7-H3 mRNA 的表达水平.结果 B7-H3在ESCC组织中的表达阳性率高于癌旁正常组织,Smad7蛋白表达阳性率低于癌旁正常组织(P＜0.05).ESCC组织中B7-H3和Smad7蛋白的表达呈负相关(rs=-0.294,P=0.005).ESCC组织中B7-H3蛋白表达与临床分期、分化程度有关(P＜0.05),Smad7蛋白表达与分化程度有关(P＜0.05).结论 ESCC组织中B7-H3蛋白表达上调,Smad7蛋白表达下调.B7-H3和Smad7蛋白的异常表达可能参与了ESCC的发生发展过程.
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垂盆草总黄酮对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1和Smad7表达的影响
目的:观察垂盆草总黄酮( SSTF)对CCL4诱导肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1和Smad7蛋白及mRNA表达的影响. 方法:60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、SSTF低剂量组( 100 mg · kg-1 )、SSTF中剂量组( 200 mg · kg-1 )、SSTF高剂量组(400 mg·kg-1 )和秋水仙碱阳性药对照组,共6组,每组10只. CCl4皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型,同时SSTF灌胃干预,7周后处死大鼠. 采用Masson染色法检测大鼠肝脏组织病理学改变,Western blotting法检测肝脏组织TGF-β1和Smad7蛋白表达,实时定量RT-PCR检测肝脏组织TGF-β1和Smad7mRNA表达. 结果: 与模型组比较,SSTF各剂量均能显著降低CCL4诱导的肝纤维化程度(P<0. 05);中高剂量可以显著减少肝组织中TGF-β1蛋白和mRNA表达(P<0. 05),并且明显增加Smad7蛋白和mRNA表达(P<0. 05). 结论:SSTF可有效地逆转实验性大鼠肝纤维化,其机制可能与下调肝组织中TGF-β1蛋白和mRNA表达,及增加Smad7蛋白和mRNA表达有关.
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姜黄素对糖尿病大鼠肾脏病变的作用及对肾脏Smad7表达的影响
目的探讨姜黄素对糖尿病大鼠肾脏病变的作用及对肾脏Smad7蛋白表达的影响.方法诱导大鼠糖尿病后,随机分为对照组及治疗组,比较各组的血生化、尿微量白蛋白排泄量、肾脏病理改变及Smad7的免疫组化.结果糖尿病大鼠内生肌酐清除率(Ccr)、尿微量白蛋白(mAlb)排泄量较正常鼠增多,系膜基质增生,Smad7表达明显下降;姜黄素治疗能明显降低Ccr(P＜0.05),减少Alb排泄量(P＜0.05),抑制系膜基质增生,上调Smad7的表达(P＜0.05).结论姜黄素对糖尿病肾病具有明显疗效,其机制至少部分是通过上调Smad7的表达,拮抗转化生长因子-β的作用,从而抑制肾脏纤维化.
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丹参酮Ⅱ A对肝癌细胞MHCC97-H Smad3/Smad7蛋白及上皮间质转化的影响
目的:探讨丹参酮Ⅱ A对肝癌细胞MHCC97-H Smad3、Smad7蛋白及上皮间质转移标志蛋白E-cadherin/N-cadherin表达水平及侵袭转移能力的影响.方法:10 μM丹参酮Ⅱ A处理MHCC97-H细胞,实时定量PCR检测细检测Smad3、Smad7和snail的mRNA表达;用不同浓度丹参酮Ⅱ A及10％小牛血清对照组培养肝癌细胞MHCC97-H,48h后,Western blot检测Smad3、p-Smad3、Smad7、Snail、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达水平.划痕法和Transwell小室检测肝癌细胞侵袭/迁移能力.结果:10 μM丹参酮Ⅱ A处理MHCC97-H细胞,不同时间点检测Smad3、Smad7和snail的mRNA表达:结果显示,与0h相比,48 h及72 hSmad7的表达量明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);Smad3及snail的差异无统计学意义.不同浓度丹参酮Ⅱ A处理MHCC97-H细胞48 h,Western blot检测Smad3、p-Smad3、Smad7、snail、E-cadherin、EpCAm、N-cadherin和Vimentin蛋白表达:结果显示,与对照组相比,高浓度丹参酮Ⅱ A组(20 μM)48 h的p-Smad3、Snail和N-cadherin、Vimentin明显降低,Smad7、E-cadherin和EpCAM明显升高(P＜0.05).中浓度丹参酮Ⅱ A组(10 μM)48 h的Smad7、E-cadherin和EpCAM升高;p-Smad3、snail、N-cadherin和Vimentin降低(P＜0.05).低浓度丹参酮Ⅱ A组(5μM)48 h的E-cadherin升高,N-cadherin降低(P＜0.05);而Smad3、p-Smad3及snail的结果与对照组无明显差异(P＞0.05).不同浓度的丹参酮Ⅱ A组和对照组(DMSO)Smad3的蛋白表达无影响.不同浓度的丹参酮Ⅱ A组均可以减少p-Smad3和增加E-cadherin的表达,且随着丹参酮Ⅱ A浓度增高p-Smad3的表达逐渐减少,E-cadherin的表达逐渐增加.划痕法结果显示,与对照组比较,24h后中浓度和高浓度丹参酮Ⅱ A组肝癌细胞的划痕愈合较慢,差异均有统计学意义(P＜0.05);48 h后中浓度和高浓度丹参酮Ⅱ A组与对照组相比,肝癌细胞的划痕愈合明显减慢,差异有统计学意义(P＜0.01);且同等浓度丹参酮Ⅱ A组肝癌细胞的划痕愈合与24h相比较,48 h肝癌细胞的划痕愈合减慢.transwell显示,与对照组相比,中浓度和高浓度丹参酮Ⅱ A处理细胞48 h可明显减少细胞的侵袭,差异有统计学意义(P＜0.05).而低浓度丹参酮Ⅱ A无明显影响,差异无统计学意义.结论:丹参酮Ⅱ A能抑制肝癌细胞侵袭转移,可能与与抑制Smad3蛋白磷酸化、上调Smad7蛋白,并抑制上皮间质转化有关.
