下调miR-25对高糖诱导视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞Smad7和VEGF表达的影响

目的 研究miR-25在高糖条件下人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞中表达情况,及下调miR-25对ARPE-19细胞中Smad7和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 体外培养ARPE-19细胞,采用葡萄糖(30 mmol/L)处理细胞模拟高糖状态,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-25表达水平;采用Lipo-fectamineTM3000试剂盒进行转染,将ARPE-19细胞分为miR-25低表达(antagomir)组、阴性对照(NC)组、高糖(HG)组及正常葡萄糖(NG)组.转染后48 h,光学显微镜观察细胞形态,CKK-8法检测细胞增殖情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ARPE-19细胞E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)mR-NA表达;蛋白免疫印记(WB)检测E-cad、α-SMA、COL-Ⅰ、VEGF、Smad7蛋白表达情况.结果 与NG组比较,HG组ARPE-1细胞miR-25表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);转染miR-25 antagomir后,与HG组和NC组比较,ARPE-19细胞miR-25表达显著下调(P<0.05).与NG组比较,HG组、NC组ARPE-19细胞变长呈纺锤形细胞,细胞中 α-SMA、COL-Ⅰ、VEGF表达上调(P<0.05),E-cad、Smad7表达下调(P<0.05);与HG组、NC组比较,antagomir组纺锤形ARPE-19细胞数量减少,细胞中 α-SMA、COL-Ⅰ、VEGF表达下调(P<0.05),E-cad、Smad7表达上调(P<0.05).结论 高糖条件下,下调miR-25可抑制VEGF表达,促进Smad7表达,抑制人视网膜色素上皮细胞纤维化.

非吸烟女性肺腺癌组织中miRNAs的表达与表皮生长因子受体关系的研究

目的：探讨非吸烟女性肺腺癌(ADC)组织中miR-155、miR-16、miR-25及miR-133a的表达与表皮生长因子受体（EGFR）的关系及其临床意义。方法112例非吸烟女性ADC患者按EGFR类型分为EGFR野生型组（n=51）和EGFR突变型组（n=61）。用实时荧光定量PCR定量检测2组ADC组织中4种miRNAs的表达量，比较2组4种miRNAs表达水平的差异。4种miRNAs表达量以平均数分层为高表达组和低表达组，比较2亚组患者间的生存差异。按年龄（≤60岁，＞60岁）、EGFR类型和miRNAs的表达量分层，进行Kaplan-Meier生存分析和Cox比例风险回归模型检验。结果 EGFR突变型组miR-25的表达水平高于EGFR野生型组（P<0.05）。不同年龄分层、不同EGFR类型组、miR-155、miR-16及miR-133a表达量患者的生存率差异无统计学意义，miR-25低表达者的生存率较高表达者更高（P<0.05）。在EGFR突变型组中4种miRNAs的表达量与ADC预后无关（P>0.05）；在EGFR野生型组中miR-16、miR-25、miR-133a低表达者较高表达者生存率更高（P<0.05）。Cox比例风险回归分析显示， miR-25高表达是非吸烟女性ADC患者预后死亡的独立危险因素（P<0.05）。结论 miR-25是非吸烟女性ADC的独立预后指标。miR-25在非吸烟女性ADC，特别是在EGFR野生型的患者中表达升高，可能提示患者预后不佳。

miR-25对P19细胞向心肌细胞分化的影响及机制

背景：既往研究发现，miR-25在向心肌分化的P19细胞中的表达水平显著低于其在未分化的P19细胞中的表达水平，但是其对心脏发育的影响及其机制尚不明确。
　　目的：探索miR-25对P19细胞向心肌细胞分化的影响及其机制。
　　方法：体外培养P19细胞并向心肌细胞诱导分化。通过实时反转录PCR检测miR-25在向心肌分化的和未分化的P19细胞中的表达水平。通过脂质体转染构建miR-25过表达的P19细胞，观察miR-25对P19细胞向心肌细胞分化的影响。通过miRNA靶基因预测数据库预测miR-25的靶基因，并利用荧光素酶报告基因实验检测miR-25对Pax3的靶向作用，沉默Pax3，观察Pax3对P19细胞向心肌细胞分化的影响。
　　结果与结论：miR-25在分化的P19细胞中表达水平较低。miR-25过表达能够促进P19细胞向心肌细胞分化。靶基因预测分析Pax3为miR-25潜在的靶基因，荧光素酶实验进一步证实Pax3是miR-25的直接靶点，Pax3沉默促进P19细胞向心肌细胞分化。提示miR-25通过靶向Pax3促进P19细胞向心肌细胞分化，为心脏发育以及先天性心脏病的防治提供新的线索和理论依据。

miR-196b、miR-25在儿童急性髓细胞白血病中的表达及临床意义

目的 探讨初诊AML患儿miR-196b、miR-25的表达及其临床意义.方法 从骨髓标本库中随机抽取2012-2013年收集的20例初诊AML以及20例非白血病对照标本,利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-196b、miR-25的相对表达量.结果 miR-196b的相对表达量在患者和对照组间有显著差异(P＜0.05);在危险度分组中,miR-196b在高危组、中危组和低危组有显著差异(P＜0.05);在WBC＜ 10万/mm3和≥10万/mm3组间,miR-196b表达有显著差异(P＜0.05);在一疗程缓解组/未缓解组,miR-25表达有显著差异(P＜0.05);在染色体核型预后良好组/预后不良组间,miR-196b表达水平具有显著差异(P＜0.05),核型不良组miR-196b表达水平增高;而miR-25呈低表达现象,差异有显著统计学意义(P＜0.05).结论 miR-196b在初诊AML患儿中明显高表达,高表达的miR-196b与不良预后相关;miR-25的表达水平增高提示着良好的早期治疗反应和预后.这些miRNAs有望成为儿童AML早期诊断、治疗及判断预后的独特生物标记物.

非小细胞肺癌患者血清中miR-25的表达水平及筛查价值

目的 检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者血清miR-25的表达水平,探讨其对NSCLC的筛查价值.方法 采集南京军区南京总医院82例未经治疗的NSCLC患者(TNM Ⅰ期4例、Ⅱ期10例、Ⅲ期11例、Ⅳ期53例及未知者4例)和82例年龄、性别匹配的健康人对照血清样本,实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测患者及对照血清miR-25的表达水平,并通过ROC曲线评估血清miR-25对NSCLC的筛查价值.结果 NSCLC患者血清miR-25的表达水平明显高于健康人对照组(0.017 ±0.028 vs 0.004±0.004,t=4.098,P＜0.01).血清miR-25用于筛查NSCLC的ROC曲线下面积(AUGROc)为0.818(95％ CI:0.753～ 0.882),敏感性为70.7％,特异性为80.7％;血清miR-25筛查Ⅰ/Ⅱ期NSCLC患者的AUGROC为0.852(95％ CI:0.728 ～0.976),敏感性和特异性分别为78.6％和87.8％.Logistic回归分析显示,miR-25是NSCLC的独立危险因素(OR=10.84,95％ CI:5.07 ～23.19,P＜0.01).结论 NSCLC患者血清中miR-25表达水平升高,有望成为NSCLC辅助筛查的新型分子标志物.

Hsa-miR-106b-25簇的靶基因预测及生物信息学分析

目的 Hsa-miR-106b-25簇涉及肿瘤的多种生物学过程,文中对hsa-miR-106b-25簇:miR-106b、miR-93、miR-25进行靶基因的预测及功能分析,为进一步研究这3个miRNAs的功能及他们之间的相互作用调节机制提供线索. 方法 应用miRBase数据库获取miR-106 b、miR-93及miR-25的序列信息,选择TargetScan、PicTar、miRanda 3种在线靶基因预测软件分别预测它们的靶基因,取交集并结合miRTarbase数据库中3种及3种以上实验验证过的靶基因作为进一步生物信息学分析的基因集合;分别对基因集合进行生物过程的功能富集分析,pathway 分析及蛋白互作分析. 结果 hsa-miR-106b-25簇的预测靶基因富集于多个生物学过程及功能,其生物过程主要集中于:大分子新陈代谢调节、代谢过程的调节、细胞周期;KEGG通路主要富集于:胶质瘤、黑色素瘤、前列腺癌、胆囊癌等肿瘤相关通路,蛋白互作显示基因簇中3个成员miRNA的预测靶基因编码蛋白质间存在复杂的相互作用,靶基因KAT2B、PTEN、TP53、CDH1、MDM2、E2F1、RB1、SMAD7编码蛋白在互作网络中具有核心地位. 结论 miR-106 b-25簇中的3个成员通过调控细胞周期的转换作用于肿瘤通路过程进而调节下游靶蛋白参与肿瘤的发生过程.

下调miR-25抑制胃癌细胞增殖和诱导其凋亡的作用研究

目的 探讨下调miR-25对胃癌SGC-7901细胞增殖凋亡的影响及可能的作用机制.方法 将SGC-7901细胞分为对照组(不做处理)、阴性组(转染miR-25 inhibitor control)和干扰组(转染miR-25 inhibitor)3组,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测转染效果,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测miR-25对SGC-7901细胞增殖影响,流式细胞仪检测miR-25对细胞凋亡的影响,蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测各组细胞中PTEN蛋白表达量.结果 转染miR-25 inhibitor后,细胞中miR-25的表达量较对照组显著降低(P<0.05),阴性组和对照组间差异无统计学意义(P>0.05).与对照组相比,干扰组中细胞存活率显著降低,凋亡率显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05).干扰组细胞中PTEN蛋白的表达量较对照组明显增加(P<0.05),对照组和阴性组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 下调miR-25可抑制胃癌SGC-7901细胞增殖和诱导细胞凋亡,其作用机制可能与上调PTEN蛋白的表达有关.

miR-25在胃癌组织中的表达及其意义

目的 探讨miR-25在胃癌组织中的表达及与临床病理因素和预后之间的关系.方法 用茎-环RT-qPCR检测86例胃癌组织和20例正常胃组织中miR-25的表达情况,分析miR-25的表达与胃癌临床病理特征和预后的关系.结果 茎-环RT-qPCR能特异扩增miR-25.miR-25在胃癌组织中的表达量高于正常胃组织(7.495±1.073vs 1.083±0.126,P＜0.001)；在有淋巴结转移的胃癌组织中的表达高于无淋巴结转移的胃组织(8.589±0.964 vs 5.649±1.257,P ＜0.001)；在TNM分期Ⅲ～Ⅳ期胃癌组织中的表达高于Ⅰ～Ⅱ期(8.117±1.002vs 6.273±1.215,P＜0.001).miR-25高表达组的中位生存期和3年生存率低于miR-25低表达组(34.9个月vs 43.8个月,38.7％ vs66.2％,P=0.006).结论 胃癌组织高表达miR-25,miR-25可能是胃癌的诊断、预后判断标志和治疗靶标.

miR-25在胃癌组织中的表达

目的 分析胃癌组织中miR-25的表达及其靶基因预测.方法 选取胃癌及配对癌旁正常组织标本30例,应用荧光定量PCR检测miR-25的表达水平,利用生物信息学软件、荧光素酶实验和Western blot预测和验证miR-25的靶基因.结果 miR-25在胃癌组织中的表达显著高于配对的癌旁正常组织(P＜0.05).荧光素酶实验和Westem blot实验表明F框/WD-40域蛋白7(FBXW7)是miR-25的靶基因.FBXW7在胃癌组织中表达显著下降(P＜0.05).结论 miR-25在胃癌组织中高表达,可能在胃癌的发病中发挥重要作用.

miR-25靶向抑制KLF4促进胃癌细胞增殖

目的:探讨microRNA-25(miR-25)是否靶向抑制KLF4基因调控胃癌细胞生长,阐明miR-25在胃癌细胞中的作用及其机制.方法:qRT-PCR技术检测35对胃癌及癌旁组织中miR-25及KLF4的表达.运用生物信息学分析软件Targetscan预测miR-25的靶基因.双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-25是否靶向抑制KLF4.分别下调miR-25及干扰和过表达KLF4后采用MTT及克隆形成实验检测细胞增殖.挽救实验验证KLF4是否能减弱miR-25的生物学功能.结果:miR-25在胃癌组织中高表达,KLF4呈低表达.抑制miR-25能显著降低胃癌细胞的增殖,上调miR-25的表达结果则相反.miR-25负调控KLF4促进胃癌细胞增殖,而过表达KLF4能明显减弱miR-25的促增殖效应.结论:miR-25靶向抑制KLF4促进胃癌细胞增殖.

血清miR-101与miR-25在胃癌手术患者中的检测价值

目的 研究血清miR-101与miR-25在胃癌手术患者中的检测价值.方法 选取2014年1月至2016年12月于连云港市赣榆区人民医院接受手术治疗的82例胃癌患者(胃癌组)为研究对象,运用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测82例患者术前及术后静脉血标本中miR-101与miR-25的表达水平,将术前、术后miR-101及miR-25表达水平进行分析比较.另选40例健康人作为对照组.结果 胃癌组患者术前miR-101的相对表达水平为0.732±0.147,术后为1.543±0.262;对照组miR-101的相对表达水平为2.394±0.476;胃癌组患者术前、术后的血清miR-101表达水平均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);胃癌组患者术后miR-101的相对表达水平高于术前,差异有统计学意义(P<0.05).胃癌组患者术前miR-25的相对表达水平为2.648±0.262,术后为1.271±0.270;对照组miR-25的相对表达水平-0.087±0.019;胃癌组患者术前、术后的血清miR-25表达水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);术后miR-25的相对表达水平低于术前,差异有统计学意义(P<0.05).结论 miR-101与miR-25的表达水平可以作为胃癌诊断的标志物.

miR-25靶向RECK促进宫颈癌HeLa细胞的增殖

目的 探讨微小RNA-25(miR-25)对宫颈癌HeLa细胞增殖活性的影响及其与逆向诱导的带Kazal基序的富含半胱氨酸蛋白(RECK)的靶向关系.方法 构建pcDNATM6.2-GW-pre-miR-25、pmirGLO-野生型RECK (RECK-WT)和突变型RECK(RECK-MT)真核表达载体及miR-25抑制剂(anti-miR-25),采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测pre-miR-25和anti-miR-25在HeLa细胞中的转染效率,并采用MTT法分析miR-25对HeLa细胞增殖活性的影响,双萤光素酶报告基因、qRT-PCR和Westernblot法检测miR-25与RECK靶向关系.结果 测序结果显示pcDNATM6.2-GW-pre-miR-25、pmirGLO-RECK-WT和pmirGLO-RECK-MT重组载体构建成功,qRT-PCR提示pre-miR-25与anti-miR-25在HeLa细胞中具有良好的转染效率.MTT结果显示miR-25能够明显促进HeLa细胞的增殖.双萤光素酶报告基因检测显示共转染pre-miR-25与RECK-WT的HeLa细胞其萤光活性显著下降,同时qRT-PCR及Western blot也显示anti-miR-25在转录和转录后水平均能够显著增加HeLa细胞中RECK的表达.结论 miR-25能够靶向RECK,促进宫颈癌HeLa细胞的增殖.

血清miR-25和miR-100作为食管鳞状细胞癌诊断和预后标志物研究

目的 探讨血清miR-25和miR-100对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)的诊断和预后价值.方法 收集2011年6月～2014年5月南京军区南京总医院及徐州市肿瘤医院63例ESCC患者术前、术后及随访血清,并收集63例年龄、性别匹配的非癌健康人血清作为对照;实时荧光定量PCR法检测血清miR-25和miR-100含量.用非参数Mann-Whitney U检验ESCC患者组和对照组血清miR-25和miR-100表达水平的差异,配对t检验分析ESCC患者术前术后血清中miR-25和miR-100的表达量变化,受试者工作特征曲线(ROC)评估血清miR-25和miR-100对ES-CC的诊断价值,单因素Kaplan-Meier法分析对ESCC患者生存的影响.结果 与健康对照相比,ESCC患者血清miR-25(0.40±0.20 vs 0.02±0.01)和miR-100的相对含量(0.10±0.02 vs 0.04±0.00)显著升高,差异具有统计学意义(U值分别为885.0和1 006.0,P值均＜0.01);血清miR-25和miR-100的ROC曲线下面积AUC均明显大于癌胚抗原;ESCC患者术后血清miR-100含量较术前明显降低(0.07±0.01 vs 0.10±0.02),差异具有统计学意义(t=2.367,P=0.021);单因素Kaplan-Meier法分析显示血清miR-25和miR-100表达阴性的ESCC患者的生存期明显高于阳性患者(P＜0.05).结论 血清miR-25和miR-100可作为ESCC诊断及预后评估的潜在标志物.

miR-25对三阴性乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制

目的:研究miR-25对人三阴乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能机制.方法:在人TNBC细胞株MDA-MB-231中转染miR-25抑制核苷酸(AS-miR-25)或对照核苷酸(NC oligo),通过MTF法和流式细胞术分别检测细胞的增殖和凋亡;采用实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot测量凋亡调节因子1(modulator of apoptosis 1,MOAP1)蛋白质和mRNA表达水平变化,采用双荧光素报告系统检测miR-25对MOAP1的直接调节.采用AS-miR-25和MOAP1 siRNA共转染MDA-MB-231细胞,MTT和流式细胞术检测细胞增殖、凋亡的变化.结果:下调miR-25后,MDA-MB-231细胞的增殖能力较对照明显降低(P＜0.05),凋亡显著增加(P＜0.05),MOAP1 mRNA和蛋白质表达水平显著增高(P＜0.05).双荧光素报告实验显MOAP1受miR-25的直接调节.共转染AS-miR-25和MOAP1 siRNA可显著缓解下调miR-25引起的增殖抑制和诱导凋亡.结论:miR-25可通过下调MOAP1表达水平调节TNBC细胞增殖和凋亡,提miR-25在TNBC恶生物学进程中可能发挥重促进作用.

miR-25在骨肉瘤诊断和预后中的作用

目的 研究微小RNA-25(miR-25)表达水平在骨肉瘤诊断和预后中的作用.方法 收集2012年6月至2017年5月在河南省新乡市第一人民医院确诊的86例骨肉瘤切除术患者的骨肉瘤组织及瘤旁组织,实时荧光定量PCR检测miR-25的表达,ROC分析miR-25表达在骨肉瘤中的诊断作用,COX回归分析评估miR-25表达在骨肉瘤预后中的作用.Kaplan-Meier分析miR-25表达对骨肉瘤患者生存时间的影响.结果 和骨肉瘤瘤旁组织相比,骨肉瘤组织中miR-25的表达显著升高(P<0.05);ROC分析表明miR-25表达诊断骨肉瘤的曲线下面积(area under the cure,AUC)为0.946(95％CI:0.908～0.985),当miR-25相对表达水平为2.84时,其诊断的敏感度和特异性分别为89.5％(77/86)和94.2％(81/86).COX回归进行单变量和多变量分析表明miR-25的高表达、肿瘤的转移和临床分期是骨肉瘤患者的独立危因素.Kaplan-Meier分析显示低表达组(miR-25<3.43)和高表达组(miR-25≥3.43)相比骨肉瘤患者的生存时间存在显著差异(P<0.05),说明miR-25的表达越高骨肉瘤患者的预后越差.结论 miR-25能够作为诊断和预后不良预测的标志物.

miR-25modulates NSCLC cell radio-sensitivity through directly inhibiting BTG2expression